自體富血小板血漿注射改善眶周皮膚老化的臨床研究

羅夢瑤 李廣帥 劉中陽 張澤偉 程鳳娟

[摘要]目的：觀察皮下注射自體富血小板血漿（Autologous platelet-rich plasma，PRP）改善眶周皮膚老化的臨床療效。方法：將獲取的自體富血小板血漿（PRP）均勻注射（單次）至志愿者眶周皮下，使用VISIA圖像分析系統(tǒng)對治療前后不同階段的皮膚相關(guān)特征進(jìn)行檢測，將所得分值進(jìn)行對比分析，并計算其差異性。結(jié)果：治療前、治療后30d、60d皺紋、紋理、斑點(diǎn)檢測值比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。治療后30d、60d毛孔檢測值與治療前比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），但是治療后30d與60d比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。紫外線色斑檢測值治療前后比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論：自體富血小板血漿（PRP）注射可以改善眶周皮膚老化狀態(tài)，提升皮膚年輕化，操作方便，值得臨床推廣。

[關(guān)鍵詞]自體富血小板血漿;皮下注射;眶周皮膚老化;臨床療效;VISIA圖像分析系統(tǒng)

[中圖分類號]R622? ? [文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A? ? [文章編號]1008-6455（2019）06-0094-03

Abstract： Objective? To observe the clinical effect of subcutaneous injection of autologous platelet-rich plasma （PRP） on periorbital skin aging. Methods? The obtained autologous platelet rich plasma （PRP） was uniformly injected （single time） into the periorbital subcutaneous area of the patients. VISIA complexion analysis system was used to detect the skin related characteristics at different stages before and after treatment. The test results were compared and analyzed， and the differences were calculated. Results? There were significant differences in wrinkles， textures and spots between 30 and 60 days after treatment and before treatment（P<0.05）. There were significant differences in pore detection values between before and after treatment at 30 and 60 days（P<0.05）. However， there was no significant difference between 30 days and 60 days after treatment（P>0.05）. There was no significant difference in ultraviolet spot detection before and after treatment（P>0.05）. Conclusion? PRP injection can improve periorbital skin aging， promote skin rejuvenation， and is easy to operate， which is worthy of clinical promotion.

Key words： platelet-rich plasma（PRP）; subcutaneous injection; periorbital skin aging; clinical effect; VISIA complexion analysis system

面部皮膚老化可分為光老化和自然老化，其臨床表現(xiàn)為皮膚變薄、彈性下降、萎縮松弛、細(xì)紋與色素沉著等。同時眶周及眼瞼部皮膚是全身皮膚中較為薄弱的部分容易出現(xiàn)細(xì)紋、色素沉著、松弛等表現(xiàn)[1]，常需進(jìn)行多種治療。臨床上常用的抗衰老治療有肉毒素注射[2]、點(diǎn)陣激光[3]、強(qiáng)脈沖光[4]、微針注射膠原蛋白[5]、小分子透明質(zhì)酸填充[6]、PPDO線埋植[7]等。近年來隨著再生醫(yī)學(xué)的發(fā)展，臨床研究發(fā)現(xiàn)自體富血小板血漿（Autologous platelet-rich plasma，PRP）能提供大量濃集的生長因子促進(jìn)皮下膠原再生，從而延緩皮膚衰老，促進(jìn)面部年輕化，但大部分研究僅采用臨床量表評估，缺乏更加客觀的評價指標(biāo)，本實驗中對20例皮膚老化者行自體富血小板血漿注射后效果良好，并通過VISIA圖像分析系統(tǒng)在治療前后不同階段所獲數(shù)據(jù)進(jìn)行比對分析，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1? 資料和方法

1.1 一般資料：本組實驗選取健康志愿者20例納入免費(fèi)治療，全部為女性，年齡39～50歲，平均年齡44.1歲，F(xiàn)itzpatrick分型Ⅲ～Ⅳ型皮膚，Dr.Glogau皮膚老化分級法[8]Ⅱ級。臨床表現(xiàn)：不同程度的細(xì)紋，色斑，皮膚松弛毛細(xì)血管擴(kuò)張等，志愿者均合并上述一種及兩種以上皮膚老化表現(xiàn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①平素體健，無高血壓、糖尿病，冠心病等系統(tǒng)性疾病，無傳染病、血液性疾病、精神性疾病、活動性疾病及嚴(yán)重的皮膚病，局部皮炎，皮膚潰瘍感染等;②實驗前靜脈血血小板計數(shù)位于（100～300）×109/L正常值之內(nèi);③采血前6個月未使用任何影響血小板及血液系統(tǒng)功能的藥品及保健品;④近1年未接受任何面部美容治療包括脂肪填充、肉毒素注射、透明質(zhì)酸注射、微針注射，眼眶部整形外科手術(shù)等;⑤不在妊娠期、哺乳期、備孕期，無不良嗜好（如：吸煙、嗜酒、吸毒等）;⑥平素對護(hù)膚品無嚴(yán)重過敏史。醫(yī)師已經(jīng)將治療過程及其可能存在的不良反應(yīng)告知本人，均表示理解并同意全程參與治療，且簽署知情同意書。本實驗經(jīng)倫理委員會研究并審核通過。

1.2 儀器和材料：瑞士瑞珍PRP制備套裝Ⅲ型（Type Ⅲ RegenACR?-C Classic，RegenLab瑞士REGEN LAB SA公司，國食藥監(jiān)械字2014第3661397號）;離心機(jī)（瑞珍LC-04C專用離心機(jī)，REGEN LAB SA公司），VISIA皮膚檢測儀（美國 CANFIELD）、佳能數(shù)碼相機(jī)、利多卡因乳膏（北京紫光制藥）、絡(luò)合碘、一次性無菌換藥包（山東威高潔瑞），三通轉(zhuǎn)換接頭（貝朗），無菌生理鹽水（四川科倫），醫(yī)用冰袋。

1.3 治療方法

1.3.1 檢測條件：20例女性志愿者在測試前均徹底潔面，室內(nèi)休息30min后等待檢測。VISIA皮膚檢測儀（美國）檢測并記錄（正位、左右斜側(cè)45°）斑點(diǎn)、皺紋、紋理、毛孔，紫外線色斑共計5項指標(biāo)得分值。

1.3.2 治療操作：①眶周涂抹利多卡因乳膏并保鮮膜封包1h;②自體富血小板血漿制備，本實驗中均采用瑞士瑞珍PRP制備套裝Ⅲ型（Type Ⅲ RegenACR?-C Classic），包含1個蝴蝶針頭，1個采血固定器，1支 RegenTHT 管（內(nèi)含抗凝劑和分離凝膠），2個魯爾針管1ml和5ml，1個轉(zhuǎn)移針頭，3個30G針頭，1個27G針頭，1個長度80mm轉(zhuǎn)移用套管針頭，1個轉(zhuǎn)移用配件。首先使用套盒中采血針靜脈穿刺，采血管將自動采集所需體積的血液約8ml，然后放入瑞珍LC-04C專用離心機(jī)中進(jìn)行離心（離心機(jī)參數(shù)設(shè)置：時間12min;離心力 3 100rpm），待離心機(jī)停止，靜置2min后將制備管從離心機(jī)中取出;反復(fù)倒置采血管，再次懸浮，細(xì)胞儲存在上層清液中，每支采血管可獲得約4.5ml PRP;利用轉(zhuǎn)換器導(dǎo)入1ml或5ml注射器中待用（見圖1）;③眶周區(qū)域富血小板血漿（PRP）注射：常規(guī)消毒鋪巾，采用退針注射技術(shù)，將套盒所帶30G長針頭與1ml注射器連接固定，針頭全長伸入皮下層，經(jīng)皮可見針頭位置變化，退針注射，見局部皮下輕輕隆起即可（邊注射邊以鹽水紗布輕輕按壓止血）。注射途徑交織成網(wǎng)格狀均勻彌散分布。治療后以生理鹽水紗布濕敷，并以軟冰持續(xù)冷敷2h以上，24h后可洗臉，外用護(hù)膚品，日常注意防曬。

1.4 療效評價：應(yīng)用VISIA皮膚檢測儀在治療后30d、60d對志愿者的左、右面頰和前正面進(jìn)行檢測，檢測儀自動生成絕對分值（絕對分值代表了出現(xiàn)在選定區(qū)域的皮膚特征檢測值的面積和強(qiáng)度，分值越低則皮膚老化特征越低）與治療前進(jìn)行對比并進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析：選擇斑點(diǎn)、皺紋、紋理、毛孔、紫色斑共5項作為本次分析指標(biāo)，采用SPSS 20.0軟件對計量資料進(jìn)行重復(fù)方差分析和t檢驗，P<0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.01代表有極顯著的統(tǒng)計學(xué)差異。

2? 結(jié)果

2.1 VISIA 檢測結(jié)果：治療前、治療后30d、60d皺紋、紋理、斑點(diǎn)檢測值比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。治療后30d、60d毛孔檢測值與治療前比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），但是治療后60d與30d比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。紫外線色斑檢測值治療前后比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。見表1。典型病例見圖2～3。

2.2 不良反應(yīng)情況：在所有接受治療的志愿者中，未見針眼感染。所有志愿者在治療后即刻至2h內(nèi)紅腫明顯，后逐漸緩解，24h后部分志愿者針眼可見輕度瘀血，1周逐漸消退。在實驗觀察期間，均未見志愿者在治療后有皮下結(jié)節(jié)，皮膚炎癥等表現(xiàn)。同時，所有志愿者治療后即刻完成視覺模擬評分法（Visual analogue scale，VAS）評分[9]，所得平均值為5分。

3? 討論

保持皮膚健康和年輕化，是人類社會長期追求的目標(biāo)。隨著醫(yī)學(xué)水平的發(fā)展，越來越多的技術(shù)得以用來改善面部皮膚老化這一難題?？糁芤匝鄄繛橹行?，老化明顯，但其抗衰治療措施也因其皮膚薄弱和解剖位置受到限制，近年來學(xué)者一直在探索更為安全的治療方式。自體富血小板血漿自上世紀(jì)90年代以來廣泛應(yīng)用于創(chuàng)傷愈合[10]，之后在其他醫(yī)學(xué)領(lǐng)域也有大量的臨床證據(jù)[11]?，F(xiàn)有的國內(nèi)外文獻(xiàn)報道其含有多種生長因子，能誘導(dǎo)蛋白再生的過程，從而促進(jìn)細(xì)胞和基質(zhì)增殖，膠原形成，實現(xiàn)對人體組織的修復(fù)[12]，而被廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)美容領(lǐng)域[13]。傳統(tǒng)獲取自體富血小板血漿（PRP）的方法較多，因轉(zhuǎn)速和離心時間不同，致使獲取的濃度和穩(wěn)定性存在差異[14]。目前國內(nèi)外市場已經(jīng)開發(fā)了幾種血小板制備套盒[15]，本實驗中使用瑞士瑞珍PRP制備套裝Ⅲ型提取技術(shù)，利用其專利分離凝膠，經(jīng)過一次離心，即可獲取自體富血小板血漿，操作簡單快捷，便于臨床推廣應(yīng)用。離心后分為3層，最上層黃色澄清液體為自體富血小板血漿（PRP），中間層上緣為細(xì)胞沉淀層、中間層為分離膠層，最底層為紅細(xì)胞層（見圖1）。本次研究中觀察到30d、60d后皺紋VISIA檢測值較治療前均有統(tǒng)計學(xué)差異，VISIA檢測截圖比較可見皺紋數(shù)量逐漸減少，深度變淺，皮膚勻質(zhì)性即紋理均有提高，皮膚細(xì)小皺紋變化明顯，即自體富血小板血漿可以通過促進(jìn)成纖維細(xì)胞、原母細(xì)胞增殖和膠原生成來增加真皮彈性[16]和厚度，治療皺紋。同時它能刺激透明質(zhì)酸的合成[17]，增強(qiáng)皮膚保濕能力，提高皮膚光澤度，改善色素沉著[18]。但在本次研究中治療前后志愿者紫外線色斑檢測值比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義，可能與樣本量及治療次數(shù)較少，且實驗期間正值夏季，可能與志愿者防曬不嚴(yán)格有關(guān)，未來有待進(jìn)一步研究。

VISIA圖像分析系統(tǒng)[19]是皮膚科、整形美容外科和護(hù)膚品行業(yè)應(yīng)用最廣泛的成像分析設(shè)備。其使用標(biāo)準(zhǔn)的白熾燈、紫外線（UV）和交叉偏振光，生成一系列的高分辨率圖像，對志愿者的左、右面頰及正面進(jìn)行檢測，共檢測斑點(diǎn)，皺紋 ，紋理，毛孔，紫外線，棕色，紅色區(qū)域、紫色斑（卟啉）8項生理指標(biāo)，檢測系統(tǒng)自動生成分值（特征計數(shù)、百分位數(shù)）作為分析指標(biāo)，提供客觀數(shù)據(jù)，便于統(tǒng)計學(xué)處理，較傳統(tǒng)的醫(yī)師量表分析更加準(zhǔn)確。在本研究中則選取色斑、皺紋、紋理、毛孔、紫色斑為主要檢測指標(biāo)，是參考皮膚老化分級[8]和主要特征為依據(jù)。但VISIA并非最佳檢測儀器，有研究也表明ANTERA 3D? CS[13]在檢測皺紋及毛孔等項目時，優(yōu)勢更為明顯。

本實驗研究的局限性在于參與人數(shù)較少，沒有對照組，隨訪時間相對較短。筆者建議應(yīng)當(dāng)在更大樣本量的臨床試驗中重復(fù)這項研究的概念，理想的方法是反復(fù)多次注射，在更長的皮膚代謝周期中觀察自體富血小板血漿（PRP）對改善眶周皮膚老化的作用，同時志愿者接受多項無創(chuàng)面部檢測，如CK皮膚鏡、ANTERA 3D? CS[20]等綜合分析。此外，還需要更多的研究來闡明每次治療面部不同區(qū)域所需的最佳劑量、注射次數(shù)、時間間隔、以及治療的長期有效性等。綜上所述，與其他皮膚修復(fù)療法相比，自體富血小板血漿（PRP）皮下注射是一種有效的可以促進(jìn)組織再生的治療方法，相比人工合成的填充劑其來源于自體組織，無免疫反應(yīng)，再生能力強(qiáng)，安全性更高等優(yōu)勢。提取技術(shù)操作簡單，希望在未來能有大樣本數(shù)據(jù)支持其在面部年輕化的臨床作用，為抗衰治療提供更多方案。

（作者貢獻(xiàn)聲明：感謝程鳳娟實驗操作;劉中陽、張澤偉數(shù)據(jù)整理、統(tǒng)計學(xué)分析;李廣帥教授研究指導(dǎo)、論文修改、經(jīng)費(fèi)支持。）

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[收稿日期]2018-12-25

本文引用格式：羅夢瑤，李廣帥，劉中陽，等.自體富血小板血漿注射改善眶周皮膚老化的臨床研究[J].中國美容醫(yī)學(xué)，2019，28（6）：94-98.