• 
    

    
    

      99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

      α-平滑肌肌動(dòng)蛋白表達(dá)在進(jìn)展期結(jié)直腸癌化療療效預(yù)測及預(yù)后中的意義

      2019-03-06 09:09:36谷俊杰白春梅
      關(guān)鍵詞:氟尿嘧啶奧沙利纖維細(xì)胞

      谷俊杰,孫 昭,趙 林,白春梅

      中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)院腫瘤內(nèi)科,北京 100730

      結(jié)直腸癌是最常見的消化道惡性腫瘤。在中國,結(jié)直腸癌在男性和女性最常見癌癥中分別居第4位和第3位,男性和女性結(jié)直腸癌的發(fā)病率分別為10.13%和9.25%[1]。早期結(jié)直腸癌可通過手術(shù)切除治愈,但約60%以上結(jié)直腸癌患者在診斷時(shí)即為Ⅲ/Ⅳ期,其中80%~90%患者為不可切除的轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌?;熓侵委熗砥诮Y(jié)直腸癌的基本治療手段,一線化療方案為奧沙利鉑聯(lián)合氟尿嘧啶方案(FOLFOX、XELOX、SOX),有效率40%~50%,轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌患者中接受化療的中位生存期為20個(gè)月左右,不治療的患者中位生存期僅為5~6個(gè)月。

      腫瘤是一種難以愈合的慢性損傷,其生物學(xué)行為并不完全由腫瘤細(xì)胞本身決定。腫瘤微環(huán)境(tumor microenvironment,TME)包括腫瘤細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、大量炎癥細(xì)胞、免疫細(xì)胞和炎癥因子[2- 3],可在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用。癌癥相關(guān)成纖維細(xì)胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)是TME中的重要組成部分,可影響腫瘤的生物學(xué)行為和預(yù)后。CAFs是腫瘤基質(zhì)中活化的成纖維細(xì)胞,主要表達(dá)α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、成纖維細(xì)胞激活蛋白(fibroblast activation protein,F(xiàn)AP)和波形蛋白等[4]。CAFs可通過自分泌或旁分泌的方式分泌多種炎癥因子,如白細(xì)胞介素- 6(interleukin- 6,IL- 6)、環(huán)氧化酶- 2(cyclooxygenase- 2,COX- 2)、C-X-C結(jié)構(gòu)域趨化因子配體12(C-X-C motif chemokine ligand 12,CXCL12)和缺氧誘導(dǎo)因子- 1α(hypoxia-inducible factor- 1α,HIF- 1α)[2,5- 6],與腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物耐藥相關(guān)。研究顯示,CAFs可分泌IL- 6,活化JAK2/STAT3信號(hào)通路,促進(jìn)轉(zhuǎn)化生長因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)介導(dǎo)的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化,抑制卵巢癌細(xì)胞凋亡,導(dǎo)致卵巢癌細(xì)胞對(duì)紫杉醇耐藥[3]。CAFs也可上調(diào)金屬蛋白酶1(matrix metalloproteinase- 1,MMP- 1)的表達(dá),降低頭頸部鱗狀細(xì)胞癌對(duì)頭孢菌素的敏感性[7]。而結(jié)直腸癌中CAFs與傳統(tǒng)化療藥物的關(guān)系尚未明確。Samuel等[8]研究發(fā)現(xiàn),在接受化療(奧沙利鉑聯(lián)合氟尿嘧啶)的結(jié)直腸癌細(xì)胞系中分別加入正常結(jié)腸成纖維細(xì)胞分泌的條件培養(yǎng)液(normal colonic fibroblasts conditioned medium,CM-NCF)或腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞分泌的條件培養(yǎng)液(carcinoma-associated fibroblasts conditioned medium,CM-CAF),后者藥物劑量效應(yīng)曲線遠(yuǎn)遠(yuǎn)好于前者,提示了CAFs對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞有保護(hù)作用。而將化療(奧沙利鉑聯(lián)合氟尿嘧啶)中的結(jié)直腸癌細(xì)胞系與CAF共培養(yǎng)時(shí),發(fā)現(xiàn)CAFs可以通過PI3KCA/AKT/mTOR/Survivin及JAK2/STAT3途徑誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞阻滯在G0或G1期,從而利于腫瘤細(xì)胞修復(fù)受損DNA以及幫助腫瘤細(xì)胞準(zhǔn)確進(jìn)行有絲分裂,減少化療藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷,導(dǎo)致耐藥。但是目前研究主要停留在分子生物及細(xì)胞生物水平,在結(jié)直腸癌患者中尚未報(bào)道過CAFs和原發(fā)耐藥的相關(guān)性。本研究擬在結(jié)直腸癌患者的臨床標(biāo)本中驗(yàn)證CAFs與結(jié)直腸癌患者對(duì)奧沙利鉑聯(lián)合氟尿嘧啶化療療效及預(yù)后的相關(guān)性。

      材料和方法

      標(biāo)本來源及分組2013年6月至2017年2月在北京協(xié)和醫(yī)院就診的結(jié)直腸癌患者。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)組織病理證實(shí)為進(jìn)展期結(jié)直腸癌;(2)有完整的影像學(xué)檢查可供腫瘤分期評(píng)價(jià);(3)有足夠的組織標(biāo)本可供免疫組織化學(xué)檢測;(4)接受奧沙利鉑聯(lián)合氟尿嘧啶化療(FOLFOX、XELOX、SOX);(5)通過實(shí)體瘤療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)(Response Evaluation Criteria in Solid Tumors,RECIST)進(jìn)行療效評(píng)價(jià)。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)缺乏足夠的組織標(biāo)本供免疫組織化學(xué)檢測;(2)化療療效評(píng)價(jià)為病情穩(wěn)定(stable disease,SD)。將患者分為以下兩組:(1)化療耐藥組:Ⅳ期結(jié)直腸癌患者接受一線化療后首次病情評(píng)估為病情進(jìn)展(progressive disease,PD)或Ⅲ期結(jié)直腸癌患者術(shù)后輔助化療結(jié)束后6個(gè)月內(nèi)復(fù)發(fā);(2)化療敏感組:局部晚期結(jié)直腸癌患者在接受一線化療后出現(xiàn)病情緩解(partial response,PR)或完全緩解(complete response,CR)。

      臨床資料采集采集并記錄患者的臨床資料,包括年齡、性別、病理類型、分化程度、腫瘤分期、病變部位、化療期間的影像學(xué)資料。

      免疫組織化學(xué)檢測手術(shù)切除的組織標(biāo)本或穿刺活檢組織標(biāo)本經(jīng)甲醛固定、常規(guī)石蠟包埋,制成4 μm厚切片。采用免疫組織化學(xué)方法檢測α-SMA蛋白的表達(dá)情況。其中,一抗為鼠抗人α-SMA抗體(塞維爾生物GB13044,中國),濃度為1∶1000;二抗為山羊抗鼠通用抗體(DAKO K5007),采用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照,按照試劑說明書操作。

      結(jié)果判讀所有石蠟切片免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果由2名病理科醫(yī)師(不清楚患者臨床資料)獨(dú)立閱片,如果結(jié)論不一致,則由第3位病理科醫(yī)師獨(dú)立評(píng)估并做最終決定。α-SMA蛋白表達(dá)于CAFs的細(xì)胞漿,細(xì)胞漿染為棕黃色為陽性細(xì)胞。通過染色強(qiáng)度及陽性細(xì)胞百分比共同判斷陰陽性。染色強(qiáng)度計(jì)分方法:無 0分,淡棕色 1分,深棕色 2分;隨機(jī)選擇5個(gè)高倍視野,計(jì)算陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)的平均值:陽性細(xì)胞<10% 0分,陽性細(xì)胞10%~40% 1分,陽性細(xì)胞 40%~70% 2分,陽性細(xì)胞 >70% 3分。α-SMA低表達(dá)指總計(jì)分 0~2分,高表達(dá)指總計(jì)分 3~5分(圖1)。

      統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 24.0統(tǒng)計(jì)軟件,α-SMA蛋白表達(dá)與臨床特征及化療療效間的關(guān)系采用χ2檢驗(yàn),α-SMA蛋白表達(dá)與無進(jìn)展生存時(shí)間的關(guān)系采用Kaplan-Meier法并繪制生存曲線;采用雙側(cè)概率檢驗(yàn),取α=0.05為顯著性檢驗(yàn)水準(zhǔn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

      結(jié) 果

      患者臨床特征共52例進(jìn)展期結(jié)直腸癌患者入組,其中,男30例,女22例,中位年齡52歲;高分化者5例(9.6%),中分化者37例(71.2%),低分化者7例(13.5%),未分化者3例(5.8%);左半結(jié)腸癌40例(76.9%),右半結(jié)腸癌11例(21.2%),左右半結(jié)腸癌1例(1.9%);化療敏感組30例,化療耐藥組22例。

      α-SMA蛋白表達(dá)水平與臨床病理特征的關(guān)系52例患者中,29例(55.8%)為α-SMA高表達(dá),α-SMA蛋白的表達(dá)與患者的年齡(χ2=0.113,P=0.730)、性別(χ2=0.515,P=0.332)、腫瘤部位(χ2=3.675,P=0.159)、組織分化程度(χ2=1.852,P=0.604)均無顯著相關(guān)性(表1)。

      α-SMA蛋白表達(dá)與化療療效的關(guān)系52例患者中,29例α-SMA高表達(dá),化療耐藥19例(65.5%,19/29);23例α-SMA低表達(dá),化療耐藥3例(13.0%,3/23);α-SMA高表達(dá)者化療耐藥率顯著高于低表達(dá)者(χ2=14.470,P=0.000)(表1)。

      α-SMA:α-平滑肌肌動(dòng)蛋白

      α-SMA:α-smooth muscle actin

      A.α-SMA低表達(dá);B. α-SMA高表達(dá)

      A. low α-SMA expression;B. high α-SMA expression

      圖1癌癥相關(guān)成纖維細(xì)胞中α-SMA免疫組織化學(xué)染色結(jié)果(×40)

      Fig1Immunohistochemical staining for α-SMA expression in carcinoma-associated fibroblasts(×40)

      表1 52例進(jìn)展期結(jié)腸癌患者α-SMA表達(dá)與其臨床病理特征及化療療效間的關(guān)系Table 1 Relationship between α-SMA expression and clinicopathological characteristics and chemotherapy response in 52 patients with advanced colorectal cancer

      α-SMA:α-平滑肌肌動(dòng)蛋白

      α-SMA:α-smooth muscle actin

      圖2無進(jìn)展生存的Kaplan-Meier生存分析曲線

      Fig2Kaplan-Meier curves for progression-free survival

      討 論

      奧沙利鉑聯(lián)合氟尿嘧啶方案是晚期結(jié)直腸癌的一線化療方案。奧沙利鉑和氟尿嘧啶均是通過抑制DNA合成產(chǎn)生細(xì)胞毒作用和抗腫瘤活性。奧沙利鉑通過產(chǎn)生水化衍生物作用于DNA,形成鏈內(nèi)和鏈間交聯(lián),從而抑制DNA的合成,而氟尿嘧啶類藥物是胸苷酸合成酶抑制劑,通過阻止脫氧尿苷酸(dUMP)甲基化轉(zhuǎn)變?yōu)槊撗跣剀账?dTMP),從而影響DNA的合成。奧沙利鉑聯(lián)合氟尿嘧啶的原發(fā)性耐藥機(jī)制有多種原因,包括基因突變、表達(dá)耐藥相關(guān)蛋白和形成免疫抑制性TME等。

      根據(jù)“種子和土壤”假說,腫瘤基質(zhì)(土壤)對(duì)腫瘤細(xì)胞(種子)的發(fā)生和發(fā)展至關(guān)重要[9]。CAFs是腫瘤基質(zhì)中活化的成纖維細(xì)胞,主要來源于正常的成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、脂肪干細(xì)胞、上皮細(xì)胞及骨髓干細(xì)胞。CAFs形態(tài)呈紡錘形,胞體較大,富含彈力纖維,與肌成纖維細(xì)胞相似,其表達(dá)的生物標(biāo)記物主要有α-SMA、FAP、波形蛋白、人S100鈣結(jié)合蛋白A4(human S100 calcium binding protein A4,S100A4)和平足蛋白(podoplanin,PDPN)[10]。大量文獻(xiàn)顯示CAFs可促進(jìn)腫瘤組織內(nèi)皮細(xì)胞增生,血管新生,促進(jìn)腫瘤生長、侵襲,但少有文獻(xiàn)報(bào)道CAFs與結(jié)腸癌化療耐藥及預(yù)后間的關(guān)系。Mesker等[11]認(rèn)為豐富的腫瘤基質(zhì)與腫瘤不良預(yù)后密切相關(guān)。Tsujino等[12]也發(fā)現(xiàn)α-SMA高表達(dá)的結(jié)直腸癌患者無病生存期較α-SMA低表達(dá)的患者短。Mercedes等[13]探討了CAFs的標(biāo)記物α-SMA、成纖維細(xì)胞特異蛋白(fibroblast specific protein,F(xiàn)SP1)、FAP及M2型巨噬細(xì)胞的標(biāo)記物CD163與結(jié)直腸癌患者預(yù)后間的關(guān)系,結(jié)果發(fā)現(xiàn)α-SMA、FSP1、FAP及CD163高表達(dá)的患者,其總生存期和無病生存期較短,提示CAFs和M2型巨噬細(xì)胞與結(jié)腸癌不良預(yù)后相關(guān)。Choi等[14]探討了α-SMA、S100A4和PDPN與結(jié)直腸癌預(yù)后的關(guān)系,發(fā)現(xiàn)PDPN(-)/α-SMA(高)或PDPN(-)/S100A4(高)的患者預(yù)后不佳。本研究以α-SMA表達(dá)標(biāo)記CAFs,探索了α-SMA表達(dá)與進(jìn)展期結(jié)直腸癌化療療效及預(yù)后間的關(guān)系,結(jié)果發(fā)現(xiàn)α-SMA高表達(dá)的患者更易出現(xiàn)奧沙利鉑聯(lián)合氟尿嘧啶類藥物的原發(fā)耐藥,且無進(jìn)展生存期更短,提示CAFs可能成為潛在的結(jié)直腸癌治療靶點(diǎn)。

      綜上,本研究結(jié)果顯示,α-SMA表達(dá)在進(jìn)展期結(jié)直腸癌中具有重要意義,與其對(duì)化療原發(fā)耐藥相關(guān),可作為預(yù)測進(jìn)展期結(jié)直腸癌化療療效的分子標(biāo)志物。近年來,靶向治療廣泛應(yīng)用于臨床,成為腫瘤治療研究的新熱點(diǎn),CAFs可能成為潛在的腫瘤治療的靶點(diǎn)。

      猜你喜歡
      氟尿嘧啶奧沙利纖維細(xì)胞
      吳茱萸堿逆轉(zhuǎn)人胃癌BGC-823/L-OHP細(xì)胞對(duì)奧沙利鉑耐藥
      氟尿嘧啶聯(lián)合白介素II局封治療多發(fā)性跖疣療效觀察
      Tiger17促進(jìn)口腔黏膜成纖維細(xì)胞的增殖和遷移
      滇南小耳豬膽道成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)鑒定
      用氟尿嘧啶注射液聯(lián)合薔薇紅核植物抑菌液治療跖疣的療效觀察
      耐奧沙利鉑人胃癌SGC-7901細(xì)胞具有高侵襲轉(zhuǎn)移性及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化特征
      雷替曲塞聯(lián)合奧沙利鉑治療晚期結(jié)直腸癌患者的療效觀察
      胃癌組織中成纖維細(xì)胞生長因子19和成纖維細(xì)胞生長因子受體4的表達(dá)及臨床意義
      血紅素加氧酶-1的表達(dá)對(duì)氟尿嘧啶誘導(dǎo)食管癌細(xì)胞凋亡的影響
      兩種制備大鼠胚胎成纖維細(xì)胞的方法比較
      南安市| 红桥区| 册亨县| 台南县| 广河县| 淄博市| 惠水县| 依兰县| 嘉善县| 三门县| 寻乌县| 桂东县| 连云港市| 望江县| 柘荣县| 铜陵市| 扎鲁特旗| 香港| 柳州市| 巴东县| 太湖县| 弥渡县| 保康县| 琼结县| 穆棱市| 临朐县| 万载县| 高陵县| 延寿县| 博客| 新源县| 兴和县| 思茅市| 灵台县| 资兴市| 和政县| 大方县| 二手房| 邵阳县| 临泽县| 邯郸县|