替格瑞洛片的制備及其工藝穩(wěn)定性研究

趙文聰

（鄭州市婦幼保健院 藥劑科，河南 鄭州 450053）

替格瑞洛（ticagrelor）是一種新型環(huán)戊基三唑嘧啶類（CPTP）口服抗血小板聚集藥物，其靶點為P2Y12受體[1-3]，商品名為倍林達（Brilinta），是由英國阿斯利康公司研制開發(fā)的一種新的治療急性冠脈綜合征的藥物。替格瑞洛相比氯吡格雷起效更快[4]，并能顯著地降低心血管不良事件的發(fā)生率及急性冠脈綜合征（ACS）的死亡率[5-6]。目前已在全球多個國家得到批準，上市后，被眾多國際治療指南推薦用于ACS患者的治療，包括歐洲心臟病學會（ESC）指南、美國心臟病學會（ACC）指南和美國心臟協(xié)會（AHA）指南等[7]。2012年在我國上市，同時我國《經(jīng)皮冠狀動脈介入治療（PCI）指南》也將其列為抗血小板治療藥物之一。在生物藥劑學分類系統(tǒng)（BCS）中，此種藥物屬于IV類化合物，具有難溶性，不同處方制備工藝可能都會對其溶出度造成影響。因此，探究替格瑞洛仿制片的制備方法并保證其工藝穩(wěn)定性具有重要意義。本文探討了替格瑞洛仿制片的制備，以溶出度為主要評價指標，篩選了與原研市售片溶出曲線一致的最佳處方工藝，并驗證了3批次自制處方片劑的工藝穩(wěn)定性。

1 儀器與材料

1.1 儀器

TDP-5單沖壓片機（上海天峰）；YQ50-1氣流粉碎機（上海塞山）；KJZ-10快速攪拌制粒機（上海信宜）；BY-300A包衣機（鄭州澤銘）；YPD-2片劑硬度計（山東博科）；CS-2A脆碎度測試儀（天津盛達）；MF-50紅外快速水分測定儀（日本AND）；AUW120D電子天平（日本島津）；ZRS-8G智能藥物溶出儀（天津天大天發(fā)）；pH-3C型pH計，（上海雷磁儀器廠）；UV-8500型紫外分光光度計（上海天美）等。

1.2 藥品與試劑

替格瑞洛原料藥（天潤醫(yī)藥，純度：99.5 %）；替格瑞洛片（阿斯利康，批號：TDGK-1509044，規(guī)格：90 mg/片）；甘露醇（法國羅蓋特）；磷酸氫鈣（湖州展望）；羧甲基淀粉鈉（湖州展望）；羥丙基纖維素（安徽山河藥用輔料股份有限公司，批號：20120815）；硬脂酸鎂（安徽山河）；歐巴代包衣（上?？房担?；鹽酸，吐溫，磷酸二氫鉀，氫氧化鈉，醋酸鈉，95 %乙醇等。

2 方法與結(jié)果

2.1 處方篩選與確定

為確保與原研藥的一致性，本研究參考替格瑞洛片原研處方組成，選擇原研藥所用輔料種類，并分別對替格瑞洛原料藥粒徑、片芯輔料（稀釋劑甘露醇、稀釋劑磷酸氫鈣、黏合劑羥丙基纖維素、崩解劑羧甲基淀粉鈉）的用量、包衣增重等進行篩選。經(jīng)過篩選，最終確定處方為：片芯輔料種類為甘露醇、磷酸氫鈣、羧甲基淀粉鈉、羥丙基纖維素和硬脂酸鎂，包衣增重為3 %；最終確定制備工藝為：濕法制粒壓片。

2.2 替格瑞洛片的制備

原輔料預處理：將替格瑞洛原料藥用氣流粉碎機粉碎，控制粒徑為d（0.9）≤25 μm；將所有輔料過100目藥典篩，備用。

片劑制備：稱取替格瑞洛90 g，甘露醇120 g、磷酸氫鈣60 g、羧甲基淀粉鈉10 g、羥丙基纖維素8 g，適量水，混勻，濕法制粒，加入硬脂酸鎂3 g，混勻，壓片，再進行包衣，連續(xù)制備3批次，即得替格瑞洛片。

2.3 溶出度測定方法的建立

替格瑞洛片為普通口服固體制劑，替格瑞洛溶解度低，參照替格瑞洛原研片質(zhì)量標準，加入0.2 %吐溫，分別以含0.2 %吐溫的pH 1.0鹽酸溶液、pH 4.5醋酸鹽溶液、pH 6.8磷酸鹽溶液、水4種溶出介質(zhì)，槳法[8]，評價考察自制3批片劑與參比片劑的溶出一致性。

2.3.1 檢測波長的確定 分別稱取替格瑞洛原料藥、片劑輔料、替格瑞洛原料藥和片劑輔料的混合物適量，分別用含0.2 %吐溫的pH 1.0鹽酸溶液、pH 4.5醋酸鹽溶液、pH 6.8磷酸鹽溶液、水4種溶出介質(zhì)溶解，200～400 nm掃描紫外圖譜，并參考文獻[9]，確定300 nm為檢測波長，此波長下，輔料對替格瑞洛測定無干擾。

2.3.2 濾膜吸附試驗 取自制替格瑞洛片劑，分別采用含0.2 %吐溫的pH 1.0鹽酸溶液、pH 4.5醋酸鹽溶液、pH 6.8磷酸鹽溶液、水4種溶出介質(zhì)，按溶出度測定方法，于60 min時取溶出液適量，分別采用0.45 μm膜過濾和離心的方式處理，分別測定兩者的吸光度。結(jié)果表明，4種不同介質(zhì)的替格瑞洛溶出經(jīng)濾膜和離心處理，吸光度無差異，方便起見，采用0.45 μm濾膜處理溶出液。

2.3.3 線性和范圍 精密稱取替格瑞洛對照品10.04，10.23，10.31，10.19 mg于4個100 ml量瓶，分別用含0.2 %吐溫的pH 1.0鹽酸溶液、pH 4.5醋酸鹽溶液、pH 6.8磷酸鹽溶液、水4種溶出介質(zhì)溶解并定容至刻度，混勻，作為儲備液。分別用儲備液配制成濃度為5.07，10.14，15.21，20.28，25.35 μg/ml的pH 1.0介質(zhì)中替格瑞洛系列標準溶液；濃度為5.12，10.23，15.35，20.46，25.58 μg/ml的pH 4.5介質(zhì)中替格瑞洛系列標準溶液；濃度為5.16，10.31，15.47，20.62，25.78 μg/ml的pH 6.8介質(zhì)中替格瑞洛系列標準溶液；濃度為5.10，10.19，15.29，20.38，25.48 μg/ml的水介質(zhì)中替格瑞洛系列標準溶液，照紫外分光光度法在300 nm處測定吸光度（A）值。以質(zhì)量濃度（μg/ml）為橫坐標，A為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程?；貧w方程依次為：y=0.0299x+0.0033，R2=0.9998，線性范圍為5.07～25.35 μg/ml；y=0.0295x+0.0085，R2=0.9999，線性范圍為5.12～25.58 μg/ml；y=0.0290x+0.0140，線性范圍為5.16～25.78 μg/ml；y=0.0298x+0.0017，線性范圍為5.10～25.48 μg/ml。

2.3.4 準確度 按處方量的50 %，80 %，100 %分別精密稱取替格瑞洛對照品約45，72，90 mg各12份，加入相應處方比例的空白輔料，置于12個100 ml量瓶中，分別用含0.2 %吐溫的pH 1.0鹽酸溶液、pH 4.5醋酸鹽溶液、pH 6.8磷酸鹽溶液、水4種溶出介質(zhì)溶解并定容至刻度（同一介質(zhì)的相同濃度水平溶液配制3份）。分別移取2 ml溶液，置100ml量瓶中，分別用相應的溶出介質(zhì)稀釋定容至刻度，混勻，照紫外分光光度法在300 nm處測定吸光度（A）值，并配制相應的對照品溶液，測定吸光度值并計算回收率。結(jié)果顯示，替格瑞洛在4種溶出介質(zhì)中回收率良好。見表1～4。

表1 替格瑞洛在pH 1.0介質(zhì)中回收率

表2 替格瑞洛在pH 4.5介質(zhì)中回收率

表3 替格瑞洛在pH 6.8介質(zhì)中回收率

表4 替格瑞洛在水中回收率

2.3.5 精密度

2.3.5.1 重復性 取自制片劑6片，分別以含0.2 %吐溫的pH 1.0鹽酸溶液、pH 4.5醋酸鹽溶液、pH 6.8磷酸鹽溶液、水900 ml為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速75 r/min。于60 min時取溶液5 ml，過0.45 μm濾膜，取續(xù)濾液2 ml，加入10 ml量瓶，并用溶出介質(zhì)稀釋至刻度，混勻，照紫外分光光度法在300 nm處測定吸光度（A）值。結(jié)果顯示重復性良好，見表5。

表5 4種溶出介質(zhì)中測定的重復性

表6 4種溶出介質(zhì)中測定的中間精密度

2.3.5.2 中間精密度 取自制片劑6片，由另一試驗人員在不同日期采用不同的溶出度測定儀和紫外分光光度計進行測定，結(jié)果顯示中間精密度良好，見表6。

2.3.5.3 儀器精密度 取重復性測定樣品（pH 1.0介質(zhì)中溶出），重復測定6次。結(jié)果RSD=0.04 %（n=6），顯示儀器精密度良好。

2.3.6 穩(wěn)定性 取2.2.5.1項下重復性測定的4種溶出介質(zhì)中的4個樣品，分別于0，0.5，1，2，4，8 h測定，結(jié)果8 h內(nèi)，替格瑞洛在4種溶出介質(zhì)中穩(wěn)定性良好，見表7。

表7 替格瑞洛在4種溶出介質(zhì)中的穩(wěn)定性

2.3.7 溶出曲線的繪制及比較 取自制片劑和參比制劑各12片，分別以含0.2 %吐溫的pH 1.0鹽酸溶液、pH 4.5醋酸鹽溶液、pH 6.8磷酸鹽溶液、水900 ml為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速75 r/min。分別于5，10，15，30，45，60 min取溶液5 ml，并及時補充相應溶出介質(zhì)5 ml，過0.45 μm濾膜，取續(xù)濾液2 ml，加入10 ml量瓶，并用溶出介質(zhì)稀釋至刻度，混勻，照紫外分光光度法在300 nm處測定吸光度（A）值；同時配制相應介質(zhì)的對照品溶液，測定A值，并以外標法計算累積溶出度，比較自制片劑和參比制劑的溶出相似因子f2。見圖1、表8。

圖1 替格瑞洛片在4種不同溶出介質(zhì)中的溶出曲線

表8 自制替格瑞洛片與原研制劑在4種溶出介質(zhì)中的溶出度及f2

3 討論

隨著人們生活條件的改善、人口老齡化的不斷加劇以及環(huán)境的逐漸惡化，我國血栓性疾病的發(fā)病率和死亡率呈逐年升高的趨勢，且不斷年輕化[10]。血栓的形成是血栓性疾病的發(fā)病原因，而抗血小板藥物對于預防和治療血栓性疾病有較好的效果，故探究制備安全有效的抗血小板藥物的方法具有重要實際意義。

本研究中，首先對替格瑞洛片進行了處方篩選，并按標準流程和方法成功制備了替格瑞洛片。進一步采用體外溶出評價方法，比較溶出相似因子f2來檢驗自制片劑的質(zhì)量，結(jié)果顯示，替格瑞洛在4種不同溶出介質(zhì)（pH 1.0鹽酸溶液、pH 4.5醋酸鹽溶液、pH 6.8磷酸鹽溶液和純水）中，均顯示出良好的線性關系；且在上述4種溶出介質(zhì)回收率均較高，均在99 %以上；此外，其在上述4種介質(zhì)中重復性、中間精密度和穩(wěn)定性均顯示良好。提示替格瑞洛自制制劑與原研制劑質(zhì)量具有一致性[11]。

此外，本實驗結(jié)果表明，采用紫外分光光度法測定溶出度方法簡單可靠，且具有良好的線性關系，方法學等各方面均符合要求，這有利于對工藝質(zhì)量穩(wěn)定性進行評價。同時，本實驗完成的3批自制片劑在4種溶出介質(zhì)中與原研片劑比較f2[12]均大于50，即提示自制片劑在4種溶出介質(zhì)中與原研制劑比較體外釋放一致性良好，有利于實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。

以往相關研究顯示，替格瑞洛在pH 1.0鹽酸溶液、pH 4.5醋酸鹽溶液、pH 6.8磷酸鹽溶液和純水這4種常見介質(zhì)中的累積溶出度低于10 %，缺乏臨床指導意義[13]。但本研究結(jié)果仍顯示其累積溶出度良好，可能與不同的制作工藝和原料選擇有關。本研究中替格瑞洛仿制片處方為：替格瑞洛90 g、甘露醇120 g、磷酸氫鈣60 g、羧甲基淀粉鈉10 g、羥丙基纖維素8 g、硬脂酸鎂3 g，包衣增重3 %。因此可考慮按此處方進行大批量工業(yè)化生產(chǎn)。

綜上所述，替格瑞洛片制備工藝穩(wěn)定且自制制劑與參比制劑在不同溶出介質(zhì)中的體外溶出行為一致，具有較好的工藝穩(wěn)定性。