ANO1蛋白在胃腺癌組織中表達(dá)及臨床意義

白璐 王濤 張喆

[摘要]目的 分析胃腺癌及正常胃黏膜組織切片中Anoamin1（ANO1）蛋白的表達(dá)情況，探討ANO1蛋白在胃腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用。方法 應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)2016年1月～2018年6月中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院78例胃腺癌、沈陽(yáng)金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所21例正常胃黏膜組織中ANO1蛋白的表達(dá)情況。分析對(duì)比ANO1蛋白在胃腺癌及正常胃黏膜組織中的表達(dá)差異，研究ANO1蛋白與胃腺癌患者臨床病理指標(biāo)之間的相關(guān)性。結(jié)果 胃腺癌組織中ANO1蛋白表達(dá)陽(yáng)性率為43.59%（34/78），高于正常胃黏膜組織的14.29%（3/21），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=6.070，P=0.014）。不同年齡、性別、腫瘤直徑、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及長(zhǎng)期飲酒情況下的ANO1蛋白表達(dá)陽(yáng)性率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；不同分化程度及HER2情況下的ANO1蛋白表達(dá)陽(yáng)性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）?；颊呶赶侔〢NO1蛋白表達(dá)與年齡、性別、腫瘤直徑、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及長(zhǎng)期飲酒情況無(wú)關(guān)（P>0.05），與腫瘤分化程度、HER2均成負(fù)相關(guān)（r=-0.276、-0.315，P=0.015、0.005）。結(jié)論 ANO1蛋白在胃腺癌中的表達(dá)升高，ANO1蛋白陽(yáng)性更多出現(xiàn)在腫瘤分化程度低、HER2蛋白陰性的患者中，ANO1蛋白在胃腺癌發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。

[關(guān)鍵詞]ANO1；胃腺癌；HER2

[中圖分類號(hào)] R73-3 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2019）5（b）-0008-04

[Abstract] Objective To analyze the expression of Anoamin1 （ANO1） protein in gastric adenocarcinoma and normal gastric mucosal tissue sections and to explore the role of ANO1 protein in the development of gastric adenocarcinoma. Methods Immunohistochemical method was used to detect the expression of ANO1 protein in 78 cases of gastric adenocarcinoma from Shengjing Hospital of China Medical University and the expression of ANO1 protein in 21 cases of normal gastric mucosa tissues from Shenyang Jinyu Medical Laboratory from January 2016 to February 2018. The difference in the expression of ANO1 protein in gastric adenocarcinoma and normal gastric mucosa was analyzed and compared， and the correlation between ANO1 protein and clinicopathological parameters of gastric adenocarcinoma patients was studied. Results The positive rate of ANO1 protein expression in gastric adenocarcinoma tissues was 43.59% （34/78）， which was higher than that in normal gastric mucosa tissues accounting for 14.29% （3/21）， and the difference was statistically significant （χ2=6.070， P=0.014）. There was no significant difference in the positive rate of ANO1 protein expression in different ages， genders， tumor diameters， depth of invasion， lymph node metastasis and long-term drinking （P>0.05）. The positive rate of ANO1 protein expression in different degrees of differentiation and HER2 was statistically significant （P<0.05）. The expression of ANO1 protein in gastric adenocarcinoma was not associated with age， gender， tumor diameter， depth of invasion， lymph node metastasis and long-term drinking status （P>0.05）. ANO1 protein expression was negatively correlated with tumor differentiation and HER2 （r=-0.276， -0.315； P=0.015， 0.005）. Conclusion The expression of ANO1 protein in gastric adenocarcinoma increases， and ANO1 protein positivity is more common in patients with low tumor differentiation and HER2 protein negative. ANO1 protein plays an important role in the development of gastric adenocarcinoma.

[Key words] ANO1； Gastric adenocarcinoma； HER2

胃癌是一種具有高侵襲性和致命性的惡性腫瘤，占全球新發(fā)癌癥病例的8.6%，是癌癥相關(guān)死亡的第二大原因[1]，其惡性程度高，多數(shù)患者死于腫瘤的復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。因此明確與胃腺癌發(fā)生及轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制有重要臨床指導(dǎo)意義。Anoamin1（ANO1）蛋白又稱為跨膜蛋白16A，是鈣離子激活氯離子通道蛋白家族成員之一[2]。研究表明ANO1多種惡性腫瘤中過(guò)表達(dá)且與患者的不良預(yù)后相關(guān)[3]。但ANO1蛋白在胃癌組織中的表達(dá)及臨床意義的報(bào)道少見(jiàn)。本研究擬采用免疫組織化學(xué)染色方法，檢測(cè)胃腺癌及正常黏膜組織中ANO1的表達(dá)，初步探索ANO1蛋白在胃腺癌發(fā)生發(fā)展中的潛在機(jī)制及臨床意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2016年1月～2018年6月中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院胃癌手術(shù)患者78例，以沈陽(yáng)金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所電子內(nèi)窺鏡活檢慢性胃炎樣本21例正常胃黏膜進(jìn)行對(duì)照?；颊吣挲g32～82歲，中位年齡64歲。78例胃癌患者均經(jīng)病理組織學(xué)證實(shí)診斷為胃腺癌，其中高分化胃腺癌16例，中分化胃腺癌34例，低分化胃腺癌28例?；颊唢嬀魄闆r以患者住院病歷為準(zhǔn)。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

1.2免疫組織化學(xué)染色

胃腺癌組織及正常胃黏膜蠟塊3 μm切片，采用二甲苯脫蠟，pH=6檸檬酸的檸檬酸修復(fù)抗原，3%去離子水封閉內(nèi)源性過(guò)氧化氫酶，ANO1一抗（美國(guó)Santa Cruz公司，產(chǎn)品序列sc-377115）1∶200倍稀釋在恒溫冰箱孵育過(guò)夜，二抗為山羊抗兔/鼠聚合物（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，產(chǎn)品序號(hào)PV-6000），DAB顯色劑及蘇木素染色均按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3觀察指標(biāo)及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

比較胃腺癌及正常胃黏膜組織中ANO1蛋白的表達(dá)情況，分析胃腺癌患者不同年齡、性別、腫瘤直徑、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度低、HER2及長(zhǎng)期飲酒情況下的ANO1蛋白表達(dá)陽(yáng)性率。

ANO1蛋白陽(yáng)性表達(dá)信號(hào)主要位于細(xì)胞膜/質(zhì)，參照文獻(xiàn)[4]判定標(biāo)準(zhǔn)，蛋白表達(dá)水平采用染色細(xì)胞面積及染色強(qiáng)度評(píng)分綜合判斷，染色面積與染色強(qiáng)度評(píng)分乘積≥4分計(jì)為陽(yáng)性，其中按照染色面積分<5%、5%～25%、>25%～50%、>50%分別為1、2、3、4分；按照染色強(qiáng)度分無(wú)陽(yáng)性、淺黃色、深黃色、褐黃色分別為0、1、2、3分。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料采用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性研究采用Spearman分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1胃腺癌及正常胃黏膜組織中ANO1蛋白的表達(dá)情況

ANO1蛋白免疫組織化學(xué)染色定位于細(xì)胞膜，陽(yáng)性細(xì)胞膜染色呈黃褐色（圖1，見(jiàn)封四）。78例胃腺癌患者組織中，34例ANO1蛋白陽(yáng)性，陽(yáng)性率為43.59%（34/78），高于正常胃黏膜組織的14.29%（3/21），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=6.070，P=0.014）。

2.2 ANO1蛋白在胃腺癌組織中的表達(dá)情況

不同年齡、性別、腫瘤直徑、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及長(zhǎng)期飲酒情況下的ANO1蛋白表達(dá)陽(yáng)性率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；不同分化程度及HER2情況下的ANO1蛋白表達(dá)陽(yáng)性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）（表1）。

2.3胃腺癌ANO1蛋白表達(dá)與臨床病理指標(biāo)的相關(guān)性分析

患者胃腺癌ANO1蛋白表達(dá)與年齡、性別、腫瘤直徑、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及長(zhǎng)期飲酒情況無(wú)關(guān)（P>0.05），與腫瘤分化程度、HER2均成負(fù)相關(guān)（r=-0.276、-0.315，P=0.015、0.005）（表2）。

3討論

胃腺癌是當(dāng)今世界上最常見(jiàn)的惡性腫瘤中之一，在我國(guó)消化道的惡性腫瘤中居第2位[1]。目前對(duì)于胃癌治療首選手術(shù)治療，術(shù)后輔助放療、化療等惡性腫瘤綜合治療，但由于腫瘤被發(fā)現(xiàn)時(shí)經(jīng)常已經(jīng)出現(xiàn)了腫瘤的轉(zhuǎn)移，療效并不滿意，因此探索腫瘤的發(fā)病機(jī)制，早期發(fā)現(xiàn)早期治療格外重要[5]。鈣激活的氯離子通道（CaCCss）分布在平滑肌細(xì)胞、心肌細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞等興奮細(xì)胞及上皮細(xì)胞等非興奮細(xì)胞，具有廣泛的生理作用。鈣激活的氯離子通道蛋白A（TMEM16A）家族是CaCCss的分子基礎(chǔ)，TMEM16A也因?yàn)楹嘘庪x子通道（Anion）又稱為ANO1[6]。研究表明ANO1在神經(jīng)細(xì)胞痛覺(jué)傳導(dǎo)[7]、唾腺體分泌[8]、Cajal胃腸間質(zhì)細(xì)胞正常慢波的形成[9]等多種生理過(guò)程中起重要作用。

近年來(lái)ANO1在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用成為研究的熱點(diǎn)，ANO1基因定位于人類染色體11q13，該區(qū)域在多種腫瘤中發(fā)生擴(kuò)增[10]，ANO1蛋白在多種腫瘤中被檢測(cè)到出現(xiàn)過(guò)表達(dá)。在頭頸部鱗癌[11]及食管鱗狀細(xì)胞癌[12]中ANO1出現(xiàn)過(guò)表達(dá)，并且是不良的預(yù)后的生物標(biāo)志物。Song等[13]研究者在前列腺癌中發(fā)現(xiàn)敲低ANO1后腫瘤壞死因子-α（TNF-α）信號(hào)增強(qiáng)，進(jìn)而導(dǎo)致磷酸化的Fas相關(guān)蛋白上調(diào)從而誘導(dǎo)前列腺細(xì)胞凋亡。在乳腺癌中抑制ANO1顯著抑制細(xì)胞的增殖[14]，另外在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤[15]中的研究中ANO1也被證實(shí)具有促癌作用。本研究中，ANO1在胃腺癌組織中表達(dá)率顯著高于正常胃黏膜（P<0.05），臨床病理資料分析顯示，分化程度越低的胃腺癌ANO1蛋白表達(dá)越高，筆者推測(cè)在胃腺癌中過(guò)表達(dá)的ANO1具有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖的作用，與相關(guān)學(xué)者們?cè)谄渌[瘤中的研究結(jié)論類似。

由于ANO1在腫瘤組織的過(guò)表達(dá)被廣泛證實(shí)，有效的和選擇性的ANO1抑制劑可以為癌癥治療提供新的策略。遺傳藥理學(xué)研究表明抑制ANO1可以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和促進(jìn)細(xì)胞周期停滯于G1期[16]。HER2基因在乳腺癌、胃腺癌等多種惡性腫瘤中過(guò)表達(dá)，在胃腺癌中HER2蛋白陽(yáng)性表達(dá)差異較大[17]，HER2擴(kuò)增的胃腺癌患者應(yīng)用曲妥珠單抗可以提高總緩解率、煙草患者存活時(shí)間[18]。在乳腺癌的研究中發(fā)現(xiàn)，ANO1與HER2成負(fù)相關(guān)，對(duì)靶向HER2的單克隆抗體曲妥珠單抗耐藥的細(xì)胞表現(xiàn)出ANO1表達(dá)增加[19]。ANO1可能作為HER2的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，ANO1抑制劑可以改善患者對(duì)HER2靶向治療的敏感性甚至逆轉(zhuǎn)耐藥[20]。本研究結(jié)果提示，胃腺癌患者中的ANO1蛋白與HER2成顯著的負(fù)相關(guān)（P<0.05），因此筆者推測(cè)在胃腺癌患者化療藥物應(yīng)用上尤其是HER2陰性或曲妥珠單抗耐藥中檢測(cè)ANO1蛋白的表達(dá)，必要時(shí)使用ANO1的特異性抑制劑輔助治療可能對(duì)改善患者預(yù)后有益。但對(duì)于ANO1和HER2在胃癌中的具體作用機(jī)制尚不夠明確，仍需通過(guò)進(jìn)一步的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)來(lái)闡明具體的分子作用機(jī)制。

綜上所述，本研究在胃腺癌組織中證實(shí)ANO1的異常表達(dá)與胃癌的發(fā)生關(guān)系密切，因此病理診斷時(shí)檢測(cè)ANO1蛋白可能對(duì)疾病診斷有益。ANO1與腫瘤分化程度、HER2蛋白成負(fù)相關(guān)，HER2蛋白陰性患者中ANO1蛋白陽(yáng)性更常見(jiàn)，ANO1可能是胃癌治療中的新型預(yù)后生物標(biāo)志物和潛在的治療靶標(biāo)。

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（收稿日期：2018-12-04 本文編輯：任秀蘭）