不同溶劑對(duì)柴胡中柴胡皂苷ａ溶出效果的影響

姜華 李軍 徐強(qiáng) 申屠平安

【摘 要】目的：基于目前柴胡提取溶劑無一定論的現(xiàn)狀，考察并確定柴胡的最佳提取溶劑。方法：采用高效液相色譜法測(cè)定不同溶劑對(duì)藥材中柴胡皂苷a的提取量。結(jié)果：中性乙醇-水溶劑系統(tǒng)中，50%乙醇對(duì)柴胡皂苷a的提取效率最高，堿性乙醇-水溶劑系統(tǒng)中，堿性50%乙醇的效果較好，且效果優(yōu)于50%乙醇。結(jié)論：當(dāng)提取的目的僅是柴胡皂苷a時(shí)，用堿性50%乙醇作為提取溶劑，其他情況，建議采用50%乙醇作為柴胡的提取溶劑。

【關(guān)鍵詞】柴胡;柴胡皂苷a;高效液相色譜法

【中圖分類號(hào)】R917 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A【文章編號(hào)】1007-8517（2019）5-0023-04

柴胡是傘形科柴胡屬植物的干燥根，為常用中藥，具有解熱鎮(zhèn)痛、利膽保肝的作用。柴胡皂苷a是柴胡藥材的主要有效成分，是含有柴胡類中成藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中重要的檢測(cè)指標(biāo)。在目前的中成藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)體系下，提高藥材中柴胡皂苷a的溶出度無疑是提取工藝研究的重點(diǎn)，其中溶劑種類的選擇尤為重要。目前有文獻(xiàn)對(duì)柴胡的提取溶劑進(jìn)行優(yōu)選，然而得出的結(jié)論卻差異較大，有高濃度的乙醇，如70%乙醇[1-2]，有堿性高濃度乙醇，如含5%氨水的95%乙醇[3]，亦有常規(guī)提取溶劑水[4]?？梢?，從已有的相關(guān)文獻(xiàn)判斷，并不能得到明晰的結(jié)論，這種狀況無法對(duì)相應(yīng)的科研和生產(chǎn)起指導(dǎo)作用。基于此，本文以藥材中柴胡皂苷a的溶出度為指標(biāo)，對(duì)不同溶劑對(duì)藥材中柴胡皂苷a溶出效果進(jìn)行考察，為合理選用柴胡的提取溶劑奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Waters 600-2487高效液相色譜儀;RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（鄭州長城科工貿(mào)）;KQ-500DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;METTLER-AE240型電子分析天平。

1.2 試藥 柴胡藥材購自洛陽關(guān)林藥材市場，經(jīng)河南科技大學(xué)尹衛(wèi)平教授鑒定為北柴胡Bupleurum chinense DC.的干燥根;柴胡皂苷a（自制，面積歸一化法測(cè)定其純度高于98%）;乙腈（DIKMA公司，色譜純），重蒸水自制，大孔樹脂（天津南開大學(xué)化工廠），其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取柴胡皂苷a 2.2mg，置于10mL量瓶中，加甲醇超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻，經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾，即得。

2.2 供試品溶液的制備[5] 稱取柴胡藥材10份，每份20g，分別用水、30%、50%、70%、95%乙醇和5%NaOH水溶液、5%NaOH-30%乙醇、5%NaOH-50%乙醇、5%NaOH-70%乙醇、5%NaOH-95%乙醇進(jìn)行提取。提取方式為10倍量溶劑，提取3次，每次1h。提取完畢后，將所得提取液合并，回收溶劑，真空干燥，得相應(yīng)浸膏。

分別稱取相當(dāng)于0.4g生藥的浸膏（以水為提取溶劑的樣品取相當(dāng)于2g生藥浸膏），加水溶解后，于AB-8型大孔吸附樹脂（內(nèi)徑1.2cm，柱長9cm）上樣，先用0.5mol/LNaOH 80mL洗脫，棄去;然后用水洗脫至中性（約40mL）;再用30%乙醇30mL洗脫，棄去;最后用95%乙醇100mL洗脫，搜集95%乙醇洗脫部分，水浴蒸干，用50%乙醇溶解轉(zhuǎn)至10mL量瓶中，用0.45μm微孔濾膜過濾，即得。

2.3 色譜條件 Hypersil-C18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）;流動(dòng)相：（見表1）;流速：1.0mL/min;柱溫：35℃;檢測(cè)波長：210nm;進(jìn)樣量：10.0μL。各樣品及標(biāo)準(zhǔn)品的HPLC色譜圖見圖1。

2.4 線性關(guān)系 考察分別精密吸取柴胡皂苷a對(duì)照品溶液2.5、5.0、7.5、10.0、12.5、15.0μL注入液相色譜儀，依“2.3”項(xiàng)下色譜條件分析并測(cè)定峰面積。以峰面積（A×10-6）與進(jìn)樣量（X）進(jìn)行線性回歸，得柴胡皂苷a的回歸方程為A =3.371X -0.0271（r = 0.9998）。結(jié)果表明，柴胡皂苷a在0.55～3.3μg范圍內(nèi)與其峰面積呈良好的線性關(guān)系。如圖2。

2.5 精密度試驗(yàn) 精密移取“2.2”中同一5%NaOH-30%乙醇作為提取溶劑的樣品溶液10.0μL，注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積。結(jié)果顯示柴胡皂苷a的峰面積RSD為 1.51%，說明精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密移取“2.2”中同一5%NaOH-30%乙醇作為提取溶劑的樣品溶液10.0μL，分別于0、2、5、10、12h注入液相色譜儀，依法測(cè)定柴胡皂苷a的峰面積。結(jié)果顯示柴胡皂苷a峰面積的RSD為1.83%，表明樣品在12h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取“2.2”中同一5%NaOH-30%乙醇作為提取溶劑的柴胡提取物5份，每份浸膏折合生藥材0.4g，依法富集其中的柴胡皂苷a并測(cè)定含量。結(jié)果顯示，以5%NaOH-30%乙醇作為提取溶劑從20g柴胡藥材中提取得到柴胡皂苷a的含量為97.5mg，RSD為2.10%。

2.8 回收率試驗(yàn) 精密稱取已測(cè)知含量的5%NaOH-30%乙醇作為提取溶劑的柴胡提取物5份，每份折合生藥材0.2g，加入適量對(duì)照品溶液，按樣品溶液的制備方法處理，并依法測(cè)定，計(jì)算柴胡皂苷a的回收率。結(jié)果見表2。

2.9 樣品測(cè)定 按照“2.3”項(xiàng)下柴胡皂苷a的分析方法對(duì)各樣品進(jìn)行測(cè)定，并計(jì)算折合20g柴胡生藥中柴胡皂苷a溶出量。結(jié)果見表3。

3 討論

3.1 溶劑中堿濃度的確定 柴胡皂苷a結(jié)構(gòu)中的環(huán)氧醚環(huán)不穩(wěn)定，在提取過程中易發(fā)生開裂，造成結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)化[6]，降低提取液中柴胡皂苷a的含量，而堿性溶劑可以抑制該過程的發(fā)生。因此，本文在考察提取溶劑的種類時(shí)增加了不同濃度的堿性乙醇，同時(shí)確定提取溶劑中氫氧化鈉的濃度為5%，因?yàn)樵谠摑舛认驴梢院芎玫囊种撇窈碥誥的結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)化。

3.2 提取方式的確定 柴胡中的有效成分包括揮發(fā)油和皂苷兩大類成分[7]，前者提取采用水蒸氣蒸餾法，后者以溶劑法為主。本文主要優(yōu)化皂苷的提取，并不涉及揮發(fā)油。有文獻(xiàn)[3，8]采用先提取柴胡揮發(fā)油，再提取藥渣中的皂苷的方式提取柴胡，以達(dá)到對(duì)柴胡的充分利用，但是這種提取方式在提取揮發(fā)油的過程中已經(jīng)有部分柴胡皂苷a發(fā)生結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)化，換句話說這種提取方式在顧忌了揮發(fā)油的同時(shí)損失了柴胡皂苷a的提取率。

3.3 提取溶劑種類的確定 由表3的測(cè)定結(jié)果可知，對(duì)于不同濃度的中性乙醇水溶劑系統(tǒng)，50%和70%的乙醇對(duì)柴胡皂苷a的溶出度較高，其次是30%的乙醇，再次是95%的乙醇，溶出度最差的是水溶液?？紤]到成本的因素，50%乙醇是中性溶劑系統(tǒng)中對(duì)柴胡皂苷a溶出度最佳的溶劑。對(duì)于不同濃度堿性乙醇，同樣50%的堿性乙醇表現(xiàn)出了對(duì)柴胡皂苷a的良好溶出能力，且比中性50%乙醇的溶出量高近30%?？梢?，堿性50%乙醇對(duì)柴胡皂苷a的溶出能力最強(qiáng)。然而，實(shí)際生產(chǎn)中，柴胡往往是與其他藥材一同進(jìn)行提取，如果采用堿性50%乙醇作為提取溶劑，那么在提高了柴胡皂苷a溶出度的同時(shí)，堿性環(huán)境極有可能對(duì)其他成分造成破壞，此時(shí)50%乙醇應(yīng)作為首選提取溶劑，而只有當(dāng)提取的目的僅僅是柴胡皂苷a時(shí)，可選用堿性50%乙醇作為提取溶劑。

中醫(yī)臨床用藥的主要形式是煎劑，作為煎劑的提取溶媒水在表3中顯示出對(duì)柴胡皂苷a較低的溶出度，由于中藥發(fā)揮作用的機(jī)理是多成分、多靶點(diǎn)起效，因而據(jù)此判斷水不宜作為柴胡的提取溶劑是不可取的，該方面還有待進(jìn)一步的深入研究。本文通過系統(tǒng)地考察提取溶劑對(duì)柴胡皂苷a溶出度的影響，為進(jìn)一步規(guī)范柴胡的提取工藝提供參考。

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（收稿日期：2018-12-25 編輯：劉斌）