皮炎靈搽劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

李 娜，趙娜娜，陳 晴，葛 媛，楊 陽(yáng)，朱 斌

（中國(guó)人民解放軍第九七醫(yī)院藥劑科，江蘇 徐州 221004）

皮炎靈搽劑為我院非標(biāo)準(zhǔn)自制制劑，由間苯二酚、水楊酸、冰片、醋酸氟輕松等組方，具有抗菌消炎、抗過(guò)敏、止癢作用，主治神經(jīng)性皮炎、慢性濕疹等癥，在我院臨床應(yīng)用10余年，療效確切。前期，本課題組通過(guò)家兔及豚鼠皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)[1]、安全性實(shí)驗(yàn)[2]，證實(shí)該制劑為較安全的外用制劑。本研究中通過(guò)理化鑒別、薄層色譜(TLC)鑒別、相關(guān)檢查及對(duì)該制劑中間苯二酚、水楊酸含量的測(cè)定，以期為其質(zhì)量控制提供參考?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

儀器：1260型高效液相色譜儀，包括二極管陣列檢測(cè)器（美國(guó)Agilent公司）；AB265S-5型電子分析天平（瑞士Mettler Toledo公司，最大載荷220 g，最小分度值0．01 mg）；硅膠G薄層板（青島海洋化工廠分廠，批號(hào)為20160902）。

試藥：皮炎靈搽劑（我院藥劑科制劑室自制，批號(hào)分別為 20150611，20150617，20150625，規(guī)格均為每瓶20 mL）；間苯二酚對(duì)照品（批號(hào)為 100389-201202，純度為100%），水楊酸對(duì)照品（批號(hào)為100106-201104，純度為100%），冰片對(duì)照品（批號(hào)為110743-200905，純度為100%），均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；甲醇(德國(guó)Merck公司)為色譜純，其余試劑(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)均為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2．1 性狀

本品為無(wú)色或淡黃色澄明溶液，具有清香氣味。

2．2 鑒別

理化鑒別：取樣品1 mL，加三氯化鐵試液2滴，即顯藍(lán)紫色，再加氨試液數(shù)滴，即變?yōu)樽攸S色，符合規(guī)定。

TLC鑒別：取冰片5 mg，用75%乙醇溶解至1 mL，即得對(duì)照品溶液。取樣品2 mL，作為供試品溶液。按皮炎靈搽劑處方和工藝制備缺冰片的陰性對(duì)照品溶液。按2015年版《中國(guó)藥典（四部）》TLC法[3]20試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各2 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷 -乙酸乙酯（6∶1，V／V）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴1%香草醛硫酸溶液，于105℃下加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，日光燈下檢視。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無(wú)干擾。詳見(jiàn)圖1。

圖1 薄層色譜圖

2．3 相關(guān)檢查

相對(duì)密度：取樣品適量，按2015年版《中國(guó)藥典(四部)》通則0601相對(duì)密度測(cè)定法[3]73-74測(cè)定，結(jié)果樣品相對(duì)密度為1．113。

pH：取樣品適量，按2015年版《中國(guó)藥典(四部)》通則0631pH值測(cè)定法[3]77-78測(cè)定，結(jié)果樣品的pH為2．7。

最低裝量：取樣品5瓶，按2015年版《中國(guó)藥典(四部)》通則最低裝量檢查法[3]125測(cè)定，結(jié)果樣品最低裝量為（20．08 ± 0．56）mL，符合規(guī)定。

微生物限度：取樣品適量，按2015年版《中國(guó)藥典(四部)》通則方法[3]149-151檢測(cè)。結(jié)果，樣品細(xì)菌數(shù)≤100cfu／mL，霉菌數(shù)≤10 cfu／mL，金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌未檢出，均符合規(guī)定。

2．4 刺激性試驗(yàn)

取樣品適量，涂于手臂內(nèi)側(cè)，24 h后進(jìn)行觀察[4]。結(jié)果未見(jiàn)紅腫、水皰等刺激癥狀。

2．5 含量測(cè)定

2．5．1 色譜條件

色譜柱：Dikma Diamonsil C18柱（150 mm× 4．6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇（A）-2% 乙酸溶液（B），梯度洗脫（0～15 min，30% →60%A）；流速：1．0 mL ／min；檢測(cè)波長(zhǎng)：270 nm；柱溫：35 ℃；進(jìn)樣量：20 μL。

2．5．2 溶液制備

取間苯二酚對(duì)照品約10 mg、水楊酸對(duì)照品約5 mg，精密稱定，置同一5 mL容量瓶中，加入初始流動(dòng)相溶解并定容，制成混合對(duì)照品貯備液。取適量，用初始流動(dòng)相稀釋，制成間苯二酚、水楊酸質(zhì)量濃度分別為0．1 g／L和0．05 g／L的混合對(duì)照品溶液。

精密量取樣品80 μL，置4 mL容量瓶中，用初始流動(dòng)相定容，制成供試品貯備液，精密量取200 μL，置2 mL容量瓶中，用初始流動(dòng)相定容，經(jīng)0．45 μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

按樣品處方和工藝制備缺間苯二酚、水楊酸的陰性樣品，并按供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。

2．5．3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn)：取 2．5．2項(xiàng)下 3種溶液各適量，按2．5．1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果見(jiàn)圖2。陰性對(duì)照無(wú)干擾，表明方法專屬性良好。

圖2 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：分別精密量取2．5．2項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液 0．2，0．4，0．6，0．8，1．0，1．4，1．6，2．0 mL，置 20 mL容量瓶中，加初始流動(dòng)相定容，搖勻，制成系列混合對(duì)照品溶液，各精密量取 20 μL，按 2．5．1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。以待測(cè)成分質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得間苯二酚和水楊酸回歸方程分別為 Y＝16 451 X＋47．856，r＝0．999 5(n＝8)，Y＝690 X＋0．340 5，r＝0．999 3(n＝8)。結(jié)果表明，間苯二酚和水楊酸質(zhì)量濃度線性范圍分別為0．02～0．20 g／L和 0．01～0．1 g ／L。

精密度試驗(yàn)：取2．5．2項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液適量，按2．5．1項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，結(jié)果間苯二酚和水楊酸峰面積的 RSD分別為0．42%和0．56%（n＝6），表明日內(nèi)精密度良好。按2．5．1項(xiàng)下色譜條件連續(xù)3 d進(jìn)樣測(cè)定，每天測(cè)定3次，結(jié)果間苯二酚和水楊酸峰面積的 RSD 分別為 0．45% 和 0．59% （n＝9），表明日間精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取2．5．2項(xiàng)下同一供試品溶液（批號(hào)為 20150617）適量，分別于室溫下放置 0，1，2，4 h 后按2．5．1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果間苯二酚和水楊酸峰面積的 RSD 分別為 0．20% 和 1．01% （n＝4），表明供試品溶液室溫放置4 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：精密稱取樣品（批號(hào)為20150617）適量，依法制備供試品溶液，再按2．5．1項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算含量。結(jié)果，間苯二酚和水楊酸平均含量分別為 31．56 g／L和 30．85 g／L，RSD 分別為 1．42% 和 1．98%（n＝5），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量樣品（批號(hào)為20150611）適量，共 6 份，每份 0．6 mL，分別加入低、中、高質(zhì)量濃度的間苯二酚、水楊酸對(duì)照品，依法制備供試品溶液，再按2．5．1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n＝9)

2．5．4 樣品含量測(cè)定

取3批樣品各適量，依法制備供試品溶液，再按

2．5．1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，平行測(cè)定3次，記錄峰面積并計(jì)算含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果（s，n＝3）

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果（s，n＝3）

注：相對(duì)含量指測(cè)定值與標(biāo)示量的比值。

批號(hào) 間苯二酚 水楊酸20150611 20150617 20150625含量（g／L）30．30 ± 0．01 29．71 ± 0．03 30．10 ± 0．04相對(duì)含量（%）101．00 99．03 100．33含量（g／L）30．44 ± 0．10 31．67 ± 0．63 31．76 ± 0．11相對(duì)含量（%）101．47 105．57 105．85

3 討論

皮炎靈搽劑處方由間苯二酚（30 g）、水楊酸（30 g）、冰片（10 g）、醋酸氟輕松（0．25 g）等藥物組方。其中，水楊酸具有軟化角質(zhì)、止癢消炎的作用；間苯二酚能殺滅細(xì)菌和真菌，同時(shí)也有止癢和溶解角質(zhì)的作用[5]；冰片能消腫止痛且有抗菌作用；醋酸氟輕松可抗炎、止癢、抗過(guò)敏，輔以皮膚助滲劑二甲基亞砜可增強(qiáng)藥效；同時(shí)使用甘油可減少藥物刺激且濕潤(rùn)、保護(hù)皮膚?？紤]間苯二酚在乙醇或水中極易溶解，水楊酸在乙醇中易溶、水中微溶，冰片在乙醇中易溶，醋酸氟輕松在乙醇中微溶、水中不溶，故選擇75%乙醇作為溶劑，一方面保證處方中各藥物能全部溶解，另一方面75%乙醇也是臨床常用的消毒劑。

前期，我院主要采用滴定法測(cè)定間苯二酚和水楊酸的含量，但該方法受人為操作影響因素較大。為改進(jìn)和提升質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，本研究中采用高效液相色譜法測(cè)定間苯二酚和水楊酸的含量。經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，該方法簡(jiǎn)便快捷、靈敏準(zhǔn)確、重復(fù)性好，適用于皮炎靈搽劑的質(zhì)量控制。

測(cè)定間苯二酚和水楊酸含量時(shí)，220，230，254，270，276 nm均可作為檢測(cè)波長(zhǎng)[6-10]。預(yù)試驗(yàn)表明，在220，230，254，276 nm波長(zhǎng)處，色譜圖雜峰較多；而在270 nm波長(zhǎng)處，間苯二酚與水楊酸分離度均較好，色譜圖雜峰較少，且對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。因此，確定檢測(cè)波長(zhǎng)為270 nm。

本研究中參考文獻(xiàn)[11-14]，考察了流動(dòng)相為甲醇-磷酸二氫鉀溶液（0．1 mL NaOH 調(diào) pH 至 6．14）（35 ∶65、40 ∶60、20 ∶80，V／V），甲醇 -0．05%磷酸溶液（20 ∶80、30 ∶70、50 ∶50，V／V），甲醇 -2%乙酸溶液（25 ∶75、20∶80、35 ∶65、30 ∶70，V／V）時(shí)等度和梯度洗脫對(duì)色譜行為的影響，結(jié)果表明，流動(dòng)相為甲醇-2%乙酸溶液、梯度洗脫時(shí)間為15 min時(shí)，各色譜峰分離良好，無(wú)拖尾。