活血止痛膠囊中乳香來源鑒別方法研究

聶黎行 孫磊 戴忠 馬雙成

[摘要] 目的 建立活血止痛膠囊中乳香來源的鑒別方法。 方法 采用顯微和氣相色譜（GC）技術(shù)對江西百神昌諾藥業(yè)有限公司、南京中山制藥有限公司、珠海安生鳳凰制藥有限公司的活血止痛膠囊及其原料制乳香進(jìn)行研究。樣品采用乙醇超聲提取，并經(jīng)HP-INNOWAX毛細(xì)管柱分離，初始溫度50℃，保持3 min，以15℃/min的速率升至160℃。 結(jié)果 根據(jù)顯微鑒別結(jié)果可首先排除印度乳香。GC鑒別結(jié)果顯示，所有樣品均檢出乙酸辛酯，均未檢出α-蒎烯，提示企業(yè)使用的原料均是埃塞俄比亞的乳香而非索馬里的乳香。 結(jié)論 本研究所建立的方法準(zhǔn)確、簡便、快速，可為含乳香中成藥的質(zhì)量控制提供參考。

[關(guān)鍵詞] 活血止痛膠囊;乳香;乙酸辛酯;α-蒎烯;顯微;氣相色譜

[中圖分類號] R284.1? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-7210（2019）03（c）-0114-04

[Abstract] Objective To establish the identification method for the source of frankincense in Huoxue Zhitong Capsules from Jiangxi Baishen Pharmaceutical Co.， Ltd.， Nanjing Zhongshan Pharmaceutical Co.， Ltd.， and Nanjing Zhongshan Pharmaceutical Co.， Ltd.. Methods Microscopy and gas chromatography （GC） were used to investigate Huoxue Zhitong Capsules from 3 manufactures and their processed frankincense. Samples were ultrasonicated with ethanol and analyzed on an HP-INNOWAX capillary column. The column temperature was set at 50℃ for 3 min and then programmed at 15℃/min to 160℃. Results According to microscopic identification， India frankincense was excluded first. Then based on the results of GC identification， octyl acetate instead of α-pinene was found in all samples， which indicated that the manufactures used Ethiopic frankincense rather than Somali frankincense as raw material. Conclusion The method established in this study is accurate， simple and rapid， and can provide reference for the quality control of Chinese patent medicines containing frankincense.

[Key words] Huoxue Zhitong Capsules; Frankincense; Octyl acetate; α-pinene; Microscopy; Gas chromatography

乳香為常用樹脂類藥材，自古依賴進(jìn)口[1]。目前，我國法定的藥用乳香為埃塞俄比亞乳香和索馬里乳香，2015年版《中華人民共和國藥典》[2]（以下簡稱《中國藥典》）收載其原植物分別為橄欖科植物Boszvellia carterii Birdw.和Boswcllia bhaw-dajiana Birdw.。其他國家藥典[3-5]收載的乳香與我國不同，是原植物Boswcllia serrata Roxb.的印度乳香。由于乳香來源比較混亂，有學(xué)者[6-11]采用薄層色譜法、高效液相色譜法、液質(zhì)聯(lián)用法等手段鑒別索馬里乳香、埃塞俄比亞乳香和印度乳香。乳香具有活血定痛、消腫生肌的作用[12-16]，廣泛用于傷科中成藥?；钛雇茨z囊由當(dāng)歸、三七、制乳香、冰片、土鱉蟲、自然銅（煅）等6味藥材制成，具有活血祛瘀、消腫止痛的作用，適用于跌打損傷、瘀血腫痛[17-19]。本研究根據(jù)制乳香原料樣品的性狀和顯微特征，以及原料和相應(yīng)制劑的氣相特征峰的歸屬，對活血止痛膠囊中乳香的來源加以鑒別，以期為相關(guān)產(chǎn)品中乳香的質(zhì)量評價(jià)提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

AE240萬分之一電子天平（瑞士Mettler公司）、BX50-32H01生物顯微鏡（日本Olympus公司）、7890N氣相色譜儀（美國Agilent公司）。

1.2 試藥

乙酸辛酯對照品（生產(chǎn)批號：111671-201704）、α-蒎烯對照品（生產(chǎn)批號：110897-201803）均購自中國食品藥品檢定研究院。活血止痛膠囊及相應(yīng)的制乳香原料來自3個(gè)生產(chǎn)企業(yè)，具體見表1。水合氯醛、乙醇均為分析純，均購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

2 方法與結(jié)果

2.1 性狀研究

南京中山制藥有限公司、江西百神昌諾藥業(yè)有限公司、珠海安生鳳凰制藥有限公司提供的制乳香原料代表性樣品均為不規(guī)則塊狀物，表面黃白色或淡棕色，半透明;質(zhì)地脆，易砸碎，砸碎后破碎面有蠟樣光澤;具特異香氣，遇熱易軟化。均符合2015年版《中國藥典》一部乳香項(xiàng)下的規(guī)定。

2.2 顯微鑒別

本研究參考文獻(xiàn)[12]中提出的一種鑒別不同來源乳香的方法對乳香進(jìn)行鑒別，即在顯微鏡下，印度乳香的塊狀物溶解過程緩慢，而埃塞俄比亞乳香和索馬里乳香的塊狀物由邊緣向中心迅速溶解。按上述方法對3個(gè)企業(yè)提供的原料進(jìn)行分析，每個(gè)樣品從包裝中不同位置各取3份，研細(xì)后制片。結(jié)果所有樣品在顯微鏡下均可檢出大量不規(guī)則塊狀物，且迅速由邊緣向中心溶解?？沙醪脚卸?個(gè)企業(yè)的活血止痛膠囊中使用的制乳香為埃塞俄比亞乳香或索馬里乳香，而非印度乳香。

2.3 氣相色譜鑒別

2.3.1 色譜條件? 色譜柱：HP-INNOWAX毛細(xì)管柱（0.25 mm × 30 mm，0.25 μm），程序升溫：50℃保持3 min，以15℃/min的速率升至160℃;載氣流速：1.9 mL/min，分流比10 ∶1;進(jìn)樣量：1 μL;進(jìn)樣口溫度：240℃;FID檢測器溫度：280℃。

2.3.2 α-蒎烯對照品溶液和乙酸辛酯對照品溶液的制備? 稱取兩種照品各約10 mg，分別置10 mL量瓶中，加無水乙醇溶解，搖勻，再加無水乙醇定容至刻度，即得。

2.3.3 活血止痛膠囊和制乳香供試品溶液的制備? 取兩種樣品，分別研細(xì)，各稱取約1.0 g，分別至50 mL錐形瓶中，精密加入無水乙醇10.0 mL，搖勻，超聲處理（功率100 W，頻率40 kHz）10 min，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3.4 測定結(jié)果? 2015年版《中國藥典》乳香藥材標(biāo)準(zhǔn)采用乙酸辛酯為對照鑒別埃塞俄比亞乳香;采用α-蒎烯為對照鑒別索馬里乳香。文獻(xiàn)[20-21]采用氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（GC-MS）法分析不同來源乳香成分異同，結(jié)果索馬里乳香揮發(fā)油主成分為α-蒎烯，乙酸辛酯含量很低或不含;埃塞俄比亞乳香揮發(fā)油主成分為乙酸辛酯，α-蒎烯含量很低或不含。本研究所有制乳香原料和活血止痛膠囊樣品均未檢出α-蒎烯，均檢出乙酸辛酯。因此，可判斷活血止痛膠囊中使用的制乳香為埃塞俄比亞乳香。

3 討論

乳香約有四五千年的藥用史，國內(nèi)外文獻(xiàn)、標(biāo)準(zhǔn)對其基源的描述不一致，其有可能造成中成藥中乳香投料的混亂?；词侵兴幯芯康幕?，乳香存在的基源問題可能引起中藥在質(zhì)量和療效上的不一致。據(jù)據(jù)國家藥品監(jiān)督管理局網(wǎng)站統(tǒng)計(jì)，活血止痛膠囊共有4家企業(yè)生產(chǎn)，涉及批準(zhǔn)文號7個(gè)。對4個(gè)廠家通過發(fā)函調(diào)研和電話溝通，了解到目前實(shí)際只有3個(gè)廠家還在正常生產(chǎn)活血止痛膠囊。本研究的實(shí)驗(yàn)對象由以上3個(gè)廠家提供，可以代表品種市場流通、使用的實(shí)際情況。本研究結(jié)果表明，目前該制劑使用的乳香全部為埃塞俄比亞乳香。

[參考文獻(xiàn)]

[1]? 孫磊，徐紀(jì)民，金紅宇，等.乳香來源的本草學(xué)、植物學(xué)和成分分析研究[J].中國中藥雜志，2011，36（2）：112-116.

[2]? 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：223-224.

[3]? The United States Pharmacopeial Convention. USP36-NF31[S]. Maryland： The United States Pharmacopeial Convention，2013：2015.

[4]? The European Pharmacopoeia Commission. European Pharmacopoeia 9.0 [S]. Strasbourg：European Directorate for the Quality Control of Medicine，2016：1392-1393.

[5]? Government of India Ministry of Health and Family Welfare. Indian pharmacopoeia，Vol 1 [S]. Ghaziabad：The Indian Pharmacopoeia Commission，2010：2516.

[6]? Zhang C，Lei S，Tian RT，et al. Combination of quantitative analysis and chemometric analysis for the quality evaluation of three different frankincenses by ultra high performance liquid chromatography and quadrupole time of flight mass spectrometry [J]. J Sep Sci，2015，38（19）：3324-3331.

[7]? 胡振波，張瓊光，李霞.不同產(chǎn)地乳香指紋圖譜的研究[J].中國藥師，2018，21（6）：1007-1010.

[8]? 楊辛欣，李超英，王帥，等.中藥乳香質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2017，23（12）：77-81.

[9]? 楊尚梅.灰色模式識別不同地區(qū)藥用乳香的質(zhì)量評價(jià)[J].洛陽理工學(xué)院學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2016，26（2）：15-18.

[10]? 張金龍，黃雨婷，嚴(yán)國俊，等.乳香揮發(fā)油成分的GC-MS分析[J].中南藥學(xué)，2016，14（4）：375-377.

[11]? 馬麗.高效液相色譜法、氣相色譜法及氣相色譜-質(zhì)譜法對西黃丸中11-羰基-β-乳香酸的鑒別及含量測定比較[J].貴州醫(yī)藥，2018，42（6）：666-667.

[12]? 孫妍，商慶輝.乳香中三萜類化合物和藥理活性的研究進(jìn)展[J].環(huán)球中醫(yī)藥，2016，9（5）：616-620.

[13]? 劉青，黃德弘，黃堅(jiān)紅，等.乳香外洗方聯(lián)合肢體功能鍛煉治療腦梗死后SHS臨床觀察[J].中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2018，28（12）：74-78.

[14]? 柳敏娜，劉天龍，劉利敏，等.α-乳香酸灌胃對小鼠腎間質(zhì)纖維化的防治作用及其機(jī)制探討[J].山東醫(yī)藥，2018，58（7）：18-22.

[15]? 寧張弛，宋志前，劉元艷，等.不同提取方式對醋乳香中主要乳香酸類成分含量及其抗炎活性的影響[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2017，23（22）：14-19.

[16]? 蔡紅蝶，宿樹蘭，周衛(wèi)，等.乳香屬藥用植物中乳香酸類化學(xué)成分、生物活性及其作用機(jī)制研究進(jìn)展[J].中草藥，2016，47（12）：2175-2181.

[17]? 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：1292-1293.

[18]? 蔡樂，楊梅.活血止痛膠囊致藥物性皮炎1例[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2017，34（3）：469.

[19]? 王玉忠，鄭傳莉.活血止痛膠囊對大鼠急性軟組織損傷的修復(fù)作用研究[J].中藥材，2015，38（6）：1263-1265.

[20]? 王趙，孫磊，康帥，等.乳香來源研究（Ⅱ）.性狀、顯微、TLC和HPLC鑒別技術(shù)分析三種乳香[J].中藥材，2014， 37（6）：981-986.

[21]? Al-Harrasi A，Al-Saidi S. Phytochemical analysis of the essential oil from botanically certified oleogum resin of Boswellia sacra （Omani luban） [J]. Molecules，2008，13（9）：2181-2189.

（收稿日期：2018-05-08? 本文編輯：王? ?蕾）