HPLC測(cè)定排毒養(yǎng)顏膠囊中番瀉苷A、番瀉苷B含量

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(1.成都中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，四川 成都 611130;2.成都市食品藥品檢驗(yàn)研究院，四川 成都 610045)

排毒養(yǎng)顏膠囊(原名：通便消痤膠囊)收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第二十冊(cè)[1]，處方由大黃、白術(shù)、西洋參、芒硝、枳實(shí)、青陽參、小紅參、肉蓯蓉、荷葉等9味藥材組成，現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)只有大黃的薄層鑒別。大黃為多基原中藥，作為方中君藥，其瀉下通便主要活性成分為番瀉苷A、番瀉苷B，而不同基原、不同產(chǎn)地、不同生長(zhǎng)年限、栽培、野生等因素對(duì)大黃中番瀉苷A、番瀉苷B的含量影響較大[2-5]。目前尚未有測(cè)定排毒養(yǎng)顏膠囊中番瀉苷A和番瀉苷B含量的報(bào)道，為進(jìn)一步完善排毒養(yǎng)顏膠囊的質(zhì)量評(píng)價(jià)體系，保證其臨床用藥的有效性，本試驗(yàn)采用高校液相色譜法，對(duì)制劑中番瀉苷A和番瀉苷B兩種成分進(jìn)行了含量測(cè)定研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與材料

Agilent 1260 高效液相色譜儀；ME-204E電子天平；XPE-26電子天平；SK250H超聲儀(上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司)。番瀉苷A對(duì)照品(批號(hào)：110824-201301，純度94.7%)、番瀉苷B對(duì)照品(批號(hào)：110825-201502，純度95.6%)均由中國食品藥品檢定研究院提供。排毒養(yǎng)顏膠囊由云南盤龍?jiān)坪Ｋ帢I(yè)有限公司提供，規(guī)格：0.4g/粒。流動(dòng)相中乙腈為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

采用Sepax-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱，以乙腈-5 mmol/L四庚基溴化銨的醋酸-醋酸鈉緩沖液(pH=5.0)(15∶85)為流動(dòng)相，流速1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)340 nm；柱溫35 ℃；進(jìn)樣量10 μL。

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液 精密稱取番瀉苷A、番瀉苷B對(duì)照品各適量，置于100 mL容量瓶中，用0.1 %碳酸氫鈉溶液溶解并稀釋至刻度，制成混合對(duì)照品溶液(番瀉苷A和番瀉苷B濃度分別為2.635 mg/mL、1.086 mg/mL)，色譜見圖1。

2.2.2 供試品溶液 精密稱取本品內(nèi)容物5 g，置于具塞錐形瓶中，精密加入0.1 %碳酸氫鈉溶液20 mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率：250 W，頻率：50 kHz)15 min，放冷，稱重，用0.1 %碳酸氫鈉溶液補(bǔ)足失重，搖勻，過0.45 μm微孔濾膜，即得。色譜見圖1。

圖1 高效液相色譜

2.3 線性關(guān)系考察

精密量取“2.2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液0.1、0.25、0.5、1.25、2.5、5 mL分別置于10 mL容量瓶中，加0.1%碳酸氫鈉溶液稀釋至刻度，搖勻。精密取上述6種不同濃度的對(duì)照品溶液各10μL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)(X)，峰面積為縱坐標(biāo)(Y)進(jìn)行線性回歸，得到番瀉苷A和番瀉苷B的回歸方程分別為：Y=123.34X-0.936 8(R2=1)、Y=119.7X-0.6324(R2=1)，分別在0.002 635～0.131 75μg、0.001 086～0.054 30 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.4 精密度試驗(yàn)

精密吸取“2.2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液10 μL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，番瀉苷A和番瀉苷B峰面積平均值分別為3 204.7、1 287.3，RSD分別為0.22%、0.07%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批樣品(170321)粉末，每份約5 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，按“2.2.2”項(xiàng)下方法平行制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，記錄峰面積并計(jì)算含量。結(jié)果，番瀉苷A和番瀉苷B含量的平均值分別為1.358 5 mg/g、0.553 7 mg/g，RSD分別為0.83%、0.85%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一批樣品(批號(hào)170321)適量，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，于第0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣，測(cè)得番瀉苷A和番瀉B峰面積的RSD分別為0.86%、0.84%，表明供試品溶液在室溫下放置24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 加樣回收試驗(yàn)

取已知含量的同一批樣品(170321)6份，每份精密稱取0.2 g，分別加入番瀉苷A和番瀉苷B對(duì)照品適量，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在“2.1”項(xiàng)色譜條件下測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

2.8 樣品含量測(cè)定

取不同批次樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，每批平行制備2份，在“2.1”項(xiàng)色譜條件下測(cè)定。結(jié)果見表2。

3 討論

試驗(yàn)中分別考察了乙腈-5mmol/L四庚基溴化銨的醋酸-醋酸鈉緩沖液(pH=5.0)(15∶85)[6]、乙腈-0.1%三氟乙酸(梯度洗脫)、乙腈-0.1%磷酸(梯度洗脫)[7,8]、甲醇-0.1%磷酸(梯度洗脫)[9，10]等多個(gè)流動(dòng)相體系。發(fā)現(xiàn)只有在使用乙腈-5mmol/L四庚基溴化銨的醋酸-醋酸鈉緩沖液(pH=5.0)(15∶85)作為流動(dòng)相時(shí)，雜質(zhì)干擾少，供試品分離度好，基線較平穩(wěn)。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果 (mg/粒)

本試驗(yàn)雖能適用于排毒養(yǎng)顏膠囊的質(zhì)量監(jiān)測(cè)，但流動(dòng)相中的四庚基溴化銨對(duì)實(shí)驗(yàn)人員、色譜儀器、環(huán)境的損害較大，尚需開發(fā)一種檢測(cè)條件溫和、環(huán)保、色譜分離度高、準(zhǔn)確性高的分析方法。