EB病毒血清學(xué)及DNA聯(lián)合檢測在兒童傳染性單核細(xì)胞增多癥的應(yīng)用

朱紅巖

徐州醫(yī)科大學(xué)附屬連云港市東方醫(yī)院兒科，江蘇連云港 222042

傳染性單核細(xì)胞增多癥(IM)屬于一類急性傳染病，疾病特征包括外周血中淋巴細(xì)胞增加、發(fā)熱、淋巴結(jié)及肝脾腫大、咽峽炎，另外部分患兒還會有異形淋巴細(xì)胞表現(xiàn)[1]。臨床證實這一疾病多由EB病毒感染引起，小兒是主要發(fā)病人群，在每一年內(nèi)各個時間段都可能發(fā)病，如果沒有實施及時治療，會導(dǎo)致機體多臟器受損。但這一疾病在早期難以準(zhǔn)確診斷，漏診或者誤診的可能性大，小兒因為抗EB病毒的抗體沒有明顯反應(yīng)，所以在診斷上的難度更大[2]。該研究選取該院2015年1月—2018年11月中的54例兒童傳染性單核細(xì)胞增多癥為對象，具體分析診斷中進行EB病毒血清學(xué)及DNA聯(lián)合檢測的價值。

1 對象與方法

1.1 研究對象

以該院中收治的54例兒童傳染性單核細(xì)胞增多癥為對象，包括25例男以及29例女患兒，年齡范圍：6個月～14歲，年齡平均（8.28±3.36）歲。全部患兒均除外伴有腺病毒、巨細(xì)胞病毒、化膿性鏈球菌、弓形體感染，將全部患兒根據(jù)年齡分為3組，2歲以下9例，2～3歲10例，4歲及以上35例。全部患兒家長均對該研究知情同意，并通過倫理委員會的批準(zhǔn)。

1.2 方法

全部患兒均由同一組醫(yī)護人員實施EB病毒血清學(xué)及DNA聯(lián)合檢測，抽取2 mL靜脈血液，通過免疫酶聯(lián)吸附法對 EBV 抗體 EBNA-Ig G、VCA-Ig G、VCA-Ig M、EAIg G進行測定。抽取急性期≤3周、恢復(fù)期4～8周、隨訪期≥24周共3個時段的血清樣本，對不同年齡層的EBV抗體水平進行比較，嚴(yán)格依據(jù)試劑說明書進行操作，陽性標(biāo)準(zhǔn)：≥1.0×103拷貝。

1.3 統(tǒng)計方法

用SPSS 22.0統(tǒng)計學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，[n(%)]表示計數(shù)資料，行χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 EB病毒血清學(xué)結(jié)果

VCA-IgM檢測顯示總陽性率為70.37%，EBV-DNA陽性率為75.93%，均顯示年齡越大，陽性率逐漸提高，VCA-IgM不同年齡段陽性率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=5.261 3,P=0.0218），EBV-DNA檢測4歲及以上陽性率高于 2 歲以下（χ2=3.695 2,P=0.007 1），與 2～3 歲差異無統(tǒng)計學(xué)意義 （χ2=1.625 1，P=0.261 8）；VCA-IgG 檢測總陽性率為96.30%，在2歲以上的陽性率明顯高于2歲及以下（χ2=4.215 6,P=0.003 1）。 見表1。

表1 不同年齡患兒EB病毒血清學(xué)各項指標(biāo)結(jié)果比較[n(%)]

2.2 EA-IgG、EBNA-IgG 結(jié)果

在不同時期，EA-IgG陽性率隨著年齡增加逐漸提升，4歲及以上患兒不同時期陽性率均明顯高于4歲以下（χ2=4.052 6，P=0.000 5）；急性期、恢復(fù)期 EBNA-IgG 在不同年齡層均處于較低水平，在隨訪期水平有所升高，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=1.052 0，P=0.163 8），見表2。

表2 不同年齡患兒EA-IgG、EBNA-IgG結(jié)果[n(%)]

3 討論

傳染性單核細(xì)胞增多癥是由EBV感染導(dǎo)致的單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)急性增生性傳染病。機體出現(xiàn)EBV感染后，宿主細(xì)胞主要是B淋巴細(xì)胞，B淋巴細(xì)胞受到EB病毒感染后，B淋巴細(xì)胞能夠表達多種EB病毒特異性抗原，使得機體出現(xiàn)免疫反應(yīng)，形成對抗EBV的不同抗體[3]。在原發(fā)性EBV感染期間，最先出現(xiàn)的是對抗衣殼抗原（CA）的Ig M、IgG抗體（抗CA-IgM、抗CA-IgG），其中早期會出現(xiàn)抗CA-IgM，1～2個月后會逐漸消除，之后會出現(xiàn)CA-IgG抗體。

當(dāng)處于急性感染的晚期階段時，會出現(xiàn)抗早期抗原（EA）抗體，其出現(xiàn)能夠持續(xù)最長半年時間[4]。處于恢復(fù)期時，會出現(xiàn)晚期抗核抗原（NA）抗體，抗 CA-IgG、抗 NAIgG都會持續(xù)存在。臨床診斷EB病毒感染傳染性單核細(xì)胞增多癥多以抗CA-IgM陽性為重要依據(jù)，不過EB病毒感染的血清學(xué)會有非常復(fù)雜的反應(yīng)[5]。部分患兒生成的抗CA-IgM會延后，部分甚至可能不出現(xiàn)，這種情況的存在明顯增加臨床傳染性單核細(xì)胞增多癥早期診斷的難度[6]。

當(dāng)前的研究多集中在傳染性單核細(xì)胞增多癥診斷中CA-IgM的應(yīng)用價值，顯示具有較高的陽性率，分析和納入對象年齡、出現(xiàn)特征性傳染性單核細(xì)胞增多癥臨床癥狀才進行測定存在相關(guān)性[7-8]。該研究對54例兒童傳染性單核細(xì)胞增多癥進行EB病毒血清學(xué)及DNA聯(lián)合檢測，結(jié)果顯示VCA-IgM陽性率僅為70.37%，處于較低水平，分析是由于本研究納入對象的年齡均偏低。臨床發(fā)現(xiàn)2歲以下的小兒抗 CA-IgM、抗 CA-IgG抗體的陽性率均處于較低水平，該研究2歲以下小兒抗CA-IgM陽性率為33.33%，抗CA-IgG抗體陽性率為77.78%，該研究4歲及以上患兒抗CA-IgM陽性率為82.86%，比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義 （χ2=5.261 3，P=0.021 8）。 證實應(yīng)用血清學(xué)標(biāo)準(zhǔn)能夠準(zhǔn)確診斷2歲以上且處于急性期的兒童傳染性單核細(xì)胞增多癥，不過用于2歲以下的兒童傳染性單核細(xì)胞增多癥診斷中缺乏足夠依據(jù)。

臨床針對2歲以下的兒童傳染性單核細(xì)胞增多癥的診斷，不可以僅僅依據(jù)抗 CA-IgM陽性率進行診斷，處于急性期、恢復(fù)期時，選取兩份血清升高抗 CA-IgG抗體滴度超過4倍的應(yīng)用價值更高，提示必須實施血清檢測[9]。該研究結(jié)果還顯示，2歲以下患兒抗 EA抗體、抗CA-Ig M/IgG的陽性檢出率均不高，分析是由于低齡小兒抗體反應(yīng)較弱導(dǎo)致?；謴?fù)期晚期才出現(xiàn)NA-IgG，部分患兒在隨訪期還是檢測不到NA-IgG。通過進行EBV-DNA檢測，能夠完成EBV攜帶者的低水平復(fù)制檢測，并且還能夠?qū)BV引起的相關(guān)疾病活動性感染進行檢測[10]。針對EBV攜帶者，淋巴細(xì)胞中EBV-DNA載量水平很低，不過這類攜帶者的血清中、血漿中都難以檢測到 EBV-DNA[11]。實時熒光定量 PCR可以對病毒拷貝數(shù)進行比較準(zhǔn)確的檢測，可以將EB病毒感染、病毒復(fù)制情況非常準(zhǔn)確的反映出來，可以協(xié)助兒童傳染性單核細(xì)胞增多癥的臨床診斷，還能夠為治療方案的確定提供科學(xué)信息[12]。

類似研究顯示[13]，2歲以下患兒EBV-DNA載體陽性率為66.67%，明顯高于2歲以下患兒VCA-Ig M陽性率33.33%（P＜0.05），該研究結(jié)果與之存在一致性。該研究顯示2歲以下患兒在急性期血清學(xué)檢查結(jié)果顯示陰性，EBV-DNA顯示陽性，最后的診斷是因為血清學(xué)抗CA-Ig G復(fù)查結(jié)果顯示為陰性。所以當(dāng)處于兒童傳染性單核細(xì)胞增多癥急性期時，如果EBV抗體沒有被檢測到，可以結(jié)合進行EBV-DNA檢測以提升診斷有效性[14]。尤其針對兒童群體，其抗體生成存在延遲，且抗體較弱，免疫反應(yīng)沒有完全成熟，因此如果小兒出現(xiàn)比較明顯的傳染性單核細(xì)胞增多癥表現(xiàn)，但是急性期的抗體檢測又顯示為陰性，則可以聯(lián)合EBV-DNA檢測以獲得更高的診斷準(zhǔn)確性。

綜上所述，EB病毒血清學(xué)及DNA聯(lián)合檢測用于診斷兒童傳染性單核細(xì)胞增多癥具有良好價值，值得推廣。