馬蹄香化學成分研究

王瀚民，馬 寧，楊尚軍*，白少巖*

（1. 濟南大學 山東省醫(yī)學科學院 醫(yī)學與生命科學學院，山東 濟南 250200；2.山東省醫(yī)學科學院 藥物研究所國家衛(wèi)生部生物技術(shù)藥物重點實驗室 山東省罕少見病重點實驗室，山東 濟南 250062）

馬蹄香（Saruma henryiOliv.）別名高腳細辛、冷水丹，為馬兜鈴科馬蹄香屬馬蹄香的多年生直立草本植物，是馬兜鈴科中國特有單種屬。其根狀莖粗壯，有多數(shù)細長須根，夏秋采挖，陰干酒炒研粉備用，鮮葉外用治瘡瘍。主產(chǎn)自陜西、甘肅、河南、江西、湖北、四川及貴州等省，秦巴山區(qū)資源豐富[1-2]，生長于海拔600～1600 m的路邊、溝邊、山野、荒地，尚未由人工引種栽培。中醫(yī)文獻記載：味辛、苦，有小毒，具溫中散寒、理氣鎮(zhèn)痛之功效。現(xiàn)代研究表明，其根及根莖藥用，有抗腫瘤、抗菌、抗病毒等活性[3-5]。馬蹄香的化學成分主要有馬兜鈴內(nèi)酰胺、馬兜鈴酸、生物堿、木脂素和黃酮類化合物。為了更加全面地了解馬蹄香生物活性的物質(zhì)基礎，本實驗對其化學成分繼續(xù)進行研究，從中分離得到9個化合物，分別鑒定為細辛脂素(1)、金粟蘭內(nèi)酯(2)、shizukanolide H(3)、吲哚-3-甲酸甲酯(4)、丁二酸(5)、異嗪皮啶(6)、銀線草醇F(7)、β-谷甾醇(8)、胡蘿卜苷(9)，其中化合物1，2，3，4，6，7均為首次從馬蹄香中分離得到。

1 儀器與材料

1.1 儀器

NEXUS 870型紅外光譜儀（美國Thermo Nicolet）；X6型顯微熔點測定儀（上海諾頂）；R-200型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（瑞士Buchi）；SHB-III循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長城）；Acance 6002型核磁共振儀（德國Bruker）；Trap VL型質(zhì)譜儀（美國Agilent）；1100型高效液相質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國Agilent）；U-3000型高效液相色譜儀（美國ThermoFisher）；真空干燥箱（上海精宏）；ODS（50 μm，YMC公司），HP-20大孔吸附樹脂（廊坊淼陽化工）；LH-20 型羥丙基葡聚糖凝膠（Sephadex LH-20，上海拜利）；柱層層析硅膠，薄層層析硅膠G，薄層層析硅膠GF254（青島海洋化工廠）。

1.2 試劑

馬蹄香采自陜西咸陽，經(jīng)北京大學藥學院尚明英教授鑒定為馬兜鈴科馬蹄香屬馬蹄香Saruma henryiOliv.的干燥全草。所用試劑為分析純和色譜純。

2 提取與分離

取干燥的馬蹄香全草16 kg，粉碎，分別用95 %乙醇、75 %乙醇提取，提取液合并，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，得到石油醚萃取部位350.10 g、乙酸乙酯萃取部位130.10 g。

石油醚萃取部位（Fr. 1）經(jīng)硅膠柱色譜，以石油醚-乙酸乙酯溶劑系統(tǒng)梯度洗脫，得到組分：Fr. 1-1～Fr. 1-7，再經(jīng)過硅膠柱色譜、重結(jié)晶分離純化及高效液相制備技術(shù)，得化合物1（16.5 mg）、2（70.0 mg）、8（60.1 mg）。乙酸乙酯萃取部位（Fr. 2）經(jīng)硅膠柱色譜，以二氯甲烷-甲醇溶劑系統(tǒng)梯度洗脫，得到組分：Fr. 2-1～Fr. 2-5，再經(jīng)過硅膠柱色譜、重結(jié)晶分離純化及高效液相制備技術(shù)，得化合物3（38.9 mg）、4（10.1 mg）、5（7.3 mg）、6（20.5 mg）、7（500.3 mg）、9（21.1 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1 白色粉末。C20H18O6，ESI-MSm/z376.8[M+Na]+，推測化合物分子量為354。1H-NMR（CDCl3，600 MHz）δ：6.79～6.89（6H，m，H-2'，H-2''，H-5'，H-5''，H-6'，H-6''），5.98（2H，s，-OCH2O-），5.97（2H，s，-OCH2O-），4.85（1H，d，J=5.2 Hz，H-6），4.42（1H，d，J=7.1 Hz，H-2），4.12（1H，d，J=9.5 Hz，H-8β），3.86（2H，m，H-8α，H-4α），3.33（2H，m，H-5，H-4β）， 2.89（1H，m，H-1）；13C-NMR（CDCl3，150 MHz）δ：148.2（C-3''），147.8 （C-4'），147.4（C-4''），146.8（C-3'），135.3（C-1''），132.4（C-1'），119.8 （C-6''），118.9（C-6'），108.4（C-5'，5''），106.8（C-2''），106.6（C-2'）， 101.3（-OCH2O-），101.2（-OCH2O-），87.9（C-6），82.2（C-2），71.1（C-4）， 69.9（C-8），54.8（C-5），50.4（C-1）。以上數(shù)據(jù)與文獻[6]基本一致，該化合物鑒定為細辛脂素。

化合物2 白色粉末。C17H20O4，ESI-MSm/z288.8[M+H]+，推測化合物分子量為288。1H-NMR（CD3OD，600 MHz）δ：6.31（1H，s，H-9），2.36（1H， m，H-5），2.27，2.75（各1H，m，H-6），2.08（3H，s，CH3C=O），1.87（3H，s，H3-13），1.80（1H，m，H-4），1.58（1H，m，H-1），1.35（1H，m，H-3），0.93（3H，s，H3-14），0.85，0.98（各1H，m，H-2）；13C-NMR（CD3OD，150 MHz）δ：173.2（CH3C=O），173.1（C-12），151.1（C-8），150.6（C-7），123.2（C-9），121.9（C-11），67.2（C-15），61.6（C-5），44.4 （C-4），43.3（C-10），28.3（C-1）， 23.6（C-6）， 23.3（C-3）， 21.3（CH3C=O）， 20.9（C-14），17.5（C-2），8.5（C-13）。以上數(shù)據(jù)與文獻[7]基本一致，該化合物鑒定為金粟蘭內(nèi)酯C。

化合物3 淡黃色粉末。E S I-M Sm/z305.1[M+H]+，327.1[M+Na]+，推測化合物分子量為304。1H-NMR（CD3OD，600 MHz）δ：6.43（1H，s，H-9），4.34（2H，s，H-13），4.22（2H，s，H-15），3.00（1H，d，J=17.2 Hz，H-6α）， 2.45（1H，t，J=15.6 Hz，H-6β），2.28（1H，t，J=12.8 Hz，H-5），2.07（3H， s，H-2'），1.86～1.76（1H，m，H-4），1.58（1H，d，J=7.7 Hz，H-1），1.34（1H，d，J=3.0 Hz，H-3），0.98（1H，s，H-2β），0.94（3H，s，H-14），0.88 ～ 0.81（1H，m，H-2α）；13C-NMR（CD3OD，150 MHz）δ：173.1（C-1'），171.7（C-12），153.0（C-8），150.9（C-7），125.7（C-9），124.1（C-11），67.3（C-15），61.7（C-5），54.9（C-13），44.3（C-4），43.2（C-10），28.3（C-1），23.9（C-6），23.3（C-3），21.3（C-2'），20.9（C-14），17.5（C-2）。以上數(shù)據(jù)與文獻[8]基本一致，該化合物鑒定為shizukanolide H。

化合物4 白色粉末。C10H9NO2，ESI-MSm/z176.1[M+H]+，推測化合物分子量為175。1H-NMR（CD3OD，600 MHz）δ：8.05（1H，d，J=7.1 Hz，H-4）， 7.95（1H，s，H-2），7.44（1H，d，J=7.4 Hz，H-7），7.19（2H，m，H-5, 6），3.88（3H，s，H-9）；13C-NMR（CD3OD，150 MHz）δ：168.0（C-8），138.3 （C-7a）， 133.4（C-2），127.4（C-3a），123.9（C-6），122.7（C-5），122.0（C-4），113.1（C-7），108.4（C-3），51.5（C-9）。以上數(shù)據(jù)與文獻[9]基本一致，該化合物鑒定為吲哚-3-甲酸甲酯。

化合物5 白色針晶。C4H6O4，ESI-MSm/z135.9 [M+H2O]+，推測化合物分子量為118。1H-NMR（CD3OD，600 MHz）δ：2.51（4H，s，H-2, 3）；13C-NMR （CD3OD，150 MHz）δ：176.3（C=O），30.0（C-2, 3）。以上數(shù)據(jù)與文獻[10]基本一致，該化合物鑒定為丁二酸

化合物6 淡黃色針狀結(jié)晶。C11H10O5，ESI-MSm/z222.8[M+H]+，推測化合物分子質(zhì)量為222。1H-NMR（CD3OD，600 MHz）δ：7.87（1H，d，J=9.4 Hz， H-4），6.93（1H，s，H-5），6.25（1H，d，J=9.4 Hz，H-3），3.97（3H，s，8-OCH3），3.92（3H，s，6-OCH3）；13C-NMR（CD3OD，150 MHz）δ：163.6（C-2），147.5（C-6），146.7（C-4），145.8（C-9），144.8（C-7），136.3（C-8）， 113.0（C-3），112.3（C-10），105.1（C-5），61.8（C8-OCH3），57.0（C6-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻[11]基本一致，該化合物鑒定為異嗪皮啶。

化合物7 白色粉末。C40H44O13，ESI-MSm/z755.4 [M+Na]+，推測化合物分子質(zhì)量為732。1H-NMR（CD3OD，600 MHz）δ：5.91（1H，s，H-b），5.00（1H， d，J=17.0 Hz，H-d），4.92（1H，d，J=12.7 Hz，H-13'）， 4.68（1H，d，J=8.4 Hz，H-15'），4.66（1H，d，J=7.3 Hz，H-13'），4.39（1H，d，J=17.0 Hz，H-d），3.91（1H，d，J=3.1 Hz，H-6），3.89（1H，s，H-9），3.71（3H，s，-OCH3）， 3.49（2H，d，J=11.6 Hz，H-15'），2.91（1H，m，H-g），2.87（1H，m，H-h）， 2.79（1H，d，J=7.1 Hz，H-15α），2.76（1H，dt，J=12.6, 4.4 Hz，H-h），2.72 （1H，dd，J=12.2，5.7 Hz，H-6'β），2.64（1H，dd，J=6.9，4.0 Hz，H-6'α）， 2.61（1H，dd，J=14.2, 5.6 Hz，H-g），2.53（1H，m，H-15β），2.12（3H，s， H-e），2.04（1H，m，H-1），1.89（1H，s，H-5'），1.88（3H，s，H-13），1.86（1H，s，H-9'），1.84（1H，dd，J=9.1, 3.8 Hz，H-3），1.59（1H，td，J=8.2， 4.2 Hz，H-1'），1.37（1H，td，J=8.8,3.4 Hz，H-3'），1.29（1H，dd，J=9.0, 4.0 Hz，H-2'β），1.01（1H，s，H-2α），0.99（3H，s，H-14），0.79（3H，s，H-14'）， 0.70（1H，td，J=8.8, 5.8 Hz，H-2'α），0.33（1H，dd，J=7.3, 4.0 Hz，H-2β）；13C-NMR（CD3OD，150 MHz）δ： 200.6（C-8），174.7（C-7'），172.3（C-i）， 172.0（C-f），171.9（C-12'），170.7（C-12），166.5（C-a），153.8（C-c）， 147.0（C-11），142.7（C-4），132.8（C-5），131.2（C-7），123.4（C-11'）， 113.0（C-b），93.8（C-8'），79.7（C-9），77.4（C-4'），71.5（C-15'），65.8 （C-d），61.3（C-5'），55.3（C-13'），55.0（C-9'），52.7（-OCH3），51.1（C-10），44.9（C-10'）， 41.6（C-6），29.3（Cg），29.0（C-h），27.5（C-3'）， 26.4（C-1），26.1（C-1'），26.0（C-14'），25.5（C-15），25.0（C-3），24.8 （C-6'），20.0（C-13），16.2（C-2），15.7（C-14），15.7 （C-e），11.7（C-2'）。以上數(shù)據(jù)與文獻[12]基本一致，該化合物鑒定為銀線草醇F。

化合物 9 白色粉末。 易溶于吡啶，Liebermann-Burchard 反應呈陽性，與胡蘿卜苷對照品TLC的多種展開劑系統(tǒng)下Rf值一致，與胡蘿卜苷標準品混合后熔點不下降，該化合物鑒定為胡蘿卜苷。

4 結(jié)論

本實驗通過對馬蹄香全草95 %乙醇和75 %乙醇提取物的石油醚、乙酸乙酯部位進行分離純化，共得到9個化合物，分別是木脂素類1個：化合物1；烏藥烷型倍半萜類3個：化合物2，3，7；生物堿類1個：化合物4；香豆素類1個：化合物6；有機酸類1個：化合物5；甾醇及其苷類2個：化合物8，9。

其中化合物1，2，3，4，6，7均為首次從馬蹄香中分離得到，并且烏藥烷型倍半萜類化合物系首次從該植物中分離得到。

致謝

感謝山東省醫(yī)學科學院醫(yī)藥衛(wèi)生科技創(chuàng)新工程項目經(jīng)費支持。