高效液相色譜法測(cè)定化妝品中的辛酰羥肟酸

莫庭源，葉凌聰，梁文耀，劉鳳丹，魏海峰

（廣州質(zhì)量監(jiān)督檢測(cè)研究院，廣東廣州 511447）

化妝品配方中原料種類繁多，在pH、溫度等條件適宜的情況下，環(huán)境微生物入侵會(huì)引起產(chǎn)品腐敗變質(zhì)，因此，防腐劑在化妝品配方中極其重要[1]。防腐劑可以通過(guò)抑制細(xì)胞中基礎(chǔ)代謝酶的合成或重要生命物質(zhì)核酸和蛋白質(zhì)的合成，起到阻礙細(xì)胞生長(zhǎng)的作用[2]，是一種長(zhǎng)時(shí)間維持化妝品品質(zhì)的保護(hù)劑[3]。

辛酰羥肟酸，又稱辛基羥肟酸、辛酰異羥肟酸或N-羥基正辛酰胺，是一種低毒且高效的螯合類捕獲劑[4-8]，它能強(qiáng)效抑制和通過(guò)螯合金屬離子對(duì)抗霉菌，通過(guò)穩(wěn)定體系中的部分無(wú)機(jī)鹽防腐[9]，是一種新型的化妝品防腐劑。

傳統(tǒng)的化妝品防腐劑多為化學(xué)合成品，當(dāng)其使用量大或長(zhǎng)期使用時(shí)，會(huì)產(chǎn)生較大的不良反應(yīng)，對(duì)身體產(chǎn)生一定的危害，嚴(yán)重者甚至可能導(dǎo)致癌變[10-11]。相比之下，辛酰羥肟酸具有優(yōu)異的抗菌、抑菌性能，可用于不含化學(xué)防腐劑配方體系。

由于辛酰羥肟酸不在《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》（2015年版）的防腐劑列表中，卻具有良好的防腐性能，所以越來(lái)越多化妝品生產(chǎn)商把其當(dāng)作防腐劑添加到化妝品中，同時(shí)宣稱其產(chǎn)品“不含防腐劑”，以達(dá)到宣傳效果，因?yàn)闊o(wú)添加防腐劑的化妝品更受消費(fèi)者青睞[12]。

目前，尚未有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道化妝品中辛酰羥肟酸的檢測(cè)方法，本研究擬建立起化妝品中辛酰羥肟酸含量測(cè)定的高效液相色譜法，為監(jiān)管部門和生產(chǎn)企業(yè)監(jiān)控產(chǎn)品質(zhì)量提供技術(shù)支持，進(jìn)一步規(guī)范化妝品防腐劑的使用。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 試劑和儀器

辛酰羥肟酸對(duì)照品（CAS No：7377-03-9），甲醇（色譜純，美國(guó)Spectrum公司），實(shí)驗(yàn)用水為超純水（Milli-Q超純水系統(tǒng)，美國(guó)Millipore公司），甲酸（色譜純，阿拉?。?，SK8200HP超聲清洗儀（上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司），Agilent 1260高效液相色譜儀（配備自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、二極管陣列檢測(cè)器），IKA MS3 digital渦旋混勻器（德國(guó)IKA公司），分析天平[感量為0.1 mg，賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司]，離心機(jī)[曦瑪離心機(jī)（揚(yáng)州）有限公司]。

1.2 色譜條件

色譜柱：Waters XBridge C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流速：1.0 mL/min；柱溫：25 ℃；進(jìn)樣量：10 μL；流動(dòng)相：甲醇+0.1%甲酸水溶液（55+45，v/v），等度洗脫，分析時(shí)間15 min；檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

稱取一定質(zhì)量的辛酰羥肟酸對(duì)照品于50 mL容量瓶中，加入少量甲醇溶解后，用甲醇定容至刻度線，配制成濃度為2 000 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。分別精密吸取一定體積的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于10 mL具塞比色管中，用甲醇定容至刻度，配制成濃度分別為1、10、20、50、100、150 μg/mL和200 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.4 樣品溶液的制備

稱取樣品1 g（精確至0.000 1 g）于10 mL具塞比色管中（必要時(shí)，置于水浴中去除乙醇等揮發(fā)性有機(jī)溶劑），用甲醇定容，渦旋混勻，超聲提取15 min，靜置至室溫（必要時(shí)取適量于5 000 r/min離心5 min），經(jīng)0.22 μm過(guò)濾膜過(guò)濾后待測(cè)。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的選擇

辛酰羥肟酸在甲醇中具有良好的溶解性，且膏霜、乳、液類化妝品在甲醇中均具有良好的分散性，因此本方法采用甲醇作為提取試劑。為考察超聲時(shí)間和溫度對(duì)提取效率的影響，在空白樣品中加入一定濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液在不同時(shí)間和溫度下進(jìn)行提取，結(jié)果表明超聲時(shí)間為15 min，超聲溫度為25 ℃即可達(dá)到理想的提取效果。采用甲醇+0.1%甲酸水溶液作為流動(dòng)相，對(duì)于不同類型和不同pH值的化妝品樣品分離度高，有效減少基質(zhì)的干擾。在優(yōu)化的色譜條件下，在210～400 nm波長(zhǎng)內(nèi)掃描，結(jié)果顯示辛酰羥肟酸在210 nm附近有較強(qiáng)的紫外吸收，因此選擇210 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。辛酰羥肟酸標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的色譜圖如圖1所示，可見在此色譜條件下標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的峰型良好。

圖1 辛酰羥肟酸標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖

圖2 樣品譜圖

圖3 標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2 線性范圍、工作曲線、檢出限

取1.3所配制的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在本實(shí)驗(yàn)條件下對(duì)辛酰羥肟酸進(jìn)行測(cè)定，以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)建立標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。結(jié)果顯示，在一定的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，辛酰羥肟酸呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限見表1。

2.3 回收率與精密度

取膏霜類、乳液類、液態(tài)水基類3種空白基質(zhì)為加標(biāo)基質(zhì)，按本實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行低、中、高（20 mg/L、100 mg/L、150 mg/L）3個(gè)加標(biāo)水平的回收率和精密度實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示，3個(gè)加標(biāo)水平的回收率為97.2%～104.6%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.48%～1.90%（n=6），表明本方法具有良好的準(zhǔn)確度和精密度，可滿足辛酰羥肟酸含量測(cè)定的要求（見表2）。

2.4 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

選取一個(gè)已知含有辛酰羥肟酸的化妝品樣品，按1.4平行制備6份樣品溶液進(jìn)行分析，計(jì)算樣品中辛酰羥肟酸的質(zhì)量濃度，以6次測(cè)定值考察本方法的重復(fù)性，結(jié)果顯示，6次平行的RSD值為1.09%（n=6）。實(shí)驗(yàn)表明，本方法重復(fù)性好。

表1 辛酰羥肟酸的線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限

2.5 實(shí)際樣品檢測(cè)

對(duì)20批次不同類型化妝品樣品中辛酰羥肟酸含量進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果顯示，保濕霜、精華乳、柔膚水各有一批次檢出辛酰羥肟酸，結(jié)果分別為0.018%、0.037%、0.019%。

3 結(jié)論

本文建立了高效液相色譜法測(cè)定化妝品中辛酰羥肟酸的含量測(cè)定方法。樣品采用甲醇作為提取溶劑，超聲作為提取方式，采用Waters XBridge C18色譜柱進(jìn)行分離，所建方法能將目標(biāo)化合物和雜質(zhì)有效分離，前處理方式簡(jiǎn)單快捷，準(zhǔn)確性好，精確度高，應(yīng)用范圍廣，可進(jìn)一步規(guī)范化妝品中防腐劑的使用，為監(jiān)管部門和生產(chǎn)企業(yè)監(jiān)控產(chǎn)品質(zhì)量提供技術(shù)支持。