香花槐組織培養(yǎng)研究

顧鑫　周曉瑩　趙玉龍　張旭東　李杰穎

摘要：香花槐對城市不良環(huán)境有抗性，抗病力強，是造林的優(yōu)良樹種。分別對香花槐外植體滅菌時間、外植體初代培養(yǎng)、外植體繼代培養(yǎng)進行初步研究，結(jié)果表明：利用0.1%升汞進行滅菌，在3.5～4.0 min最適宜；最佳初代培養(yǎng)的培養(yǎng)基為A6：MS+BA0.5+IBA0.1+蔗糖25 g+瓊脂6 g；最佳繼代培養(yǎng)的培養(yǎng)基為 MS+BA0.3+I AA0.3+蔗糖30 g+瓊脂6 g。

關(guān)鍵詞：香花槐；組織培養(yǎng)；愈傷組織；激素；不定芽

中圖分類號：Q943 文獻標(biāo)識碼：A 文章編號：1674-1161（2019）02-0025-03

香花槐（Robinia pseudoacacia CV.Idaho）為豆科刺槐屬刺槐變種，原產(chǎn)于西班牙、朝鮮，是近年來我國引進的美化城市園林的理想珍稀樹種，具有保持水土、防風(fēng)固沙、改善生態(tài)環(huán)境的作用。香花槐為落葉喬木，株高10～12 m，樹干為褐色至灰褐色。葉互生，7～19片葉組成羽狀復(fù)葉，葉橢圓形至卵狀長圓形，長3～6 cm，比刺槐葉大。葉片美觀對稱，深綠色有光澤，青翠碧綠。密生成總狀花序，作下垂?fàn)??；ū患t色，有濃郁的芳香氣味，可同時盛開小紅花200～500 朵，花期長。無莢果，不結(jié)種子。耐干旱瘠薄，對土壤要求不嚴，酸性土、中性土及輕堿地均能生長。主、側(cè)根發(fā)達，萌芽性強，生長快，當(dāng)年可達2 m，翌年達3～4 m，開始開花。性耐寒，能抵抗零下25～28 ℃低溫，對城市不良環(huán)境有抗性，抗病力強，是造林的優(yōu)良樹種。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

當(dāng)香花槐植株發(fā)芽抽出枝條時，選擇生長勢強、無病蟲害、健壯的植株，取其粗壯帶有腋芽的枝條作為組織培養(yǎng)的外植體。

1.2 試驗方法

1.2.1 處理香花槐外植體 在香花槐外植體中選出粗壯且不帶病蟲害的枝條，用剪刀除去多余葉片，取其帶有3個腋芽、長3～4 cm的莖段進行處理。處理a：修剪合適的莖段裝到容器里，貼好標(biāo)簽，放到流水下沖洗30～60 min，然后拿到接種臺上；處理b：用無菌水沖洗2～3 遍，用75%酒精浸泡20～30 s，用無菌水沖洗3～4 遍，用無菌濾紙吸干多余水分；處理c：用0.1%升汞滅菌，用無菌水沖洗4～5 遍，備用。

1.2.2 香花槐外植體初代培養(yǎng) 將處理后相對無菌的香花槐外植體放至已用紫外燈照射20～30 min的無菌超凈工作臺上，再用經(jīng)加熱殺菌的工具把處理過的香花槐截成帶有1 個或2 個腋芽的莖段，插入初代培養(yǎng)基A1—A6中，見表1。標(biāo)上代號和接種日期，放置培養(yǎng)室中培養(yǎng)。培養(yǎng)溫度為24～26 ℃，光照14～16 h/d，光強1 000～3 000 lx，40 d后觀察腋芽生長情況。

1.2.3 香花槐繼代培養(yǎng) 當(dāng)初代培養(yǎng)40 d、腋芽長到2 cm以上時，將其切成0.5 cm的小段，轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基B1—B6中培養(yǎng)30 d后，觀察生長狀況。

1.2.4 生根培養(yǎng) 當(dāng)繼代培養(yǎng)達到一定數(shù)量和要求時進行生根培養(yǎng)，即把試管苗切成適合的莖段，接到生根培養(yǎng)基中，20～30 d可生根，生根后植株便可移栽馴化。

2 結(jié)果與分析

2.1 滅菌時間的長短對外植體成活率的影響

利用0.1%升汞滅菌時，時間長短至關(guān)重要。為提高外植體成活率，減少污染率，分別進行7 種時間的滅菌試驗，滅菌時間對香花槐成活率的影響見表2。

從表2可知：滅菌時間越長，滅菌效果越好且污染個數(shù)少，但褐化死亡個數(shù)增加，成活率降低；滅菌時間越短，污染個數(shù)增加，但褐化死亡個數(shù)減少；3.5～4.0 min時成活個數(shù)相對多，成活率達到45%。

2.2 初代培養(yǎng)基對愈傷組織及腋芽誘導(dǎo)的影響

初代培養(yǎng)時，經(jīng)過消毒滅菌的外植體分別接在不同的培養(yǎng)基中，約15 d開始萌動，20 d后腋芽開萌動變化，40 d長出芽。觀察香花槐外植體初代培養(yǎng)20 d后不同培養(yǎng)基上莖段的生長狀況，見表3。

從表3 中可以看出，A6培養(yǎng)基中香花槐莖段上腋芽變綠芽，生長幾率大，最先萌動且有愈傷組織形成，而其他幾種培養(yǎng)基變化和長勢均不如A6。

2.3 繼代培養(yǎng)基對腋芽生長的影響

香花槐外植體初培40 d后，在不同繼代培養(yǎng)基上的生長狀況見表4。

由表4可知，A6培養(yǎng)基上莖段底部不但有健康的愈傷組織，且腋芽正常生長。這表明A6培養(yǎng)基是相對適合香花槐組織培養(yǎng)的初代培養(yǎng)基。

3 結(jié)語

1） 利用0.1%升汞處理香花槐外植體時，滅菌處理時間很重要。時間過長，滅菌效果雖好，但褐化死亡個數(shù)增加，成活率降低；滅菌時間短有利于減少褐化死亡個數(shù)，但滅菌不徹底，污染率升高。試驗表明：3.5～4.0 min的滅菌效果較好，香花槐外植體成活個數(shù)相對多，成活率達45%。

2） 香花槐外植體初代培養(yǎng)基是其無性繁殖的關(guān)鍵。香花槐外植體在A1，A2，A3培養(yǎng)基上變化小且生長較緩慢，在A4，A5培養(yǎng)基上能形成大量透明狀愈傷組織且腋芽呈現(xiàn)透明狀玻璃化，無法形成健康植株，在A6培養(yǎng)基上生有正常的愈傷組織，且腋芽能正常生長。這表明，適合香花槐初代培養(yǎng)的培養(yǎng)基為A6，即MS+BA0.5+IBA0.1+蔗糖25 g+瓊脂6 g。

3） 在香花槐繼代增殖培養(yǎng)中，培養(yǎng)基的選擇對香花槐增殖倍數(shù)、叢芽長勢尤為重要。香花槐植株在B1，B2，B3培養(yǎng)基上有愈傷也有分化，但植株容易玻璃化，無法正常生長或停止生長，這（下轉(zhuǎn)第29頁）

（上接第26頁）說明B1，B2，B3不宜作為香花槐繼代培養(yǎng)基；在B4，B5，B6培養(yǎng)基中既可形成健康的愈傷組織也有分化，但相比較而言，B6培養(yǎng)基中香花槐植株生長更健康。這表明適宜香花槐培養(yǎng)的繼代增殖培養(yǎng)基為B6，即MS+BA0.3+I AA0.3+蔗糖30 g+瓊脂6 g。

參考文獻

[1] 王穎.香花槐生物學(xué)特性及其芽分化影響因素研究[J].防護林科技；2015（6）：49.

[2] 陳西倉.香花槐的開發(fā)利用及栽培技術(shù)[J].園林與花卉，2005（6）：28-29.

[3] 盧德全.香花槐的經(jīng)濟效益與育苗栽培技術(shù)[J].四川農(nóng)業(yè)科技，2003（3）：19.

[4] 宋杰，曹琳，張繼武，等.香花槐組織快繁技術(shù)[J].內(nèi)蒙古林業(yè)科技，2006，12（4）：16-17.