滇丹參中丹酚酸B提取及純化工藝研究

姜玉玉

摘 要：目的：以滇丹參為研究對(duì)象，探索提取與純化其丹酚酸B成分的最佳工藝。方法：將丹酚酸B成分在滇丹參的具體含量當(dāng)做評(píng)價(jià)指標(biāo)，通過(guò)展開(kāi)正交試驗(yàn)來(lái)確定純化與提取工作的最優(yōu)條件。結(jié)果：通過(guò)正交試驗(yàn)，可以明確，如果需要保障丹酚酸B物質(zhì)的含量，應(yīng)當(dāng)將8倍量的水設(shè)置為提取條件，煎煮兩次，每次花費(fèi)1h，選用的絮凝沉降劑為ZTC11+1，藥液的基本濃度應(yīng)當(dāng)為1g/5mL，絮凝劑的實(shí)際用量為B：A=4：2，攪拌速度應(yīng)當(dāng)控制在100r/min。結(jié)論：在對(duì)丹酚酸B這一重要成分進(jìn)行提取以及后續(xù)純化處理工作時(shí)，應(yīng)當(dāng)先完成精制水提掖的工作，使用絮凝澄清的方法，可以減少雜質(zhì)的含量。

關(guān)鍵詞：滇丹參；丹酚酸B；提取工藝；純化工藝

技術(shù)人員對(duì)鼠尾草的根莖以及根展開(kāi)干燥處理工作之后，可以獲取滇丹參，其味道微苦，性屬微寒，該中藥藥材具有散瘀、活血以及調(diào)經(jīng)等常用功效，同時(shí)還能發(fā)揮出止痛鎮(zhèn)靜的作用，在治療患者出現(xiàn)的子宮出血、風(fēng)濕痹痛以及月經(jīng)不調(diào)等癥狀時(shí)可使用滇丹參藥材，該藥材中的丹酚酸B揮主要作用，其丹酚酸B成分具有相對(duì)較強(qiáng)的活性，直接關(guān)系滇丹參的藥效，檢測(cè)該藥材的質(zhì)量與藥用價(jià)值時(shí)，也應(yīng)當(dāng)重點(diǎn)關(guān)注丹酚酸B，確定純化與提取工藝技術(shù)的使用情況。

1 材料與方法

1.1 一般材料

儀器：Waters e2695型高效液相色譜儀；FB124型電子分析天平；SK250HP型超聲提取器。

試藥：丹酚酸B對(duì)照品；滇丹參；ZTC1+1天然澄清劑；乙腈、甲醇為色譜純；水為去離子水；其它試劑均為分析純。

1.2 方法

制備對(duì)照品溶液時(shí)，需要采用精密稱取的方法來(lái)參考技術(shù)應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)，稱取適量的對(duì)照品，添加75%的甲醇，制備出所需的溶液，做好色譜條件的控制工作，設(shè)置流動(dòng)相、流速與檢測(cè)波長(zhǎng)與柱溫等參數(shù)，在提純過(guò)程中應(yīng)當(dāng)始終做好參數(shù)控制工作，而后需要繼續(xù)考察相應(yīng)的線性關(guān)系，完成測(cè)定樣品含量的工作。

精密稱取丹酚酸B對(duì)照品適量，加75%甲醇制成每1 mL含0.192 mg的溶液，即得。色譜條件：Agilent-C18色譜柱（Φ4.6 mm×250 mm，5 μm）；甲醇-乙腈-甲酸-水體積比（26∶9∶1∶64）為流動(dòng)相；柱溫：35 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：286 nm；流速：0.8 mL/min；理論塔板數(shù)按丹酚酸B計(jì)不低于2000。

分別精密吸取丹酚酸B對(duì)照品溶液4、6、8、10、12、14μL，在上述色譜條件下依次進(jìn)樣測(cè)定。以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，對(duì)照品的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程為Y=895054x-68669，相關(guān)系數(shù)r=0.9999。結(jié)果表明丹酚酸B進(jìn)樣量在0.768～2.688 μg范圍內(nèi)與峰面積呈現(xiàn)良好線性關(guān)系。

設(shè)計(jì)方案：以加水量、提取時(shí)間、提取次數(shù)為考察因素，以丹酚酸B含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，每個(gè)因素選取3個(gè)水平，采用正交表L9（34）安排試驗(yàn)，

稱取藥材9份，每份20 g，按照正交實(shí)驗(yàn)表進(jìn)行試驗(yàn)，濾液濃縮并定容到500 mL，用微孔濾膜（0.45 μm）過(guò)濾，精密吸取溶液10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定。

ZTC1+1澄清劑溶液的配制：A組分溶液的配制 稱取ZTC1+1Ⅲ澄清劑A組分1 g，先用少量蒸餾水?dāng)嚦珊隣睿缓蠹诱麴s水至100mL，溶脹24 h，攪勻，雙層紗布濾過(guò)，即得1 %A 組分黏膠液； B組分溶液的配制 稱取ZTC1+1Ⅲ澄清劑B組分1 g，用少量1 %醋酸溶液溶解并攪成糊狀，然后加1 %醋酸至100 mL，溶脹24 h，攪勻，雙層紗布濾過(guò)，即得1 %B 組分黏膠液。經(jīng)過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)丹酚酸B在60 ℃時(shí)絮凝效果較好，故以60 ℃為絮凝溫度，采用正交試驗(yàn)對(duì)絮凝澄清工藝的主要工藝參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化。

2 結(jié)果

提取溶劑的選擇：分別稱取40 g（準(zhǔn)確到0.01 g）藥材4份，分別以水、30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇為溶劑，加入8倍量溶劑提取1.5 h，過(guò)濾，濾渣再用6倍量溶劑提取1 h，合并濾液，濃縮并定容到500 mL，用微孔濾膜（0.45 μm）過(guò)濾，精密吸取10 μL溶液，注入液相色譜儀，測(cè)定丹酚酸B的含量，結(jié)果分別為2.18%、2.45%、2.37%、2.09%。表明30%乙醇提取含量最高，但以水為溶劑時(shí)，與30%乙醇提取率相差不大，因考慮實(shí)際生產(chǎn)的需要，故以水為提取溶劑。

根據(jù)直觀分析結(jié)果表明，紫丹參的最佳水提工藝為8倍量水，提取3次，每次1 h，即A2B1C3 。由于提取3次和2次的結(jié)果相差不大，為了節(jié)約成本，將工藝定為8倍量水，提取2次，每次1 h，即A2B1C2。

直觀分析可知，影響絮凝澄清的因素順序?yàn)椋核幰簼饪s比>絮凝劑組分比>攪拌速度，最佳工藝組合為A1B1C2。方差分析顯示，藥液濃度對(duì)精制工藝具有顯著性影響。

驗(yàn)證試驗(yàn)：平行取相同量的藥液3份，每份50 mL。按上述確定的最佳工藝條件進(jìn)行驗(yàn)證。同時(shí)測(cè)得丹酚酸B含量分別為35.62、35.85、35.77 mg/g，驗(yàn)證結(jié)果與正交試驗(yàn)相符。

3 討論

相關(guān)人員對(duì)滇丹參展開(kāi)藥理方面的研究工作時(shí)，對(duì)其具有的主要藥理作用進(jìn)行了充分地認(rèn)識(shí)，發(fā)現(xiàn)其可以對(duì)人體的冠狀動(dòng)脈系統(tǒng)產(chǎn)生影響，使其血流量明顯增加，避免使患者形成血栓的問(wèn)題，同時(shí)還能對(duì)血小板的聚集起到抑制作用，將原有的血粘度減低，將自由基消除，使血管內(nèi)皮的功能被改善，血管在損傷之后，也不會(huì)出現(xiàn)過(guò)于活躍的血液增生活動(dòng)，該藥材可以幫助使用者預(yù)防冠心病，患者接受血管成形術(shù)之后，可使用該藥材來(lái)防治血管再狹窄的問(wèn)題。

滇丹參具有的多重藥理功效都非常重要，其背部含有的丹參酮成分具有突出的脂溶性，同時(shí)其內(nèi)部還含有酚酸類(lèi)成分，這些成分具有不同程度的水溶性特點(diǎn)，本文研究的丹酚酸B的含量相對(duì)比較高，主要有1分子咖啡酸與3分子丹酚素兩種重要成分縮合而成，具有良好的活性，可以發(fā)揮出抗氧化以及清除自由基的作用，評(píng)測(cè)滇丹參的質(zhì)量時(shí)，也可以將丹酚酸B這一成分的具體含量當(dāng)做評(píng)測(cè)指標(biāo)，選用常規(guī)的提取工藝技術(shù)，以高效的絮凝澄清型純化方法來(lái)處理該藥材，盡可能多地提取丹酚酸B成分。

提取丹酚酸B這一成分時(shí)，應(yīng)當(dāng)注意到其在水提掖中存在的不穩(wěn)定的問(wèn)題，如果提取工作消耗的時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，或者實(shí)際溫度過(guò)高，丹酚酸B這一重要成分的含量會(huì)因受到影響而降低，因此在提取與純化的活動(dòng)中，都應(yīng)當(dāng)關(guān)注丹酚酸B存有的降解問(wèn)題。

完成純化工藝研究之后確定，控制藥液濃縮比時(shí)，應(yīng)當(dāng)將其設(shè)定在1：5（g/mL），丹酚酸B成分的保留率可以保持在最高水平，如果藥液相對(duì)比較稀，丹酚酸B有效成分的含量也會(huì)隨之降低。當(dāng)A組分增加之后，絮凝劑組分比也會(huì)隨之增加，丹酚酸B物質(zhì)的含量因此而降低，如果組分比可以控制為4/2，提取的效果可達(dá)到最佳。

本次選用的絮凝澄清劑在被使用時(shí)可將其良好的選擇性呈現(xiàn)出來(lái)，藥物中的蛋白質(zhì)、較直等可與該澄清劑選擇性地共沉，同時(shí)與其他類(lèi)型的絮凝劑相比，其不僅使用相對(duì)簡(jiǎn)便，同時(shí)還具有安全無(wú)毒的功效，不會(huì)給藥材中的其他有效成分造成影響，在水提純工藝技術(shù)中，其使用效果優(yōu)于普通的乙醇，可以幫助縮短藥材加工的周期，控制提純成分，經(jīng)由該種澄清劑制備出的干膏類(lèi)藥品具有良好的吸濕性。

因此可知在處理滇丹參藥材時(shí)，需要控制精制水提液的工作，陳家勇絮凝澄清的方法相對(duì)關(guān)鍵，采用絮凝澄清的的技術(shù)手段之后，絮凝劑的使用量被縮小，試驗(yàn)造成的污染也比較少，在純化與提取的環(huán)節(jié)中也不會(huì)出現(xiàn)過(guò)多地?fù)p失丹酚酸B成分的問(wèn)題，因此可在制藥過(guò)程中推廣該技術(shù)手段。

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