菊花在簡易庫和冷藏庫中的理化指標(biāo)動態(tài)變化?

吳 翠，徐 靚，馬玉翠，洪 專，晉文慧，巢志茂

(1. 中國中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所，北京 100700； 2. 國家中藥材產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系貯藏與包裝崗位，北京 100700； 3. 國家海洋局第三海洋研究所，廈門 361005)

貯藏是中藥材從采收加工到臨床使用前的重要環(huán)節(jié)。受貯藏環(huán)境和自身特性的影響，中藥材易出現(xiàn)變色、霉變、蟲蛀、酸敗等多種肉眼可見的變質(zhì)現(xiàn)象，其中所含化學(xué)成分則出現(xiàn)含量的增多、減少、成分消失或產(chǎn)生新的成分[1]。觀察和測定中藥材在貯藏過程中物理和化學(xué)性質(zhì)隨貯藏時間的動態(tài)變化有利于控制中藥材的質(zhì)量，對中藥材合理貯藏時間的制定具有突出的實用價值和參考意義。

常用中藥材菊花是菊科植物菊ChrysanthemummorifoliumRamat.的干燥頭狀花序，功效為清熱解毒、散風(fēng)清熱、平肝明目等，在臨床使用時常用于頭痛眩暈、風(fēng)熱感冒、目赤腫痛等癥狀[2]，被原衛(wèi)生部列入《既是食品又是藥品的物品名單》中，并使用廣泛。菊花配伍天麻可以提高天麻對陰虛陽亢型高血壓的治療效果[3]，配伍蒲公英、赤芍等組成的菊花煎對潰瘍性結(jié)腸炎患者血液內(nèi)血小板膜糖蛋白異常體現(xiàn)出較好的抑制作用[4]。菊花中的酚類成分具有抗氧化活性[5]，總黃酮對大鼠心肌缺血具有保護(hù)作用[6]，b-欖香烯是菊花揮發(fā)油中的主要成分，研究表明其具有很好的抑癌作用[7]。文獻(xiàn)顯示，菊花在實驗室的自然條件下貯藏3年會出現(xiàn)變色和蟲蛀現(xiàn)象[8]，隨著貯藏時間的延長，總黃酮的含量逐漸降低[8]，質(zhì)量下降。但尚未見菊花在不同貯藏庫中不同貯藏時間下理化指標(biāo)變化的文獻(xiàn)報道。

本實驗將購得菊花分裝后，分別放置于簡易庫和冷藏庫中貯藏，于貯藏過程中固定的時間間隔取出，觀察外觀、測定化學(xué)成分的含量，以觀察菊花在貯藏過程中外在物理性質(zhì)和內(nèi)在化學(xué)成分含量隨貯藏時間的動態(tài)變化，以期為其在貯藏過程中質(zhì)量的控制提供實驗以及數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試劑

綠原酸對照品(批號PS11111001，純度98.84%)，3,5-O-二咖啡?；鼘幩釋φ掌?批號PS11101302，純度98.64%)，木犀草苷對照品(批號PS0342-0020，純度98.5%)。甲醇和乙腈為色譜純(Thermo Fisher Scientific公司)，水為娃哈哈純凈水(杭州娃哈哈集團有限公司)，乙醇、磷酸、冰醋酸為分析純(北京化學(xué)工業(yè)集團有限責(zé)任公司)。

1.2 主要儀器

Shimadzu LC-20AT型高效液相色譜儀，配備SIL-20 A型自動進(jìn)樣器，DGU-20A5型自動脫氣機，LC-20AT型泵，SPD-M20 A型二極管陣列檢測器，CTO-10ASvp柱溫箱，LC-solution色譜工作站(日本Shimadzu公司)，XS105 Dual Range型電子分析天平(感量為0.01 mg)(Mettler Toledo儀器系統(tǒng)有限公司)，Ohaus CP224C型電子天平(感量為0.1 mg，奧豪斯(上海)儀器有限公司)，KQ-100E型超聲波清洗器(100 W，40 kHz，昆山市超聲儀器有限公司)，JWS-A5型溫濕度表(北京市亞光儀器有限責(zé)任公司)，DFT-50 A型手提式高速粉碎機(溫嶺市林大機械有限公司)，比澤爾5P系統(tǒng)壓縮機(Bizeer制冷技術(shù)(中國)有限公司)，高翔DL60冷風(fēng)機(浙江高翔工貿(mào)有限公司)。

1.3 貯藏庫的建立

表1顯示，簡易庫未進(jìn)行溫濕度和光照等調(diào)節(jié)，每天上午10點記錄溫度和濕度。冷藏庫采用冷風(fēng)機控制倉庫溫濕度，從而保持恒定溫度和濕度環(huán)境，采用紙箱密封控制光照。

表1 簡易庫溫濕度

1.4 藥材

本實驗所用菊花樣品品種為亳菊，2014年從河北安國藥材市場購買，由中國中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所巢志茂研究員鑒定為菊科植物菊ChrysanthemummorifoliumRamat.的干燥頭狀花序，樣品在貯藏之前放置于該所1016實驗室。

2014年7月11日，將菊花分裝于白色不透光的塑料編織袋中，分別放置于簡易庫和冷藏庫中貯藏，留出適量菊花作為0月的樣品。分別于貯藏日期為2014年10月31日、2015年4月30日和10月31日、2016年4月30日和10月31日、2017年4月30日時，從庫中取出適量菊花樣品，作為貯藏3、9、15、21、27、33個月的樣品。

1.5 外觀觀察

表2顯示，從簡易庫和冷藏庫中取出適量樣品，平鋪于白色搪瓷盤中，在日光下觀察菊花樣品的色澤和質(zhì)地并記錄。

1.6 水分測定

取“1.5”項下樣品適量粉碎，過一號篩，按2015版《中國藥典》通則水分含量測定項下規(guī)定的第二法即烘干法[10]進(jìn)行測定。

1.7 綠原酸、3,5-O-二咖啡?；鼘幩岷湍鞠蒈盏暮繙y定

1.7.1 色譜條件 Dikma Diamonsil C18(2)色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 mm)，以乙腈為流動相A，以0.1%磷酸溶液為流動相B進(jìn)行梯度洗脫(0～11 min，90%A→82%B；11～30 min，82%A→80%B；30～40 min，80%B)，檢測波長設(shè)定為348 nm，流速為1.0 mL·min-1，柱溫為35 ℃，進(jìn)樣量為10 mL。

1.7.2 對照品溶液的制備 取對照品綠原酸、3,5-O-二咖啡酰基奎寧酸和木犀草苷適量，分別精密稱定0.9 mg、0.6 mg和2.0 mg，用70%甲醇其溶解于體積為10 mL棕色量瓶中并加至刻度，配制成濃度分別為0.036 mg·mL-1、0.024 mg·mL-1和0.08 mg·mL-1的對照品溶液。

表2 簡易庫與冷藏庫中菊花的色澤、質(zhì)地、水分、綠原酸、3,5-O-二咖啡酰基奎寧酸、木犀草苷的結(jié)果

1.7.3 供試品溶液的制備 圖1表2顯示，取“1.6”項下樣品粉末0.25 g精密稱定，放入體積為50 mL的具塞錐形瓶中，精密加入25 mL70%的甲醇，密塞并稱定重量后超聲處理40 min取出，放至室溫后第2次稱定重量，以70%的甲醇補足超聲處理減失的重量，搖勻并濾過，取續(xù)濾液過0.22 mm微孔濾膜即得。對照品與供試品的HPLC色譜圖。采用外標(biāo)一點法計算干品中的含量。

注：A.對照品；B.供試品；1.綠原酸；2.木犀草苷；3.3,5-O-二咖啡?；鼘幩釄D1 對照品和菊花供試品的HPLC圖

2 結(jié)果

2.1 貯藏庫溫濕度變化

簡易庫溫度范圍為15～42 ℃，濕度范圍為30%～74% RH。冷藏庫溫度在整個貯藏過程中均保持在3.5～5.0 ℃，濕度均保持在65～75% RH相對濕度。

2.2 色澤和質(zhì)地

表2結(jié)果顯示，簡易庫中的菊花色澤從0月的類白色到第15個月的黃白色，再到第27個月出現(xiàn)黃褐色，色澤顯著加深；質(zhì)地在第27個月時出現(xiàn)輕脆易碎的現(xiàn)象。冷藏庫中的菊花色澤在第27個月才出現(xiàn)黃白色，并一直保持到第33個月，質(zhì)地始終保持體輕質(zhì)柔潤的狀態(tài)。

2.3 水分

表2結(jié)果顯示，菊花的水分含量最高值為0月時的12.26%，之后出現(xiàn)小幅度下降，簡易庫中的最低值為7.22%，冷藏庫中最低值為8.46%，均在《中國藥典》規(guī)定的不得高于15%的范圍內(nèi)。

2.4 有效成分的含量

綠原酸、3,5-O-二咖啡?；鼘幩岷湍鞠蒈帐蔷栈ǖ挠行С煞?，對于其含量測定，按照《中國藥典》規(guī)定的HPLC方法直接進(jìn)行測定[2]，因此未進(jìn)行方法學(xué)考察的試驗。

表2結(jié)果顯示，綠原酸的含量，0月時最高為3.431 mg·g-1。在簡易庫貯藏27個月后出現(xiàn)下降，最低值為2.536 mg·g-1，下降了26.1%；在冷藏庫中含量基本保持不變。

3,5-O-二咖啡?；鼘幩岬暮?，0月時最高，為21.62 mg·g-1。在簡易庫貯藏15個月后出現(xiàn)下降，最低值為16.89 mg·g-1，下降了21.8%，之后未再繼續(xù)下降；在冷藏庫中的含量基本保持不變。

木犀草苷的含量出現(xiàn)了波動，總體呈現(xiàn)升高趨勢。在簡易庫貯藏15個月后升高到1.622 mg·g-1，最高值為第27個月時的1.705 mg·g-1，上升了1.12倍。在冷藏庫貯藏27個月后升高到1.861 mg·g-1，上升了1.31倍。

3 討論

本實驗中所用菊花為亳菊，類白色，體輕質(zhì)柔潤。在簡易庫中貯藏15個月時出現(xiàn)了輕度的變色，呈黃白色，但是在貯藏27個月后加深為黃褐色，質(zhì)地輕脆易碎，影響臨床的調(diào)劑。在冷藏庫中貯藏27個月后才出現(xiàn)輕度的色澤加深，為黃白色，依舊體輕柔潤。相比于冷藏庫，簡易庫中菊花的色澤在每個時段都相對較深。

在貯藏33個月的過程中，菊花的水分始終在《中國藥典》規(guī)定的不得高于15%的范圍內(nèi)，不過在簡易庫貯藏27個月后低到了7.22%。這與花類藥材失水后色澤會由鮮艷變?yōu)榘档?，從而造成感官上色澤加深[11]的現(xiàn)象一致，說明冷藏庫的條件更有利于保持花類藥材的色澤。

綠原酸的含量盡管最低值低到0.25%，但依舊在中國藥典規(guī)定的不得低于0.20%的范圍內(nèi)。綠原酸含量隨著貯藏時間的延長，出現(xiàn)的這種下降現(xiàn)象與綠原酸在溫度和光照的影響下會被破壞的報道[12-13]是一致的。

3,5-O-二咖啡酰基奎寧酸的含量，在簡易庫中貯藏15個月后出現(xiàn)了顯著的下降。文獻(xiàn)曾報道，該化合物在高溫的炒制條件下易被破壞[13]，本文的結(jié)果顯示，即使是在最高42 ℃的簡易庫條件下也會出現(xiàn)一定程度的破壞。不過，即使經(jīng)過33個月的貯藏，無論是簡易庫還是冷藏庫，仍然在中國藥典規(guī)定的不得低于0.70%的范圍內(nèi)。

綜合以上貯藏過程中外觀和理化指標(biāo)的動態(tài)測定，冷藏更有利于質(zhì)量的穩(wěn)定，而在簡易庫條件下，建議其貯藏時間不得超過27個月。