調(diào)節(jié)性B細(xì)胞在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中的研究進(jìn)展

宋興 戚務(wù)芳

【摘 要】 調(diào)節(jié)性B細(xì)胞（Bregs）的主要免疫抑制作用是經(jīng)分泌白細(xì)胞介素-10產(chǎn)生的。人類Bergs的表型主要是CD19+CD24hiCD38hi和CD19+CD24hiCD27+。目前，研究Bregs的調(diào)控主要經(jīng)過(guò)Toll樣受體、BAFF/APRIL這兩條信號(hào)通路。Bregs在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中數(shù)量減少，功能受損，與疾病活動(dòng)性相關(guān)。Bregs有可能幫助判斷類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎預(yù)后和生物制劑選擇，并可能成為治療的新靶點(diǎn)。

【關(guān)鍵詞】 關(guān)節(jié)炎，類風(fēng)濕;調(diào)節(jié)性B細(xì)胞;白細(xì)胞介素-10;免疫抑制;治療;綜述

B細(xì)胞在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，

RA）中起著重要作用，包括產(chǎn)生抗體（如類風(fēng)濕因子、抗環(huán)瓜氨酸肽抗體），分泌細(xì)胞因子，呈遞抗原和調(diào)節(jié)T細(xì)胞功能[1]。近些年，具有免疫調(diào)節(jié)功能的B細(xì)胞在RA的研究中越來(lái)越受到關(guān)注。根據(jù)其功能，這類B細(xì)胞被命名為調(diào)節(jié)性B細(xì)胞（Bregs）[2]。Bregs可通過(guò)分泌細(xì)胞因子[白細(xì)胞介素（IL）-10、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）和IL-35等]抑制免疫反應(yīng)。目前研究認(rèn)為，Bregs可能對(duì)RA的發(fā)病、疾病活動(dòng)及治療具有重要的影響。本文將對(duì)Bregs表型、調(diào)控機(jī)制及在RA中的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述。

1 Bregs的由來(lái)

1974年，NETA等[3]發(fā)現(xiàn)，在遲發(fā)性超敏反應(yīng)豚鼠模型中存在一種能夠抑制T細(xì)胞免疫活性的B細(xì)胞。MIZOGUCHI等[4]在炎癥性腸病模型中發(fā)現(xiàn)了B細(xì)胞的免疫負(fù)向調(diào)節(jié)作用，并率先提出“Breg”一詞。之后的研究發(fā)現(xiàn)，Bregs主要是通過(guò)分泌IL-10、TGF-β等細(xì)胞因子抑制免疫反應(yīng)，也可以通過(guò)與靶細(xì)胞膜表面分子（Fasl、GITRL和PD-L1等）的相互作用調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答。因?yàn)锽regs的主要免疫抑制作用是經(jīng)分泌IL-10產(chǎn)生的，所以部分研究也將其命名為B10細(xì)胞[5]。

2 IL-10

IL-10是一種多細(xì)胞源、多功能的細(xì)胞因子，調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長(zhǎng)與分化，參與炎性反應(yīng)和免疫反應(yīng)，是目前公認(rèn)的炎癥與免疫抑制因子。1989年，MOSMANNAND及他的同事描述了一種新的免疫介質(zhì)，由Th2細(xì)胞克隆分泌，能夠抑制Th1細(xì)胞克隆IL-2和干擾素-γ（IFN-γ）的合成，早期被命名為細(xì)胞因子合成抑制因子（CSIF），這種因子后來(lái)被命名為IL-10[6]。幾乎所有淋巴細(xì)胞均能合成IL-10，如單核巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞、B細(xì)胞等。人類IL-10基因位于1號(hào)染色體上，存在多種基因型，目前研究較多的是IL10.G和IL10.R[7]。IL-10可促進(jìn)輔助性T細(xì)胞向Th2分化，并且抑制其向Th1的分化。IL-10的基因多態(tài)性與多種疾病相關(guān)，在這些疾病的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起到重要作用。B細(xì)胞經(jīng)Toll樣受體（TLRs）誘導(dǎo)可產(chǎn)生IL-10，而抑制STAT3和ERK的活化可明顯減少TLRs誘導(dǎo)產(chǎn)生的IL-10[8]。

在RA中血清IL-10水平較正常人升高。IL-10似乎發(fā)揮了雙重作用，一方面可以抑制炎癥因子，另一方面可以激活體液免疫反應(yīng)[9]。有研究利用IL-10的免疫抑制作用治療RA，但未取得滿意的療效。分析其原因，人工合成IL-10的半衰期為2.7～4.5 h，半衰期較短;而且體內(nèi)存在復(fù)雜的調(diào)節(jié)、反饋機(jī)制，使外源性IL-10難于達(dá)到靶細(xì)胞、組織發(fā)揮免疫抑制作用。因此，目前研究利用F8-IL10人重組免疫細(xì)胞因子治療RA進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段[10]。F8為一種可以特異性結(jié)合纖維連接蛋白的抗體，它可以將連接的IL-10帶到關(guān)節(jié)病灶處發(fā)揮作用。

3 Bregs的表型

區(qū)別于調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Tregs）明確的細(xì)胞表型（CD4+CD25+Foxp3+），目前Bregs尚無(wú)明確的特異性細(xì)胞表型。對(duì)于Bregs表型的確定，主要為具有分泌IL-10功能的B細(xì)胞亞群。不同文獻(xiàn)報(bào)道Bregs的表型繁多。較為公認(rèn)的，在鼠類為CD19+CD1dhiCD5+，在人類主要表型為CD19+CD24hiCD38hi和CD19+CD24hiCD27+的B細(xì)胞[11]。CD19+CD24hiCD38hiB細(xì)胞也被稱為“過(guò)渡期B細(xì)胞”，占外周血B細(xì)胞比例約10%，其包含了約71%的CD19+CD1dhiCD5+B細(xì)胞。而CD19+CD24hiCD27+中60%表達(dá)CD38+，其中40%的B細(xì)胞可能是祖B細(xì)胞，具有分化為分泌IL-10的B細(xì)胞的潛能[12]。

另外，CD25hiCD71hiCD73-、CD19+CD1dhiCD5+、

CD39+CD73+或CD25hiCD27hiCD86hiCD1dhiTGFβhi均有報(bào)道可用來(lái)標(biāo)記分泌IL-10的Bregs[13]。

4 Bregs的功能

目前研究認(rèn)為，Bregs是一種具有免疫調(diào)節(jié)作用的B細(xì)胞亞群，主要通過(guò)分泌IL-10發(fā)揮免疫抑制作用。Bregs可以抑制炎癥性Th1和Th17的分化，誘導(dǎo)Tregs通過(guò)抑制IFN-γ和腫瘤壞死因子-α（TNF-α）阻止自身免疫反應(yīng)[14]。而另一方面，Bregs也可通過(guò)抑制CD8+T細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞的殺傷作用從而阻礙病原體和腫瘤細(xì)胞的清除[15]。

5 Bregs的調(diào)控

Bregs的調(diào)控可分為內(nèi)源性調(diào)控、外源性調(diào)控[16]。內(nèi)源性調(diào)控包括B細(xì)胞膜表面的Toll樣受體（TLRs）、CD40、Tim-1、BCR和CD19及其下游信號(hào)通路的激活能誘導(dǎo)初始B細(xì)胞向Bregs方向的分化。外源性調(diào)控包括細(xì)胞因子B淋巴細(xì)胞刺激因子（BAFF）、IL-21、IL-6、IL-1β、IL-35、TGF-β和Ⅰ型干擾素（IFN-α/β）也具有誘導(dǎo)Bregs分化的功能。此外，凋亡細(xì)胞和體內(nèi)特殊的微環(huán)境對(duì)Bregs的誘導(dǎo)也十分重要[17]。因?yàn)槠渲蠺LRs、BAFF/增殖誘導(dǎo)配體（APRIL）是公認(rèn)最重要的調(diào)節(jié)通路，且相關(guān)研究較多。

5.1 TLRs TLRs作為一類信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)受體，參與B細(xì)胞的活化。越來(lái)越多的證據(jù)表明，它們與自身免疫病的發(fā)病關(guān)系密切[18]。研究顯示，TLR7、TLR9分別通過(guò)其配體R848、CpG活化可誘導(dǎo)產(chǎn)生分泌IL-10的Bregs[19-20]。進(jìn)一步研究分子機(jī)制，TLR7、TLR9通過(guò)接頭蛋白MyD88經(jīng)STAT3和ERK通路促進(jìn)B細(xì)胞分泌IL-10，而阻滯STAT3或ERK活化可明顯抑制IL-10的分泌。INF-α僅對(duì)TLR7通路的STAT3和ERK有活化作用，對(duì)TLR9通路無(wú)促進(jìn)作用[21]。另外有研究發(fā)現(xiàn)，一種非典型的IκB蛋白（IκBNS）經(jīng)TLRs通路參與了Bregs的分化[22]，敲除IκBNS的小鼠生成IL-10的B細(xì)胞明顯減少，且Prdm1和Irf4表達(dá)下降，不能生成分泌IL-10的CD138+漿細(xì)胞。

5.2 BAFF/APRIL BAFF和APRIL均屬于TNF家族成員，后者是前者的同源物。BAFF受體包括3種：BAFF受體（BAFF-R）、B細(xì)胞成熟抗原（BCMA）和轉(zhuǎn)膜激活劑-鈣調(diào)節(jié)劑-親環(huán)素配體相互作用物（TACI）。BAFF可與3種受體結(jié)合，而APRIL只能與TACI、BCMA結(jié)合。BAFF對(duì)于B細(xì)胞的成熟和存活具有至關(guān)重要的作用。研究報(bào)道，BAFF可通過(guò)TACI調(diào)節(jié)Bregs的分化，促進(jìn)IL-10的分泌[23]。在BAFF轉(zhuǎn)基因小鼠實(shí)驗(yàn)中，TLRs的表達(dá)受TACI的調(diào)控，敲除掉TACI的小鼠B細(xì)胞分泌IL-10明顯減少[24]。另有報(bào)道，APRIL在TLR9-CpG刺激下可活化STAT3，促進(jìn)Bregs分泌，其作用強(qiáng)于BAFF，相關(guān)受體TACI表達(dá)上調(diào)，BAFFR表達(dá)下降[25]。

6 Bregs在RA中的作用

目前，關(guān)于Bregs在RA中發(fā)揮的作用逐漸成為研究的熱點(diǎn)，但Bregs的作用機(jī)制及對(duì)于RA診斷、治療、預(yù)后的影響尚未明確。研究報(bào)道，在RA中Bregs在數(shù)量和功能上均發(fā)生了改變[26-27]，但研究結(jié)論并不一致。FLORES-BORJA等[28]研究顯示，RA患者CD19+CD24hiCD38hiB細(xì)胞不能將CD4+CD25-T細(xì)胞轉(zhuǎn)化為具有免疫抑制功能的Tregs，而且活動(dòng)期RA患者外周血CD19+CD24hiCD38hiB細(xì)胞數(shù)量少于穩(wěn)定期RA和健康人。提示活動(dòng)期RA的CD19+CD24hiCD38hiB細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)功能受損，不能阻止自身免疫反應(yīng)和炎癥進(jìn)展，從而導(dǎo)致RA發(fā)生。有研究報(bào)道，病程少于5年的RA患者其CD24hiCD38hiB細(xì)胞、CD24hiCD27+、CD5+B細(xì)胞數(shù)量與健康人類似，但分泌IL-10的B細(xì)胞（B10）水平低于健康人，且B10水平與DAS28、類風(fēng)濕因子、C-反應(yīng)蛋白呈負(fù)相關(guān)，提示B10水平影響RA病情，反映疾病活動(dòng)度[29]。我國(guó)研究人員發(fā)現(xiàn)，與健康對(duì)照組相比，RA患者外周血CD19+CD24hiCD38hiB細(xì)胞比例顯著降低，其分泌IL-10水平顯著降低，導(dǎo)致免疫抑制功能降低，進(jìn)而引起CD4 T細(xì)胞比例升高和IFN-γ水平升高，影響RA病情進(jìn)展[26]。

Bregs還可以異位表達(dá)RANKL[30]。在RA時(shí)表達(dá)RANKL的Bregs明顯增加，其比例與疾病活動(dòng)度、腫脹關(guān)節(jié)數(shù)呈正相關(guān)，且與表達(dá)IL-10的Bregs呈負(fù)相關(guān)。表達(dá)RANKL的Bregs明顯促進(jìn)骨破壞、骨侵蝕。有趣的是，隨著有效治療和病情的緩解，生成IL-10的Bregs增加，這種表達(dá)RANKL的Bregs逐漸減少。提示調(diào)節(jié)Bregs的分泌狀態(tài)可能對(duì)RA治療有效。

目前對(duì)于RA患者Bregs的調(diào)控研究較少。有研究認(rèn)為，與健康人群相似，TLR9、CD40、IL-21對(duì)于RA患者B細(xì)胞產(chǎn)生IL-10存在促進(jìn)作用。TLR9、CD40通過(guò)活化CREB通路，IL-21通過(guò)活化STAT3，協(xié)同調(diào)節(jié)Bregs分泌IL-10[31]。

治療始終是醫(yī)生最為關(guān)注的一個(gè)問(wèn)題。Bregs有可能幫助判斷RA預(yù)后和生物制劑選擇[32]。基線時(shí)CD24hiCd27+Breg水平與治療6個(gè)月后DAS28緩解率呈正相關(guān)，具有提示Abatacept治療能否有效的作用[33-34]?？紤]到IL-10的免疫調(diào)節(jié)作用，曾認(rèn)為IL-10將會(huì)是一種有效的RA治療藥物。但相關(guān)的臨床藥物試驗(yàn)證實(shí)外源性IL-10對(duì)于RA治療效果并不理想。分析原因，有學(xué)者認(rèn)為IL-10半衰期短，且在人體內(nèi)代謝復(fù)雜，故認(rèn)為促進(jìn)Bregs生成分泌內(nèi)源性IL-10，可能對(duì)于控制RA更為有效[35-36]。

7 小結(jié)與展望

總之，因?yàn)锽regs具有免疫抑制作用，目前已成為自身免疫性疾病研究的一個(gè)重要靶點(diǎn)。Bregs在RA中數(shù)量減少，功能受損，故可能對(duì)RA的發(fā)生、發(fā)展、預(yù)后產(chǎn)生重要影響。但Bregs尚無(wú)明確的特異性表型，作用機(jī)制還需進(jìn)一步完善，特別是在RA中Bregs信號(hào)通路的調(diào)控尚不明確。隨著研究的不斷深入，未來(lái)Bregs很有可能成為RA治療的新靶點(diǎn)。

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收稿日期：2019-08-09;修回日期：2019-10-12