議HPLC法同時(shí)測(cè)定酒類中防腐劑和甜味劑的含量

朱婉玲

摘要：本文采用HPLC法對(duì)白酒中的3種防腐劑與2種甜味劑含量進(jìn)行測(cè)量，分別為苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸、安賽蜜與阿斯巴甜。將樣品中的乙醇去除后，加入亞鐵氰化鉀溶液、乙酸鋅，用C18色譜柱分離后，將甲醇、乙酸銨溶液按照流速1.0mL·min-1、波長(zhǎng)230nm、20μL進(jìn)樣量淋洗，使5種組分分離，完成對(duì)白酒中防腐劑與甜味劑含量的同時(shí)測(cè)定。

關(guān)鍵詞：HPLC法；白酒；防腐劑；甜味劑

中圖分類號(hào)：O657.63

為了達(dá)到食品防腐、保鮮等目標(biāo)，通常會(huì)在食品中添加一些防腐劑，而大部分添加劑均為人工化學(xué)合成，過(guò)度食用會(huì)引起中毒，危及消費(fèi)者的生命安全。白酒作為我國(guó)傳統(tǒng)的蒸餾酒，為了滿足消費(fèi)者對(duì)白酒的甜味、回甜感，使防腐劑與調(diào)味劑也成為了白酒企業(yè)重要的研究課題。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

（1）實(shí)驗(yàn)試劑。甲醇（色譜純）、乙酸銨（0.02mol/L）、乙酸鋅（0.03mol/L）、NaOH（20g/L）、亞鐵氰化鉀（優(yōu)級(jí)純）、苯甲酸（0.100g/L）、安賽蜜（1mg/mL）、山梨酸（0.001g/L）、超純水、純度超過(guò)99.9%的脫氫乙酸以及純度超過(guò)99%的阿斯巴甜。

（2）溶液配制。①220g/L的乙酸鋅溶液：將220g乙酸鋅放入燒杯中，與800mL的超純水混合，純水定容到1L。②亞鐵氰化鉀溶液（優(yōu)級(jí)純）：將106g的亞鐵氰化鉀放入燒杯中，與800mL的純水混合后，定容至1L。③40g·L-1的NaOH溶液：40gNaOH放入燒杯中，與800mL的純水混合后，定容至1L。④1.0mg·mL-1阿斯巴甜溶液：將0.1g阿斯巴甜放入10mL的容量瓶中，用50∶50比例的甲醇與水定容到刻度，將其放置于4℃冰箱中儲(chǔ)存。⑤1.0mg·mL-1脫氫乙酸溶液：稱取0.05g的脫氫乙酸，放入到5mL的容量瓶中，將甲醇與水以5∶95的比例混合后定容到刻度，將其放入4℃冰箱中儲(chǔ)存。

1.2 儀器與設(shè)備

Waters e-2695高效液相色譜儀、紫外可見(jiàn)光檢、0.22μm水相過(guò)濾器、艾科浦U系列純化水機(jī)、HH-S型電熱恒溫水浴鍋。

1.3 試驗(yàn)方法

將5g白酒樣品放入蒸發(fā)皿中，用沸水加熱后去除其中的乙醇，轉(zhuǎn)移到50mL的比色管中，將等量的乙酸鋅溶液與亞鐵氰化鉀溶液混合沉淀后，用NaOH調(diào)節(jié)pH值，使其呈中性，將純水加入其中定容，并攪拌均勻。最后將白酒樣品轉(zhuǎn)移到離心管中，以3000r·min-1的轉(zhuǎn)速離心5min，在上層選取0.45μm水相濾膜后放入機(jī)器中測(cè)定。在樣品的測(cè)定上，利用自動(dòng)化進(jìn)樣器對(duì)白酒樣品進(jìn)行處理，利用HPLC法對(duì)色譜條件進(jìn)行分析，保留時(shí)間定性，以外標(biāo)法為依據(jù)，對(duì)峰面積進(jìn)行定量[1]。

在色譜的準(zhǔn)備上，選用4.6×250mm，5μm的色譜柱；將紫外檢測(cè)波長(zhǎng)調(diào)節(jié)為230nm，色譜柱的溫度設(shè)定為25℃；以甲醇和乙酸銨的混合液為流動(dòng)相，流速設(shè)置為1.0mL·min-1，進(jìn)樣量為20μL。在梯度洗脫流程上，在0～10min內(nèi)，甲醇濃度為8%～40%；在10～12 min內(nèi)，甲醇為40%～60%；在12～14min內(nèi)，甲醇濃度為60%～8%；在14～20min內(nèi)，甲醇濃度為8%。

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的確定

利用二極管陣列檢測(cè)器對(duì)3種防腐劑、2種甜味劑進(jìn)行三維光譜掃描，檢測(cè)波長(zhǎng)的范圍在190～400nm，其中安賽蜜的最大吸收波長(zhǎng)為226nm、苯甲酸的最大吸收波長(zhǎng)為223nm、脫氫乙酸的波長(zhǎng)為229nm、山梨酸吸收波長(zhǎng)為252nm、阿斯巴甜的波長(zhǎng)為208nm。在多次試驗(yàn)后，由于不同物質(zhì)在靈敏度、抗干擾性能上存在差異，最終將山梨酸的檢測(cè)波長(zhǎng)定為252nm，剩余4種組分的檢測(cè)波長(zhǎng)綜合考慮定為230nm。在此條件下，能夠保障5種添加劑的分離效果達(dá)到最佳狀態(tài)，在靈敏度與穩(wěn)定性上也得到大大增強(qiáng)。

2.2 流動(dòng)相的確定

按照8∶92的比例配制甲醇和乙酸銨，將其作為流動(dòng)相進(jìn)行洗脫。從結(jié)果來(lái)看，5種添加劑的色譜柱時(shí)間較為相近。結(jié)果表明，甲醇比例逐漸增加，物質(zhì)在色譜柱上的時(shí)間不斷縮短，只有山梨酸、安賽蜜與苯甲酸的保留時(shí)間變化較小，而脫氫乙酸、阿斯巴甜的時(shí)間變化幅度較大，依然未得到有效分離。在多次試驗(yàn)后，最終將梯度洗脫流程確定為：在0～10min內(nèi)甲醇濃度為8%～40%；在10～12min內(nèi)，甲醇為40%～60%；在12～14min內(nèi)甲醇為60%～8%；在14～20min內(nèi)，甲醇濃度為8%。這樣做能夠使5種物質(zhì)相互分離，峰型更加理想。

2.3 線性范圍的確定

根據(jù)上述試驗(yàn)方法對(duì)混合液進(jìn)行測(cè)定，根據(jù)峰面積對(duì)質(zhì)量濃度進(jìn)行回歸分析，并繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線。5種添加劑的相關(guān)系數(shù)、線性范圍、檢出限見(jiàn)表1。

從回歸分析結(jié)果中能夠看出，5種添加劑在分離條件下，相關(guān)系數(shù)值均超過(guò)0.9990。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中指出，樣品檢出限為3倍噪音，在本文的試驗(yàn)中對(duì)5種添加劑進(jìn)行檢驗(yàn)，使檢出限保持在0.3～1.5mg·L-1范圍內(nèi)[2]。

2.4 加標(biāo)回收率與偏差率

針對(duì)白酒樣品中的5種添加劑分別進(jìn)行三次加標(biāo)回收測(cè)試，根據(jù)上述試驗(yàn)法對(duì)白酒樣品事先進(jìn)行處理后，便可計(jì)算出加標(biāo)回收率，見(jiàn)表2。

從測(cè)試結(jié)果可以看出，5種添加劑的加標(biāo)回收率均處于87.3%～110.0%范圍內(nèi)，在結(jié)果上存在相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，偏差范圍在0.5%～3.6%，這代表著該試驗(yàn)具有較高的精準(zhǔn)度，能夠與白酒樣品的檢測(cè)要求充分符合[3]。

3 結(jié)論

在本文的研究中，在230 nm紫外檢測(cè)波長(zhǎng)下，對(duì)苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸、安賽蜜與阿斯巴甜5種添加劑進(jìn)行梯度淋洗，使各組分相互分離。試驗(yàn)結(jié)果表明，此種方式的加標(biāo)回收率可達(dá)到87.3～110.0%，相對(duì)偏差范圍在0.5～3.6%，操作簡(jiǎn)單方便，在20min內(nèi)便可實(shí)現(xiàn)分離，在精確度上也與樣品測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)相符合。

參考文獻(xiàn)

[1]徐 燁，李麗君，王乃芝，等.高效液相色譜法測(cè)定飲料中防腐劑和甜味劑[J].食品科學(xué)，2016，29（6）：339-341.

[2]王 淼，黃曉林.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定乳及乳制品中防腐劑和甜味劑[J].中國(guó)乳品工業(yè)，2015，38（11）：41-42.

[3]沈志武，沈蕊蓮.食品中常用防腐劑和甜味劑的高效液相色譜同時(shí)測(cè)定法[J].職業(yè)與健康，2016，26（4）：398-399.

（作者單位：廣東省九江酒廠有限公司）