精子DNA完整性與頂體酶活性在精索靜脈曲張所致不育患者術(shù)前術(shù)后的觀察*

馬征兵

安陽市婦幼保健院男性科，河南 安陽 455000

精索靜脈曲張可引起多種臨床表現(xiàn)，發(fā)病機(jī)制復(fù)雜, 也是導(dǎo)致男性不育癥的原因之一[1-2],手術(shù)可取得較好的治療效果[3]。精子DNA完整性、頂體酶活性與精子的受精能力密切相關(guān)，是評價男性精子質(zhì)量的重要指標(biāo)[4-5]。本研究旨在探討精子DNA完整性與頂體酶活性在精索靜脈曲張所致不育患者行精索靜脈高位結(jié)扎手術(shù)前后的變化，為尋找精索靜脈曲張導(dǎo)致不育的發(fā)病機(jī)制提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2016年1月—2018年9月期間在我院男性科門診就診的100例患有Ⅱ度及以上精索靜脈曲張所致不育癥患者(實驗組)與100例行健康體檢的健康男性志愿者(對照組)進(jìn)行前瞻性研究，其中，實驗組的年齡為23～45歲，平均年齡為(33.72±9.51)歲，對照組的年齡為22～44歲，平均年齡為(33.15±9.68)歲，組間年齡比較，P>0.05，研究可比。兩組均符合納入標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)，納入標(biāo)準(zhǔn)為：(1)育齡期男性；(2)實驗組患者的性生活規(guī)律，未采取避孕措施至少1年而其配偶未受孕，對照組男性無不育癥情況；(3)對研究知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)配偶存在某種異常所致不孕癥；(2)年齡超過育齡期；(3)不配合研究或資料不完整。

1.2 方法

1.2.1 精子動態(tài)學(xué)、形態(tài)學(xué)檢查 囑患者禁欲3～5天后手淫留取完整精液于一干凈容器，置37 ℃水浴箱內(nèi)，待精液充分液化后按照WHO關(guān)于精液處理標(biāo)準(zhǔn)(第五版)的具體要求和操作步驟進(jìn)行分析[6]，其中精子動態(tài)學(xué)主要參數(shù)(濃度、活率、前向運(yùn)動率)采用WLJY-9000型北京偉力彩色精子質(zhì)量檢測系統(tǒng)軟件進(jìn)行計算，精子形態(tài)學(xué)主要參數(shù)(正常形態(tài)精子百分率)采用人工計數(shù)方法計算。將精液滴片、制片后，按照WHO推薦的Diff-Quik法進(jìn)行染色，在光學(xué)顯微鏡油鏡(×l 000)下，每張片至少讀取200個精子，用嚴(yán)格判斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判別，人工計數(shù)正常形態(tài)及畸形精子數(shù)，最后取2張片子結(jié)果的均數(shù)。

1.2.2 精子頂體酶活性測定 選用臨床上應(yīng)用的精子頂體酶活性檢測試劑盒(底物酶法，BAPNA法)，購自天津瑞愛金生物科技有限公司(津械注準(zhǔn)20172400007)，在精液動態(tài)學(xué)檢查結(jié)束后的3個小時之內(nèi)即刻進(jìn)行取樣測定，嚴(yán)格按照試劑盒使用說明書的步驟進(jìn)行操作，結(jié)果判定為在24℃反應(yīng)溫度下，每水解1.0 μmolBAPNA/min的底物量定義為1 IU頂體酶活性。計算公式：頂體酶活性(μIU/106精子)=(測定管OD-空白管OD)×106/247.5×10。正常參考值為：48.2～218.7 μIU/106精子。

1.2.3 精子DNA完整性測定 購自深圳市博銳德生物科技有限公司生產(chǎn)的精子DNA 碎片檢測試劑盒，采用精子染色質(zhì)擴(kuò)散法(SCD)檢測原理，根據(jù)精子頭部光暈的有無和大小判斷精子DNA碎片化程度，按照實驗操作說明書進(jìn)行操作，精子DNA 碎片率( %) =存在DNA 碎片精子數(shù)÷被觀察精子總數(shù)×100%，根據(jù)精子DNA 碎片指數(shù)(DNA fragmentation index，DFI)來判斷精子DNA完整性。

1.2.4 手術(shù)方法 對不育癥患者實施精索靜脈高位結(jié)扎術(shù)治療，于患者臍孔下緣作2cm切口，入腹建立人工氣腹，將腹腔鏡置入，對患者腹腔內(nèi)情況進(jìn)行探查，分別于臍孔與兩側(cè)髂前上棘連線中點腹直肌外緣作5mm長的主操作孔、副操作孔，在腹腔鏡直視下采用剪刀對輸精管上1.5 cm處后腹膜予以剪開，顯露精索靜脈，對精索靜脈進(jìn)行游離，迅速結(jié)扎，電凝止血，消除氣腹，撤出手術(shù)器械，分層縫合皮膚切口。

1.3 觀察指標(biāo) 比較實驗組與對照組的精子濃度、精子活動力、精子存活率、精子形態(tài)正常率、精子DNA完整率(DFI指數(shù))、精子頂體酶活性。比較不育癥患者手術(shù)前后的精子濃度、精子活動力、精子存活率、精子形態(tài)正常率、精子DNA完整率、精子頂體酶活性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS19.0軟件，計數(shù)資料行χ2檢驗，計量資料行t檢驗，P≤0.05時具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 實驗組與對照組的精液分析指標(biāo)比較 實驗組的精子濃度、精子活動力、精子存活率、精子形態(tài)正常率、精子DNA完整率、精子頂體酶活性均低于對照組(P<0.05)，其DFI指數(shù)高于對照組(P<0.05)。見表1。

表1 實驗組與對照組的精液分析指標(biāo)比較

注：*表示與對照組相比，P<0.05。

2.2 不育癥患者手術(shù)前后的精液分析指標(biāo)比較

不育癥患者手術(shù)后的精子濃度、精子活動力、精子存活率、精子形態(tài)正常率、精子DNA完整率、精子頂體酶活性均較手術(shù)前增高(P<0.05)，其DFI指數(shù)較手術(shù)前降低(P<0.05)。見表2。

表2 不育癥患者手術(shù)前后的精液分析指標(biāo)比較(n=100)

注：#表示與手術(shù)前相比，P<0.05。

3 討 論

當(dāng)前，在二孩政策放開后，有生育需求的高齡男性增多，加上原發(fā)不育的青年患者，男性不育癥已經(jīng)成為一種常見的男科疾病，這與男性長期不良生活習(xí)慣、從事有害職業(yè)、處于有害工作環(huán)境、泌尿生殖系統(tǒng)外科疾病如精索靜脈曲張等有關(guān)，其可對男性精子的宏觀和微觀結(jié)構(gòu)造成影響?；诖?，深入研究精子DNA損傷機(jī)制、評估精子頂體酶活性改變情況，探討有效的治療方法，顯得尤為迫切[7-8]。

本研究針對精索靜脈曲張所致男性不育癥患者的精子質(zhì)量進(jìn)行檢測后發(fā)現(xiàn)，實驗組的精子濃度、精子活動力、精子存活率、精子形態(tài)正常率、精子DNA完整率、精子頂體酶活性均低于對照組(P<0.05)，其DFI指數(shù)高于對照組(P<0.05)，這說明精索靜脈曲張所致不育癥患者普遍存在精子DNA損傷和頂體酶活性減弱情況。

資料顯示，約有5.7%～41%的男性不育癥患者伴隨有不同程度的精索靜脈曲張，臨床上認(rèn)為精索靜脈曲張是導(dǎo)致男性不育癥的重要原因，主要是由于精索靜脈叢發(fā)生曲張后，其血液回流受阻，導(dǎo)致其睪丸生精功能受損，進(jìn)而影響到男性的生殖功能，因此，臨床上主張對精索靜脈曲張所致男性不育癥予以充分重視[9]。由于精索靜脈曲張所致不育癥的發(fā)生主要原因為精索靜脈曲張，故臨床上主張對這類不育癥患者實施精索靜脈高位結(jié)扎術(shù)治療[1-3]。該手術(shù)主要是通過對患者精索靜脈進(jìn)行結(jié)扎，可有效糾正靜脈回流受阻，減少精索靜脈內(nèi)血液淤積。我們手術(shù)時采取保留睪丸動脈的手術(shù)方式，避免影響睪丸血供，從而改善睪丸生精功能[10-11]。

本研究發(fā)現(xiàn)，不育癥患者手術(shù)后的精子密度、精子活動力、精子存活率、精子形態(tài)正常率、精子DNA完整率、精子頂體酶活性均較手術(shù)前增高(P<0.05)，其DFI指數(shù)較手術(shù)前降低(P<0.05)，說明精索靜脈高位結(jié)扎術(shù)可有效改善不育癥患者的精子質(zhì)量，減輕其精子DNA損傷，增強(qiáng)其精子頂體酶活性。

綜上所述，精索靜脈曲張所致不育癥患者的精子DNA完整性、精子頂體酶活性普遍受損，經(jīng)精索靜脈高位結(jié)扎術(shù)可有效改善患者的精子DNA完整性和頂體酶活性。