DNA 免疫技術(shù)在單克隆抗體開(kāi)發(fā)中的研究進(jìn)展

葉爾那扎爾·努爾吐熱 邱麗芬 張富春 張茂祥

（1. 廣州中醫(yī)藥大學(xué)華南針灸研究中心，廣州 510000；2. 新疆大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院 新疆生物資源基因工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，烏魯木齊 830046）

自1972年雜交瘤技術(shù)問(wèn)世以來(lái)，治療性單克隆抗體的開(kāi)發(fā)成為醫(yī)學(xué)和科學(xué)研究的熱點(diǎn)［1］。DNA免疫技術(shù)從1990年開(kāi)始，主要應(yīng)用于針對(duì)流感病毒感染引起的傳染性疾病的疫苗研發(fā)［2-5］。DNA免疫技術(shù)與傳統(tǒng)的蛋白免疫最大區(qū)別在于目的抗原的表達(dá)方式，即蛋白質(zhì)免疫首先在體外合成和純化抗原，然后將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)入動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生免疫應(yīng)答反應(yīng)，而DNA免疫將帶有目的基因序列的質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)入動(dòng)物體內(nèi)，因此外源基因序列在宿主細(xì)胞內(nèi)得以表達(dá)并誘導(dǎo)機(jī)體免疫應(yīng)答［6］。靶向抗原的表達(dá)方式對(duì)于誘導(dǎo)產(chǎn)生高滴度、高親和力的抗體至關(guān)重要，多項(xiàng)研究表明DNA免疫誘發(fā)產(chǎn)生的單克隆抗體的專(zhuān)一性和穩(wěn)定性明顯高于傳統(tǒng)的蛋白質(zhì)免疫。

DNA免疫在宿主細(xì)胞內(nèi)表達(dá)目的基因并誘導(dǎo)機(jī)體免疫應(yīng)答至少有3種機(jī)制，包括直接轉(zhuǎn)染體細(xì)胞、直接轉(zhuǎn)染專(zhuān)職抗原遞呈細(xì)胞（Antigen presenting cells，APCs）和類(lèi)似凋亡機(jī)制（圖1）。直接轉(zhuǎn)染體細(xì)胞：將外源DNA分子直接轉(zhuǎn)入到動(dòng)物體內(nèi)，肌肉細(xì)胞被激活產(chǎn)生MHC I類(lèi)分子，從而誘導(dǎo)機(jī)體免疫應(yīng)答，然而研究表明直接轉(zhuǎn)染體細(xì)胞誘導(dǎo)產(chǎn)生的免疫應(yīng)答反應(yīng)中并非肌細(xì)胞起主導(dǎo)作用，交叉激活專(zhuān)制抗原遞呈細(xì)胞（Antigen presenting cells，APCs）才是誘導(dǎo)機(jī)體免疫應(yīng)答的關(guān)鍵。直接轉(zhuǎn)染專(zhuān)職APCs是指少量的專(zhuān)職 APCs可在注射部位直接被轉(zhuǎn)染，產(chǎn)生內(nèi)源性蛋白，經(jīng)MHC I和MHC II分子完成內(nèi)源性抗原的遞呈，其中樹(shù)突狀細(xì)胞（Dendritic cells，DC）在肌肉注射質(zhì)粒DNA所引起的免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要作用，一方面未成熟的樹(shù)突狀細(xì)胞（Immatured dendritic cells，iDC）識(shí)別外源DNA分子被激活，從而能夠?qū)HC I 類(lèi)復(fù)合體直接遞送到細(xì)胞表面，同時(shí)表達(dá)免疫細(xì)胞協(xié)同刺激分子CD80/86，成熟的樹(shù)突狀細(xì)胞（Matured dendritic cells，mDC）能夠激活CD8+T 細(xì)胞免疫應(yīng)答反應(yīng)；另一方面將外源質(zhì)粒DNA激活樹(shù)突狀細(xì)胞促使它捕獲細(xì)胞間隙的多肽片段復(fù)合物，進(jìn)而經(jīng)內(nèi)化后形成 MHC II類(lèi)復(fù)合體遞送到細(xì)胞表面，從而激活CD4+T細(xì)胞，同時(shí)在不同細(xì)胞因子的協(xié)同作用下誘導(dǎo)機(jī)體體液免疫或細(xì)胞免疫反應(yīng)。類(lèi)似凋亡機(jī)制是指目的抗原或者表達(dá)目的抗原的重組質(zhì)粒序列本身具有轉(zhuǎn)導(dǎo)特性，但是目前這些蛋白的轉(zhuǎn)導(dǎo)作用機(jī)制尚不清楚［7-9］。

DNA 免疫技術(shù)在制備抗體中的應(yīng)用，尤其是對(duì)高效治療性單克隆抗體的開(kāi)發(fā)具有重要意義，與傳統(tǒng)蛋白質(zhì)或多肽免疫方式相比較，DNA 免疫具有諸多優(yōu)勢(shì)。本文根據(jù)前人的研究成果，對(duì)DNA 免疫表達(dá)載體的構(gòu)建、提高DNA免疫效率的優(yōu)化方案、質(zhì)粒DNA的傳遞方式及其優(yōu)點(diǎn)和發(fā)展前景進(jìn)行論述。

1 DNA免疫的構(gòu)建

1.1 抗原的設(shè)計(jì)

DNA 免疫抗原的設(shè)計(jì)需要根據(jù)抗原本身的特性而靈活使用，因此根據(jù)抗原的特性和自身實(shí)際需要，在設(shè)計(jì)引物和表達(dá)載體時(shí)對(duì)蛋白質(zhì)原始序列和特征進(jìn)行改造和優(yōu)化，獲得符合實(shí)際需要的重組質(zhì)粒DNA，但在設(shè)計(jì)抗原時(shí)要保持抗原的免疫原性和原有的生物學(xué)功能，以便最終得到能夠識(shí)別天然抗原表位的高特異性的單克隆抗體（表1）。

圖1 DNA免疫在體內(nèi)誘導(dǎo)產(chǎn)生免疫應(yīng)答的3種機(jī)制

一般來(lái)說(shuō)，將編碼蛋白的全長(zhǎng)基因序列插入到表達(dá)載體上，獲得高特異性單克隆抗體通常適用于大多數(shù)蛋白，尤其是可分泌蛋白或細(xì)胞表面膜蛋白［10-19］，包括人促甲狀腺激素受體（Human thyrotropin receptor，hTSHR）、柯薩奇病毒和腺病毒受體（Coxsackievirus and adenovirus receptor，CAR）、前列腺特異性抗原（Prostate specific antigen，PSA）等。如果靶向抗原是單次跨膜蛋白，我們可以選擇性地將編碼細(xì)胞外或者細(xì)胞內(nèi)蛋白區(qū)域的質(zhì)粒片段插入到表達(dá)載體上，可以誘導(dǎo)產(chǎn)生針對(duì)跨膜蛋白細(xì)胞外或者細(xì)胞內(nèi)區(qū)域的單克隆抗體［23-27］。對(duì)于細(xì)菌毒素的靶點(diǎn)，改造更具有其優(yōu)越性。例如，研究者將艱難梭狀芽胞桿菌毒素A，幽門(mén)螺桿菌空泡細(xì)胞毒素等細(xì)菌毒素作為靶向抗原，選擇性地去除具有毒性的功能區(qū)域而不改變蛋白質(zhì)的免疫原性，經(jīng)過(guò)如此修飾而得到的單克隆抗體，不僅對(duì)機(jī)體沒(méi)有毒害作用，而且能夠有效地預(yù)防和診斷由細(xì)菌感染引起的毒素侵害［28-29］。Puttikhunt等［30］報(bào)道使用膜蛋白錨定序列將登革熱病毒NS1的跨膜區(qū)域轉(zhuǎn)換成膜蛋白。

表1 免疫原設(shè)計(jì)

1.2 表達(dá)載體中啟動(dòng)子的選擇和功能優(yōu)化

DNA 免疫載體設(shè)計(jì)中高效啟動(dòng)子對(duì)于提高目的抗原在宿主細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)起到很重要的作用［6］。Hazen等［33］利用編碼多重穿膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（Multidrug resistance associated protein 4，MRP4）的 cDNA 免疫動(dòng)物，通過(guò)檢測(cè)熒光素酶的活性對(duì)于DNA載體中巨細(xì)胞病毒（Cytomegalovirus，CMV）啟動(dòng)子和人工合成的高效啟動(dòng)子CAG對(duì)誘發(fā)免疫應(yīng)答和產(chǎn)生抗體的激活能力進(jìn)行了比較，結(jié)果表明帶CAG啟動(dòng)子的質(zhì)粒能夠誘導(dǎo)長(zhǎng)期穩(wěn)定的MRP4蛋白的表達(dá)而且增強(qiáng)了抗MRP4的特異性免疫應(yīng)答反應(yīng)。Bates 等［20］通過(guò)熒光素酶報(bào)告基因比較了CMV 啟動(dòng)子和人類(lèi)泛素C啟動(dòng)子對(duì)靶向抗原在宿主細(xì)胞內(nèi)表達(dá)水平的效率，結(jié)果表明帶兩種啟動(dòng)子的表達(dá)載體都能誘導(dǎo)產(chǎn)生高特異性的單克隆抗體，在單次DNA 免疫情況下，泛素啟動(dòng)子C的抗原的半衰期和滴度都比CMV啟動(dòng)子誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體明顯，而在多次DNA 免疫的情況下，二者均能誘導(dǎo)生成高滴度的抗體。載體中其它相關(guān)調(diào)控序列也對(duì)增強(qiáng)啟動(dòng)子的功能有影響，Wang等［34］報(bào)道密碼子的優(yōu)化，病毒啟動(dòng)子功能的增強(qiáng)和前導(dǎo)序列的選擇等策略都在一定程度上提高抗原在宿主細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)效率及增強(qiáng)抗原的免疫原性。

2 使用不同佐劑對(duì)DNA免疫效果的影響

2.1 使用基因佐劑-CpG寡聚核苷酸對(duì)DNA免疫效

果的影響

CpG寡居核苷酸是從一種桿菌中提取的DNA片段，具有抗腫瘤、增強(qiáng)機(jī)體非特異性免疫應(yīng)答等生物活性，人工合成的CpG寡居核苷酸具有與桿菌DNA類(lèi)似的免疫刺激效應(yīng)，能夠促進(jìn)B細(xì)胞前體的發(fā)育與成熟，從而增強(qiáng)DNA免疫在體內(nèi)產(chǎn)生抗體的效率［35］。Gomis 等［36］對(duì) CpG 寡聚核苷酸免疫保護(hù)作用進(jìn)行了探討，他們用人工合成CpG寡聚核苷酸免疫被大腸桿菌感染的雞，病理學(xué)和微生物學(xué)檢測(cè)結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，接受含CpG寡聚核苷酸的雞，不管是皮下免疫還是肌肉免疫都顯著提高了存活率。因此，CpG寡聚核苷酸對(duì)細(xì)胞外細(xì)菌感染的動(dòng)物起到有效的免疫保護(hù)作用。Qiu 等［37］報(bào)道在乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus，HBV）DNA 疫苗試驗(yàn)中，包含CpG寡聚核苷酸序列的陽(yáng)離子脂質(zhì)體作為DNA 免疫的佐劑顯著提高了DNA 疫苗的免疫原性且誘導(dǎo)免疫類(lèi)型的轉(zhuǎn)變，從而有效地將乙型肝炎病毒DNA 疫苗導(dǎo)入皮膚，在機(jī)體內(nèi)誘導(dǎo)有效的預(yù)防性免疫應(yīng)答。

2.2 使用傳統(tǒng)佐劑對(duì)DNA 免疫效果的影響

粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激生長(zhǎng)因子（Granulocyte macrophage colony stimulating growth factor，GM-CSF）作為DNA免疫的分子佐劑，有助于提高DNA免疫在體內(nèi)誘發(fā)產(chǎn)生抗體的效率。例如，Hazen 等［33］報(bào)道聯(lián)合使用兩種分子佐劑，即編碼胎兒酪氨酸激酶3配體（Fetal tyrosine kinase 3 ligand，F(xiàn)LT3L）和粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激生長(zhǎng)因子（GM-CSF）的質(zhì)粒DNA，顯著提高了機(jī)體免疫反應(yīng)，從而成功地誘導(dǎo)出識(shí)別靶向抗原12個(gè)跨膜蛋白（MRP4）的細(xì)胞外抗原表位的高特異性單克隆抗體。

分子伴侶是DNA 免疫的一類(lèi)很重要的分子佐劑，在誘導(dǎo)產(chǎn)生針對(duì)G蛋白偶聯(lián)受體（G proteincoupled receptor，GPCR）等具有復(fù)雜結(jié)構(gòu)的特異性單克隆抗體中起到了較高的佐劑效應(yīng)。Fujimoto等［38］報(bào)道了將大腸桿菌熱休克蛋白作為DNA 免疫的分子佐劑，構(gòu)建了編碼內(nèi)皮素受體A（Endothelin A receptor，ETAR）的重組質(zhì)粒ETAR-GroEL，免疫動(dòng)物后產(chǎn)生了針對(duì)天然靶向抗原的特異性抗原，而不含分子佐劑的編碼靶向抗原的質(zhì)粒免疫之后未產(chǎn)生特異性抗原。Takatsuka等［39］也將分子伴侶作為DNA 免疫的分子佐劑誘導(dǎo)產(chǎn)生了有效識(shí)別趨化因子（ChemoCentryx chemokine receptor，CCX-CKR）細(xì)胞表面的單克隆抗體。

細(xì)胞因子是機(jī)體細(xì)胞產(chǎn)生的一類(lèi)具有廣泛生物學(xué)活性的異質(zhì)性肽類(lèi)調(diào)節(jié)因子，使免疫活性細(xì)胞在體內(nèi)被激活，從而參與機(jī)體特異性免疫應(yīng)答的產(chǎn)生和調(diào)節(jié)過(guò)程。近年來(lái)有大量文獻(xiàn)報(bào)道細(xì)胞因子能作為DNA 免疫的佐劑，通過(guò)誘導(dǎo)機(jī)體特異性免疫應(yīng)答而增強(qiáng)DNA 免疫的效果，然而各種各樣的細(xì)胞因子以不同的免疫調(diào)節(jié)方式在DNA免疫中發(fā)揮各自不同的免疫調(diào)節(jié)活性［40］。例如，Chow等［41］發(fā)現(xiàn)在乙型肝炎病毒DNA 疫苗中，白介素-2（IL- 2）和丙型干擾素（INF-γ）顯著增強(qiáng)了輔助性T細(xì)胞1（Th1）的活性以及提高了抗-HBV的IgG2a抗體的產(chǎn)生，而且顯著增強(qiáng)了由HBV疫苗誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性T細(xì)胞（Cytotoxic T lymphocytes，CTL）反應(yīng)，同時(shí)顯著抑制了輔助性T細(xì)胞2（Th2）的活性以及減弱了IgG1抗體的產(chǎn)生。然而，白介素-4（IL- 4）表現(xiàn)出與之相反的調(diào)節(jié)活性。Cui 等［42］研究發(fā)現(xiàn)將編碼IL- 12、IL- 15、IL- 18 或 IL- 21的質(zhì)粒DNA 與編碼生殖器單純皰疹病毒（Herpes simplex virus，HSV）糖蛋白B的質(zhì)粒DNA 共免疫生殖器單純皰疹病毒感染小鼠時(shí)都顯著提高了小鼠的存活率，結(jié)果表明了這些細(xì)胞因子通過(guò)同時(shí)誘導(dǎo)機(jī)體的體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答，能夠在DNA免疫中起到有效的調(diào)節(jié)作用。

2.3 使用免疫調(diào)節(jié)佐劑對(duì)DNA免疫效果的影響

異源性DNA初免-蛋白質(zhì)加強(qiáng)免疫（Heterologous DNA prime-protein boost）的免疫策略顯著提高了DNA免疫的效率，主要程序是：首先用攜帶目的基因序列的重組DNA質(zhì)粒免疫動(dòng)物，隨后再隔一段時(shí)間注射一定量的抗原蛋白作為加強(qiáng)免疫［43-44］。Wang 等［45］報(bào)道利用異源型DNA 初免-蛋白質(zhì)加強(qiáng)的免疫策略誘發(fā)人免疫應(yīng)答反應(yīng)，從而獲得抗人類(lèi)免疫缺陷病毒（Human immunodeficiency virus，HIV）包膜抗原的高特異性抗體。已有不少研究證實(shí)異源性DNA初免-蛋白質(zhì)加強(qiáng)免疫策略比多次注射同一類(lèi)型的免疫原更有效，能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生穩(wěn)定的保護(hù)性單克隆抗體［46-50］。Vaine 等［51］采用了 DNA 單獨(dú)免疫、蛋白質(zhì)單獨(dú)免疫和異源型DNA 初免-蛋白質(zhì)加強(qiáng)等不同免疫策略，驗(yàn)證了其中DNA 初免-蛋白質(zhì)加強(qiáng)的免疫策略誘導(dǎo)產(chǎn)生的單抗可以有效阻止HIV-1 包膜糖蛋白與 CD4 受體的結(jié)合（表2）。

表2 免疫加強(qiáng)的選擇

3 DNA免疫的遞送方式

DNA 免疫的遞送方式是體內(nèi)誘導(dǎo)產(chǎn)生高效、穩(wěn)定的單克隆抗體的關(guān)鍵一步，目前已有多種遞送方式，其中最具代表性的有傳統(tǒng)針管方式注射DNA 質(zhì)粒所屬的化學(xué)傳遞方式以及基因槍方法、電穿孔的方法、水動(dòng)力尾靜脈注射法等方法所屬的物理傳遞方式（表3）。

表3 DNA免疫的傳遞方式

3.1 傳統(tǒng)的針管注射法

傳統(tǒng)的針管注射法，一般根據(jù)抗原特異性和實(shí)際需要選擇不同的注射部位，包括肌肉注射、皮下注射、靜脈注射等。研究表明用傳統(tǒng)的針管注射法免疫動(dòng)物，雖然操作簡(jiǎn)便且經(jīng)濟(jì)，但注射少量的質(zhì)粒DNA在動(dòng)物體內(nèi)很難得到高效價(jià)的抗體，所以此方法經(jīng)常以附加佐劑或者DNA初免-蛋白質(zhì)加強(qiáng)免疫等方法來(lái)提高DNA 免疫的效率。DNA 免疫傳遞方式在動(dòng)物體內(nèi)誘導(dǎo)產(chǎn)生靶點(diǎn)特異性單克隆抗體都有成功的報(bào)道，而且該技術(shù)在不斷地改進(jìn)和完善［9］。

3.2 基因槍技術(shù)

基因槍技術(shù)是指用化學(xué)性質(zhì)較穩(wěn)定的金或鎢作為金顆粒，將帶有目的基因序列的質(zhì)粒DNA吸附在金顆粒上，然后通過(guò)沖擊力將質(zhì)粒DNA導(dǎo)入到靶向細(xì)胞內(nèi)開(kāi)始表達(dá)。與傳統(tǒng)的針管注射相比較，基因槍技術(shù)是一種DNA免疫的高效傳遞方式，有效提高了外源基因在宿主細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)效率，然而基因槍技術(shù)具有操作難度較大且成本高等局限性，降低了其實(shí)際應(yīng)用價(jià)值［31-32，52-54］。

3.3 電脈沖技術(shù)

電脈沖技術(shù)是首先用傳統(tǒng)的針管注射法在動(dòng)物肌肉或者皮下注射質(zhì)粒DNA，隨后在對(duì)應(yīng)的注射處用電脈沖刺激，使細(xì)胞膜通透性瞬時(shí)增大，從而促進(jìn)外源大分子導(dǎo)入到靶向細(xì)胞內(nèi)得以高效表達(dá)。電脈沖技術(shù)具有效果顯著、應(yīng)用方便經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點(diǎn)，是最理想的DNA免疫的傳遞方式［21-22］。

3.4 水動(dòng)力尾靜脈注射法

另外一種特殊傳遞方式是通過(guò)水動(dòng)力尾靜脈注射（Hydrodynamic tail vein injection，HTV）。已有文獻(xiàn)報(bào)道，利用這一傳遞DNA 免疫的方法成功誘導(dǎo)產(chǎn)生了針對(duì)細(xì)胞毒等跨膜蛋白的單克隆抗體［20，33］。由于需要特殊經(jīng)驗(yàn)和設(shè)置，這種方法還沒(méi)有得到廣泛的應(yīng)用。

對(duì)以上不同的DNA免疫的傳遞方式進(jìn)行了比較，即與傳統(tǒng)的裸DNA質(zhì)粒注射比較，電脈沖和基因槍技術(shù)通過(guò)物理刺激的輔助作用有效的提高了外源DNA分子在宿主細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)水平［55］。例如，Alexandrenne等［56］將朊病毒蛋白（Prion protein，PrP）作為靶向抗原，通過(guò)不同DNA 免疫策略，對(duì)外源基因在宿主細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)效率進(jìn)行了比較，結(jié)果表明經(jīng)過(guò)DNA 免疫之后電脈沖刺激的傳遞方式比傳統(tǒng)的裸DNA 質(zhì)粒直接注射更有效，由此方法產(chǎn)生的單克隆抗體能有效識(shí)別朊病毒蛋白天然的抗原表位。Wang 等［57］將編碼血細(xì)胞凝集素（Hemagglutinin，HA）的質(zhì)粒DNA 通過(guò)肌肉注射免疫動(dòng)物，同時(shí)用基因槍和電脈沖刺激的不同傳遞方式免疫動(dòng)物，結(jié)果表明，與單獨(dú)肌肉注射相比較，基因槍和電脈沖刺激更有效，誘導(dǎo)產(chǎn)生了高特異性的抗血細(xì)胞凝集素的單克隆抗體。

4 利用 DNA 免疫技術(shù)誘導(dǎo)生產(chǎn)高效單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)

利用DNA免疫誘導(dǎo)產(chǎn)生高特異性的單克隆抗體的優(yōu)勢(shì)主要表現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：首先，DNA免疫同時(shí)刺激體液免疫和細(xì)胞免疫，加快抗原特異性B淋巴細(xì)胞的成熟，從而可以誘導(dǎo)產(chǎn)生有效識(shí)別靶點(diǎn)抗原表位的高特異性抗體。其次，DNA免疫無(wú)需在體外合成和純化抗原，而是將目的基因直接導(dǎo)入到宿主細(xì)胞內(nèi)得以表達(dá)，因此可以避免蛋白質(zhì)天然構(gòu)象和免疫原性因外界因素的干擾而受到影響。換言之，在宿主細(xì)胞內(nèi)表達(dá)目的蛋白可以維持蛋白質(zhì)空間構(gòu)象更接近于其天然構(gòu)象，而且還保證了原始多肽在真核細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)錄和修飾，如此就能提高針對(duì)靶向抗原的抗體的專(zhuān)一性和穩(wěn)定性。再次，DNA免疫技術(shù)具有潛在的創(chuàng)新性和可選性，科研工作者在應(yīng)用過(guò)程中按照自己的實(shí)際需要可以設(shè)計(jì)多種不同的免疫策略，也可以選擇符合靶點(diǎn)抗原特異性的候選方案。最后，DNA免疫策略比傳統(tǒng)的免疫方法更安全、操作簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)且可靠，為制備高質(zhì)量單克隆抗體提供良好的技術(shù)平臺(tái)［6-9］。

5 結(jié)語(yǔ)

作為一種新型簡(jiǎn)便的免疫技術(shù)，DNA 免疫的概念從剛被發(fā)現(xiàn)就受到了極大的重視，尤其是針對(duì)傳染性疾病的DNA 疫苗的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用［2-5］。在針對(duì)艾滋病病毒和流感病毒疫苗的開(kāi)發(fā)和研究工作中，DNA免疫技術(shù)已成為了決定其成功與否的關(guān)鍵一步［58-60］。隨著種類(lèi)繁多的保護(hù)性或者治療性單克隆抗體的應(yīng)用和開(kāi)發(fā)，DNA免疫技術(shù)在高特異性單克隆抗體研發(fā)中的地位也在不斷上升，尤其是針對(duì)G蛋白偶聯(lián)受體（GPCR）、跨膜蛋白的特異性單克隆抗體的開(kāi)發(fā)中占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)［33，51］。

總之，DNA免疫技術(shù)在高特異性單克隆抗體的開(kāi)發(fā)中具有誘人的發(fā)展前景。首先，DNA免疫不需要在實(shí)驗(yàn)室合成和純化抗原，而是在宿主細(xì)胞內(nèi)表達(dá)插入基因序列，這樣可以最大程度地維持蛋白質(zhì)天然構(gòu)象和免疫原性，這對(duì)于后續(xù)產(chǎn)生有效識(shí)別原始抗原表位的高親和性抗體至關(guān)重要。最后，雖然單一DNA免疫在機(jī)體內(nèi)很難生成高滴度的抗體，但隨著DNA免疫技術(shù)的不斷完善，已有了不少提高DNA免疫效率的免疫策略，顯著提升了DNA免疫的免疫原性和實(shí)用性。由此可見(jiàn)，DNA免疫將在高質(zhì)量的治療性或診斷性單克隆抗體的研發(fā)中具有更廣闊的應(yīng)用前景［61-63］。