Arpin蛋白在前列腺癌中的表達及臨床意義

韓東岳 趙海軍 綦海燕

[摘要]目的 探討Arpin蛋白在前列腺癌中的表達及臨床意義。方法 收集2013年1月～2014年9月青島市市立醫(yī)院136例前列腺癌患者及120例前列腺增生患者的臨床資料。應用免疫組化技術檢測Arpin蛋白在前列腺癌及前列腺增生組織中的表達水平?；仡櫺苑治鯝rpin蛋白與前列腺癌患者臨床病理特征和生存率的關系。結果 與前列腺增生組織比較，前列腺癌組織中的Arpin蛋白表達降低（28.68% vs. 70.00%，χ2=43.611，P<0.001）。Arpin蛋白表達水平與TNM分期、Gleason評分、淋巴結轉(zhuǎn)移密切相關（P<0.05）。多變量Cox回歸分析顯示，Arpin蛋白表達（HR：0.341；95%CI：0.193～0.601；P<0.001）是前列腺癌患者無病生存期的獨立預后指標。結論 Arpin蛋白在前列腺癌組織中呈低表達，且與前列腺癌的臨床病理特征存在相關性，影響前列腺癌的不良預后。

[關鍵詞]Arpin蛋白；前列腺癌；臨床病理特征；預后

[中圖分類號] R737.25 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2019）5（b）-0021-04

[Abstract] Objective To investigate the expression and clinical significance of Arpin protein in prostate cancer. Methods Altogether the data of 136 patients with prostate cancer and 120 patients with benign prostatic hyperplasia were collected from January 2013 to September 2014 in Qingdao Municipal Hospital. Immunohistochemical technique was used to detect the expression of Arpin protein in prostate cancer and prostatic hyperplasia. The relationship between Arpin protein and clinicopathological features and survival rate of patients with prostate cancer was analyzed retrospectively. Results Compared with benign prostatic hyperplasia， the expression of Arpin protein in prostate cancer decreased （28.68% vs. 70.00%， χ2=43.611， P<0.001）. The expression of Arpin protein was closely related to TNM stage， Gleason score and lymph node metastasis （P<0.05）. Multivariate Cox regression analysis showed that Arpin protein expression （HR： 0.341； 95% CI： 0.193-0.601； P<0.001） was an independent prognostic indicator of disease-free survival in prostate cancer patients. Conclusion The expression of Arpin protein in prostate cancer tissue was low， and correlated with the clinicopathological characteristics of prostate cancer， which affects the adverse prognosis of prostate cancer.

[Key words] Arpin protein； Prostate cancer； Clinicopathological characteristics； Prognosis

前列腺癌（prostate cancer，PCa）的發(fā)病率在全世界男性惡性腫瘤中位居第二位。據(jù)統(tǒng)計，僅在2017年美國就有26 730人死于PCa，這是導致癌癥死亡的第二大原因[1]。PCa轉(zhuǎn)移是導致癌癥死亡的主要原因。轉(zhuǎn)移導致了大約90%的癌癥相關患者死亡。絕大多數(shù)患者早期并無典型癥狀，一經(jīng)確診，多數(shù)已發(fā)展成晚期[2]。Arp2/3復合體參與了一些癌癥的發(fā)展和遷移，通過一系列的相互作用，對PCa細胞的侵襲、轉(zhuǎn)移性具有促進作用[3]。

據(jù)報道，Arpin蛋白是Arp2/3復合物的一種新的競爭性抑制劑。Arpin蛋白是由C15ORF38基因編碼的蛋白質(zhì)，包含220個氨基酸殘基和一個羧基結構區(qū)域，但沒有C端末端、螺旋或單個肌動蛋白結合區(qū)域[4]。然而，Arpin蛋白包含Arp2/3復合物的假定結合位點，該位點與癌細胞的發(fā)育和遷移密切相關，Arpin可與Arp2/3結合的成核因子競爭，抑制Arp2/3復合物的活化，從而抑制了肌動蛋白絲的聚合[5]。相關研究表明，Arpin蛋白與乳腺癌、胃癌的臨床特征和預后有關[6-7]。然而，在人PCa中Arpin蛋白的表達是否發(fā)生變化，以及該表達與患者的臨床病理特征及預后的關系，目前尚不清楚。在本研究中，初步確認了Arpin蛋白表達與PCa的關系，進一步研究了Arpin蛋白的異常表達與PCa患者臨床意義和預后之間的相關性。

1資料與方法

1.1一般資料

收集2013年1月～2014年9月在青島市市立醫(yī)院行PCa根治手術的136例患者的臨床資料，另收集120例行前列腺電切手術的前列腺增生患者的臨床資料。收集的所有病理均經(jīng)組織學證實。研究對象的納入標準：①PCa患者術前均未接受放化學治療，無遠處轉(zhuǎn)移及其他器官腫瘤。②前列腺增生患者術前均未行相關藥物治療，無其他器官腫瘤病史。

1.2免疫組織化學（immunohistochemistry，IHC）染色

對4 μm厚的10%甲醛固定及石蠟包埋的組織進行染色。將標本煮沸 3 min，然后在標本中加入3%的過氧化氫溶液，置于室溫孵育 10 min，用緩沖液沖洗樣品，并與Arpin （sc-242049）特異性的山羊多克隆抗體孵育。最終稀釋到 1∶25，放入 4℃冰箱中孵育 24 h。之后再由緩沖液清洗3次。用生物素標記抗山羊免疫球蛋白作為第二抗體。最后，用3、3 -二氨基苯胺四氫氯化物和過氧化氫對切片進行水洗和染色，用蘇木精進行復染后得到褐色色素。

1.3 IHC分析和評分

在光學顯微鏡下，Arpin蛋白陽性表達表現(xiàn)為細胞質(zhì)被染成深褐色。根據(jù)Arpin蛋白陽性的癌細胞染色強度及染色細胞所占比例判斷IHC染色結果。根據(jù)染色強度，無染色的細胞為0分、弱染色記為1分、中等染色記為2分、強染色計為3分。染色腫瘤細胞比例0%的為0分，0%～25%計為1分，>25%～50%計為2分，>50%計為3分。上述兩種評分的分數(shù)總和為最終得分，最終得分<3分為低表達，>3分為高表達。

1.4 統(tǒng)計學方法

實驗數(shù)據(jù)采用SPSS 24.0軟件進行統(tǒng)計分析，采用χ2檢驗分析Arpin蛋白與臨床病例參數(shù)之間的關系。通過Pearson相關分析確定協(xié)變量之間的相關性。用Kaplan-Meier方法繪制無病生存期（disease-free survival，DFS）的生存曲線，利用對數(shù)秩檢驗進行生存曲線的比較。建立了Cox比例風險回歸模型，評價生存變量的顯著性，進一步評估Arpin蛋白對DFS的獨立影響，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 Arpin蛋白在PCa和前列腺增生組織中表達的比較

136例PCa組織中，39例（28.68%）Arpin蛋白呈高表達，97例（71.32%）Arpin蛋白呈低表達；120例前列腺增生組織中，84例（70.00%）Arpin蛋白呈高表達，36例（30.00%）Arpin蛋白呈低表達。Arpin蛋白在PCa組織中的高表達率明顯低于前列腺增生組織（28.68% vs. 70.00%，χ2=43.611，P<0.001）（圖1）。

2.2 Arpin蛋白表達與臨床病理參數(shù)的關系

Arpin蛋白表達與患者年齡、腫瘤大小無關（P>0.05），而與Gleason分級、TNM分期、淋巴結是否轉(zhuǎn)移相關（P<0.05）（表1）。

2.3 PCa患者Arpin蛋白表達與DFS的相關性

為了驗證Arpin蛋白表達的臨床效用，通過Kaplan-Meier分析，評價了Arpin蛋白表達和臨床病理特征對DFS的影響。結果表明，與Arpin蛋白高表達的患者比較，Arpin蛋白低表達的患者預后較差（圖2，P<0.05）。進一步采用單變量Cox回歸分析結果顯示，Arpin蛋白表達（P<0.001），TNM分期（P<0.001）、Gleason分級（P<0.001）、淋巴結是否轉(zhuǎn)移（P=0.017）顯著影響患者的DFS。多變量Cox回歸分析表明，Arpin蛋白表達（P<0.001）、TNM分期（P<0.05）、Gleason分級（P<0.05）是PCa患者DFS的獨立預后指標（表2）。

3討論

近年來，PCa發(fā)病率和死亡率呈明顯上升趨勢，通常伴有局部浸潤和遠處轉(zhuǎn)移，這是導致癌癥死亡的主要原因[8]。PCa容易發(fā)展成遠處轉(zhuǎn)移，尤其是骨轉(zhuǎn)移最為常見，骨轉(zhuǎn)移率高達90%[9]。據(jù)統(tǒng)計，PCa患者5年生存率<30%，其中侵襲、轉(zhuǎn)移是PCa遠期預后主要的影響因素[10]。腫瘤的轉(zhuǎn)移能力是由分子變化所決定的。轉(zhuǎn)移性質(zhì)的特征可以通過蛋白質(zhì)編碼改變和影響基因調(diào)控的非編碼變異來獲得。隨著分子生物學研究的進展，越來越多的研究表明，PCa患者的臨床結果因基因改變而廣受影響，PCa基因改變逐漸被認為是腫瘤起始、發(fā)展、局部浸潤和遠端轉(zhuǎn)移的決定因素[11]。所以，在實驗研究中獲得相關的預后生物標志和新的治療靶點具有至關重要的作用。因此，闡明這些因素和其表達模型有助于更好地了解PCa的進展，為PCa提供新的治療策略，并預測臨床結果。

細胞遷移是組織修復、再生、免疫反應等的重要生理過程，異常的遷移會導致腫瘤的發(fā)展、轉(zhuǎn)移。細胞遷移是一個多步驟的過程，主要由外部刺激引起，導致細胞骨架變化和膜突的形成[12]。在推動癌細胞遷移過程中，板狀偽足起著重要的作用，是腫瘤細胞探索其外環(huán)境的主要工具，并與細胞外基質(zhì)形成新的黏附，以促進運動和傳播[13-14]。板狀偽足通過改變肌動蛋白的細胞骨架，驅(qū)動細胞運動。Arp2/3復合體是肌動蛋白的主要控制器，肌動蛋白聚合是由Arp2/3復合體調(diào)控的，它被認為是細胞運動的關鍵調(diào)節(jié)器，它介導的肌動蛋白多聚化作用是板狀偽足形成的關鍵，通過調(diào)控板狀偽足來控制細胞遷移[15]。

肌動蛋白聚合是一種依賴于細胞骨架動態(tài)重組的多細胞過程的機制，這一過程依賴于Arp2/3復合體[16]。Arp2/3復合體能刺激肌動蛋白聚合，推動細胞遷移，參與多種癌癥的發(fā)展和遷移[3]。Dang等[4]發(fā)現(xiàn)了一種新的蛋白質(zhì)——Arpin蛋白，其作為Arp2/3復合體的負調(diào)節(jié)器，能夠抑制其活化，從而達到抑制細胞遷移的作用。然而，在PCa組織中，Arpin蛋白表達仍然是未知的。

本研究通過IHC比較了PCa組織和前列腺增生組織中的Arpin蛋白表達。結果顯示，在PCa組織樣本中，Arpin蛋白表達明顯低于前列腺增生組織（P<0.05）。因此，PCa中Arpin蛋白水平降低可能會導致腫瘤獲得侵襲性和轉(zhuǎn)移性能力。然后，研究了Arpin蛋白表達與腫瘤TNM分期、Gleason分級的相關性。IHC結果顯示，Arpin蛋白低表達與晚期TNM分期具有顯著相關性（P<0.05）。腫瘤分期越晚Arpin蛋白表達水平越低，表明惡性程度越高。Arpin蛋白表達與PCa病理Gleason分級也有明顯的相關性。眾所周知，PCa的Gleason分級在PCa的診治中也扮演著重要角色。美國癌癥聯(lián)合委員會（AJCC）建議PCa患者Gleason評分>7分應該進行ECT檢測，以減少骨轉(zhuǎn)移漏診的可能性[17]。可見，PCa轉(zhuǎn)移與Gleason評分具有一定的相關性。本研究中，Pca Gleason高分級的組織中，Arpin蛋白表達也相對較低。區(qū)域淋巴結轉(zhuǎn)移患者PCa組織中的Arpin蛋白表達低于未發(fā)生轉(zhuǎn)移的組織。

更重要的是，為了探討Arpin蛋白對PCa患者預后的影響，本研究對Arpin蛋白低表達組和高表達組3年DFS進行比較分析，研究發(fā)現(xiàn)，Arpin蛋白低表達患者明顯比高表達的患者預后差。有臨床研究認為，PCa的預后情況與腫瘤的TNM分期、Gleason評分及淋巴結轉(zhuǎn)移具有相關性，并認為，在新診斷的PCa患者中，TNM分期、Gleason評分是預后的獨立預測因子。本研究提示，Arpin蛋白、TNM分期、Gleason評分是Pca DFS的獨立預后指標。

本研究存在一定的局限性，研究病例數(shù)較少，該發(fā)現(xiàn)應該通過大量的樣本研究進一步證實。近年來，針對癌癥進展過程中關鍵驅(qū)動因子的靶向治療已經(jīng)取得發(fā)展[18]。這種機制可能幫助開發(fā)新的治療靶點。

綜上所述，Arpin蛋白在PCa組織中呈低表達，提示PCa容易發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移和復發(fā)。Arpin表達與PCa患者的臨床特征和預后有關。

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（收稿日期：2018-11-12 本文編輯：許俊琴）