金石利咽口崩片的制備及藥效學(xué)研究△

張欣榮，邱仁杰，李越，許蕊蕊，齊梵琨，王秀麗*

(1.河北省中醫(yī)院，河北 石家莊 050011；2.北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 102488；3.南方醫(yī)科大學(xué)，廣東 佛山 528300)

金石利咽顆粒是河北省中醫(yī)院院內(nèi)制劑，臨床上主要用于治療慢性咽炎，每年成功病例近兩百例。其功能為宣透肺胃、清咽利膈、解毒散結(jié)、生津潤(rùn)燥，用于肺胃蘊(yùn)熱、熱毒內(nèi)結(jié)、津液損傷所致的咽喉干燥、腫痛、梗塞感、聲音嘶啞等，慢性咽喉炎、扁桃體炎見(jiàn)以上述證候者。方中生石膏、金銀花、孩兒茶均入肺胃二經(jīng)，清泄肺胃、宣肺利膈、透邪外出、生津利咽，為主藥；板藍(lán)根、玄參、天花粉、珍珠母、冰片利咽消腫，滋陰潤(rùn)燥，解毒散結(jié)，為輔藥；白芷、威靈仙、赤芍、蟬蛻、烏梅活血涼血，生津止渴，開(kāi)淤散結(jié)，另外，白芷、威靈仙辛溫，可消除寒熱相拒，起到反佐之功能；甘草緩和藥性，調(diào)和諸藥，為使藥。

但顆粒劑沖服體積較大，且患者大都咽喉腫痛，吞咽不便，這不利于金石利咽顆粒的臨床應(yīng)用推廣。口崩片[1]是近年新出現(xiàn)的一種新型速釋制劑，是指在口腔內(nèi)能夠迅速崩解或溶解的片劑。目前國(guó)外應(yīng)用較多，但國(guó)內(nèi)，尤其是中藥領(lǐng)域尚處于起步階段?？诒榔诳谇恢袩o(wú)需用水也無(wú)需咀嚼，遇唾液迅速崩解即能形成混懸液或溶液，有助于藥物通過(guò)黏膜吸收，經(jīng)頸內(nèi)靜脈向全身分布起效，尤其適合老年人、兒童、吞咽有困難的患者或外出缺水條件下服用[2]?？诒榔哂蟹梅奖恪⑦m合吞咽困難人群、起效快、生物利用度高等[3]特點(diǎn)。因此其對(duì)于急性病癥亦有天然優(yōu)勢(shì)，將金石利咽顆粒制成口崩片，也有利于金石利咽方劑在急性咽炎方面的應(yīng)用推廣。

鑒于此，本文將金石利咽顆粒經(jīng)過(guò)劑型改變，制備得到口崩片，以克服現(xiàn)有困難，從而使金石利咽復(fù)方更好地發(fā)揮臨床藥效。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

ZP10旋轉(zhuǎn)式壓片機(jī)(上海信源制藥機(jī)械有限公司)；FA1204B分析天平(上海精密儀器儀表有限公司)；FT-104B休止角測(cè)定儀(寧波海曙瑞柯儀器有限公司)；YD-1片劑硬度測(cè)試儀(天津市國(guó)銘醫(yī)藥設(shè)備有限公司)；101-1AB電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海一恒科學(xué)儀器有限公司)；喉頭噴霧器(山東歐諾醫(yī)療器械有限公司)；ZB-ID智能崩解儀(天津市精拓儀器科技有限公司)；CS-1片劑脆碎度測(cè)試儀(天津市國(guó)銘醫(yī)藥設(shè)備有限公司)；G16 型醫(yī)用高速離心機(jī)(白洋離心機(jī)廠)；電熱恒溫水浴鍋(林茂科技有限公司)；TU-1810紫外-可見(jiàn)分光光度儀(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)；Waters UPLC，包括二元溶劑管理系統(tǒng)、在線脫氣機(jī)、自動(dòng)進(jìn)樣器、二極管陣列檢測(cè)器。

1.2 試藥

羧甲基淀粉鈉(DST，上海昌為醫(yī)藥輔料技術(shù)有限公司，批號(hào)：SSGCO2291)；交聯(lián)聚維酮XL(PVPP-XL，安徽山河藥用輔料股份有限公司，批號(hào)：141006)；微晶纖維素(上海昌為醫(yī)藥輔料技術(shù)有限公司，批號(hào)：P0101F1510)；甘露醇、山梨醇(天津市福晨化學(xué)試劑廠，批號(hào)分別為20150912、20150912)；綠原酸(成都普菲德生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：131201，純度≥98%)。

金石利咽顆粒劑河北省中醫(yī)院藥劑科自制(批號(hào)分別為20160406、20160922、20161225，規(guī)格：16 g×9袋/盒)；草珊瑚含片(批號(hào)：20170412，江西江中制藥廠)；Wistar大鼠60只[雌雄各半，體重(200±20)g，斯貝福(北京)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技有限公司]；氨水(批號(hào)：161220，北京博奧拓達(dá)科技有限公司)；甲醇(分析純，北京化工廠)；肝素鈉(Heparin sodium，Sigma)；氫氧化鉀(北京化工廠，批號(hào)：20130723)；0.9%氯化鈉溶液；乙腈(色譜純，F(xiàn)isher Scientific)；甲酸(HPLC級(jí)，上海安譜實(shí)驗(yàn)科技有限責(zé)任公司)；復(fù)方干浸膏粉藥材來(lái)源于北京同仁堂，由北京中醫(yī)藥大學(xué)王晶娟副教授鑒定確認(rèn)，由8倍水提取1.5 h，提取兩次，真空干燥粉碎過(guò)100目篩。

2 方法

2.1 口崩片性質(zhì)測(cè)定

2.1.1 硬度測(cè)定 按照《中華人民共和國(guó)藥典》2015版相關(guān)要求進(jìn)行檢測(cè)。

2.1.2 崩解度測(cè)定 參考相關(guān)文獻(xiàn)方法[4-5]，將滴定管中裝滿(mǎn)37 ℃水至0刻度，控制好水滴體積流量(以2 mL·min-1為宜)，水滴距片劑垂直距離不大于2 cm。將片劑置于10目篩網(wǎng)上，使滴定管中的水恰能滴到片劑上，開(kāi)始計(jì)時(shí)，當(dāng)片劑崩裂并從篩網(wǎng)中全部漏下這段時(shí)間記為崩解時(shí)間，求取6片平均值。

2.1.3 脆碎度測(cè)定 按照《中華人民共和國(guó)藥典》2015版0923相關(guān)要求進(jìn)行檢測(cè)。

2.1.4 口感判斷 五位味覺(jué)正常的志愿者雙盲嘗味，從味道、沙礫感、爽口度等方面對(duì)口感好壞進(jìn)行評(píng)分[5]。味道、沙礫感、爽口度從好到壞各分為五個(gè)級(jí)別(5到1分)，3個(gè)分?jǐn)?shù)相加得到最終結(jié)果，分?jǐn)?shù)越高口感越好。

2.1.5 休止角測(cè)定 將粉末或顆粒從休止角測(cè)定儀漏斗上方慢慢加入，從漏斗底部漏出的物料在水平面上形成圓錐狀堆積體，測(cè)定其傾斜角即為休止角。

2.2 口崩片制備工藝的優(yōu)化

以片劑外觀、硬度、脆碎度、崩解度和口感作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，篩選口崩片處方工藝。

2.2.1 制片工藝的選擇 濕法制粒壓片法：精確稱(chēng)取20片處方量的復(fù)方干浸膏粉5.6 g，與適量輔料，過(guò)20目篩后以等量遞加法混勻，加95%乙醇溶液為黏合劑，過(guò)20目篩制粒，60 ℃烘干1 h，過(guò)16目篩整粒，再與適量微粉硅膠及硬脂酸鎂混勻，壓片。

粉末直接壓片法：精確稱(chēng)取20片處方量的復(fù)方干浸膏粉5.6 g，與適量輔料直接混勻，壓片。

2.2.2 輔料篩選

2.2.2.1 崩解劑的選擇 固定原料藥添加量0.56 g/片、片重1.4 g、片劑硬度5 kg，潤(rùn)滑劑為0.5%滑石粉和0.5%硬脂酸鎂，助流劑為5%微粉硅膠，填充劑為甘露醇，考察崩解劑PVPP-XL或DST或兩者混合物對(duì)崩解時(shí)間的影響。

2.2.2.2 潤(rùn)滑劑和助流劑的選擇 固定原料藥添加量0.56 g/片、片重1.4 g、片劑硬度5 kg，崩解劑為45%的DST，填充劑為甘露醇，考察滑石粉、硬脂酸鎂和微粉硅膠對(duì)粉末流動(dòng)性、外觀及崩解時(shí)間的影響。

2.2.2.3 填充劑的選擇 固定原料藥添加量0.56 g/片、片重1.4 g、片劑硬度5 kg，潤(rùn)滑劑為0.5%滑石粉和0.5%硬脂酸鎂，助流劑為5%微粉硅膠，崩解劑為DST，考察填充劑蔗糖粉、甘露醇、山梨醇、NaCl對(duì)粉末流動(dòng)性、崩解時(shí)間、口感的影響。

2.3 含量測(cè)定

2.3.1 供試品溶液的制備 取20片口崩片及20袋顆粒劑，分別精密稱(chēng)重，研碎，混勻，過(guò)四號(hào)篩，取約2.8 g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，密塞，稱(chēng)重，超聲30 min(功率為100 W，頻率為60 kHz)，放冷至室溫，精密稱(chēng)定并用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，過(guò)0.45 μm微孔濾膜，取續(xù)濾液備用，UPLC檢測(cè)。

2.3.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取綠原酸對(duì)照品0.000 66 g，置10 mL量瓶中，以適量50%甲醇溶解，搖勻并定容，制成質(zhì)量濃度為66 μg·mL-1的綠原酸對(duì)照品溶液，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，UPLC檢測(cè)。

2.3.3 色譜條件 色譜柱：Waters Acquity UPLC BEH C18柱(50 mm×2.1 mm，1.7 μm)；流動(dòng)相：乙腈(A)-0.5%甲酸溶液(B)(梯度洗脫：0～2 min，5%～11%A；2～2.5 min，11%～20%A；2.5～3.5 min，20%～100%A；3.5～5.1 min，100%～5%A)；檢測(cè)波長(zhǎng)為327 nm；體積流量為0.4 mL·min-1；柱溫為30 ℃；進(jìn)樣量2 μL；樣品管理器溫度為4 ℃[6-8]。

2.4 藥效學(xué)評(píng)價(jià)

2.4.1 急性咽炎動(dòng)物模型的建立 采用氨水咽部噴霧的方法建立Wistar大鼠的急性咽炎動(dòng)物模型[9]：固定大鼠，壓舌板壓住大鼠舌頭以暴露咽部，將濃度為15%的氨水用喉頭噴霧器向大鼠咽部噴霧，每次噴3撳(約0.6 mL)，每天上下午各噴一次，連續(xù)噴3 d。

2.4.2 實(shí)驗(yàn)方案 將大鼠隨機(jī)分為6組，每組10只，分別為造模組、空白對(duì)照組、造模不給藥組、陽(yáng)性藥物組(草珊瑚含片)、金石利咽顆粒組、金石利咽口崩片組。按臨床用藥以60 kg人為標(biāo)準(zhǔn)，參照體表面積劑量換算法計(jì)算大鼠給藥劑量，陽(yáng)性藥物組(草珊瑚含片)、金石利咽顆粒組和金石利咽口崩片組給藥量均為420 mg·kg-1·d-1，取適量藥物粉末用蒸餾水配成溶液。造模成功后噴霧給藥約0.6 mL，造模不給藥組給予等量0.9%氯化鈉溶液，每天上下午各一次，連續(xù)噴霧給藥4 d[10-13]。

2.4.3 檢測(cè)指標(biāo)

2.4.3.1 動(dòng)物生存狀態(tài)觀察 實(shí)驗(yàn)期間，每日詳細(xì)觀察各組動(dòng)物活動(dòng)狀態(tài)、飲水、口腔分泌物以及呼吸等情況并記錄。

2.4.3.2 血常規(guī)、PGE2造模結(jié)束后第1天，空白組和模型組自眼內(nèi)眥取血1 mL，置于抗凝管中，由河北省中醫(yī)院檢測(cè)血常規(guī)指標(biāo)，用于評(píng)價(jià)模型；造模成功后，其余四組開(kāi)始給藥，給藥結(jié)束后第1天，依上述方式采血，測(cè)定血常規(guī)，用于藥效評(píng)價(jià)。處死各組大鼠，取咽喉黏膜及其下組織，剪碎稱(chēng)重后用0.9%氯化鈉溶液3 mL浸泡1 h后取出；3000 r·min-1離心浸泡液5 min；吸取上清液0.5 mL，加入0.5 mol·L-1氫氧化鉀-甲醇溶液1 mL；再將試管置于50 ℃恒溫水浴中異構(gòu)化20 min；在278 nm出測(cè)其光密度值，PGE2含量以每克炎性組織的吸收光密度值(A值)表示[13]。數(shù)據(jù)結(jié)果通過(guò)SAS8.2進(jìn)行成組資料的獨(dú)立t檢驗(yàn)處理，P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 制片工藝的選擇

結(jié)果表明，兩者平均硬度均符合要求，平均崩解時(shí)間接近，且粉末直壓法較優(yōu)，濕法制粒流動(dòng)性更優(yōu)。綜上，結(jié)合濕法制粒工序復(fù)雜、效率低下、容易形成麻面，最終采用粉末直接壓片工藝。

表1 粉末直接壓片法和濕法制粒壓片法比較

3.2 輔料選擇

3.2.1 崩解劑的選擇 見(jiàn)表2。

表2 不同崩解劑對(duì)崩解時(shí)間的影響

注：“—”代表含量為“0”。

結(jié)果表明，DST崩解效果稍好且價(jià)格低，故選擇DST單用作為崩解劑。

3.2.2 潤(rùn)滑劑和助流劑的選擇 見(jiàn)表3。

表3 不同潤(rùn)滑劑對(duì)崩解時(shí)間和片劑外觀的影響

注：“—”代表含量為“0”。

結(jié)果表明，助流劑為微粉硅膠9%，潤(rùn)滑劑為滑石粉0.5%、硬脂酸鎂0.5%時(shí)效果最優(yōu)。

3.2.3 填充劑的選擇 見(jiàn)表4。

表4 不同填充劑對(duì)崩解時(shí)間和片劑口感的影響

注：“—”代表含量為“0”。

結(jié)果表明，填充劑明顯延長(zhǎng)崩解時(shí)間，而對(duì)口感改善作用不明顯，故最終選擇不添加填充劑。

3.3 正交試驗(yàn)優(yōu)化處方

以崩解劑DST的用量(A)、潤(rùn)滑劑微粉硅膠的用量(B)、硬脂酸鎂的用量(C)、滑石粉的用量(D)為考察因素(見(jiàn)表5)，選用L9(34)表進(jìn)行正交試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表6。

SAS8.2計(jì)算可知，F(xiàn)=14.35，p<0.01。各因素對(duì)片劑影響大小為A>C>B>D，最佳處方條件為A3B2C1D1，即崩解劑羧甲基淀粉55%、潤(rùn)滑劑微粉硅膠9%、硬脂酸鎂0.5%、滑石粉0.5%，則藥粉為35%，載藥量符合要求。

表5 因素和水平 %

表6 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案及結(jié)果

3.4 含量測(cè)定

3.4.1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 綠原酸對(duì)照品、金石利咽口崩片和金石利咽口顆粒供試品色譜見(jiàn)圖1～3。

圖1 綠原酸對(duì)照品UPLC圖

注：1.綠原酸。圖2 金石利咽口崩片供試品UPLC圖

圖3 金石利咽顆粒供試品UPLC圖

3.4.2 線性關(guān)系考察 分別配制綠原酸對(duì)照品溶液0.066 0、0.079 2，0.099 0、0.118 8、0.132 0、0.198 0 g·L-1，注入U(xiǎn)PLC，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，濃度(X)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得綠原酸回歸方程：Y=2.150×107X-1.604×106，相關(guān)系數(shù)r=0.999 5(n=6)。結(jié)果表明，綠原酸在0.066～0.198 g·L-1呈良好的線性關(guān)系。

3.4.3 樣品含量測(cè)定 分別取3批制備的金石利咽口崩片及3批制備的金石利咽顆粒劑，按2.3項(xiàng)下方法制備樣品溶液，按3.4.1項(xiàng)下方法進(jìn)行測(cè)定，每個(gè)樣品皆平行測(cè)定3次，以外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算含量，其平均值和RSD結(jié)果見(jiàn)表7。

表7 樣品中綠原酸含量測(cè)定結(jié)果

3.5 藥效學(xué)評(píng)價(jià)

3.5.1 日常狀態(tài)觀察結(jié)果 造模1 d后，除空白對(duì)照組外，其余組大鼠逐漸出現(xiàn)搔抓口部、呼吸困難伴有“齁齁”聲、口腔分泌物增多、飲水量增多等癥狀，到第3天癥狀明顯，這與《中藥新藥治療急性咽炎的臨床研究指導(dǎo)原則》中本病的診斷標(biāo)準(zhǔn)相近似，這些結(jié)果初步說(shuō)明造模成功。

造模后，造模不給藥組大鼠經(jīng)過(guò)幾天自然恢復(fù)，體征表現(xiàn)沒(méi)有太大的改善；通過(guò)金石利咽顆粒、金石利咽口崩片及草珊瑚含片治療的大鼠呼吸逐漸正常，口腔分泌物減少，咽部組織病變基本糾正。

3.5.2 血常規(guī)及PGE2含量檢測(cè) 大鼠血液中粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞數(shù)目以及咽喉黏膜組織中PGE2含量檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表8。

表8 大鼠血液中細(xì)胞數(shù)目及咽喉黏膜組織中PGE2含量的變化

注：*與空白對(duì)照組比較：t=6.86，P<0.01；**與空白對(duì)照組比較：t=-36.06，P<0.01；***與空白對(duì)照組比較：t=317.38，P<0.01；#與造模不給藥組比較：t=-12.21，P<0.01；##與造模不給藥組比較：t=37.52，P<0.01；###與造模不給藥組比較：t=402.48，P<0.01；△與造模不給藥組比較：t=-9.66，P<0.01；△△與造模不給藥組比較：t=24.85，P<0.01；△△△與造模不給藥組比較：t=410.57，P<0.01；☆與造模不給藥組比較：t=-13.43，P<0.01；☆☆與造模不給藥組比較：t=37.42，P<0.01；☆☆☆與造模不給藥組比較：t=422.35，P<0.01。另金石利咽口崩片組與陽(yáng)性對(duì)照組比較，中性粒細(xì)胞：t=-2.96，P<0.05；淋巴細(xì)胞：t=-1.81，P>0.05；PGE2含量：t=0.06，P>0.05。金石利咽口崩片組與金石利咽顆粒組比較，中性粒細(xì)胞：t=0.78，P>0.05；淋巴細(xì)胞：t=-0.41，P>0.05；PGE2含量：t=2.89，P>0.05。

結(jié)果顯示，造模成功。金石利咽顆粒、金石利咽口崩片和陽(yáng)性對(duì)照藥草珊瑚含片均對(duì)急性咽炎有一定的治療作用。其中金石利咽口崩片與金石利咽顆粒療效相當(dāng)，均比陽(yáng)性藥草珊瑚含片療效稍好。

4 討論

由于大多數(shù)中藥味道較苦，且中成藥片劑中的藥粉或浸膏粉必須達(dá)到一定比例才能保證用藥量，故一般很難做成口崩片，這也是為什么中藥口崩片相關(guān)研究比西藥少很多的原因。本次實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)志愿者的雙盲嘗味實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，金石利咽復(fù)方雖然口感不佳，但尚在可接受范圍內(nèi)，而添加大量矯味劑對(duì)口感改善不大，所以放棄添加矯味劑，轉(zhuǎn)而增加含藥量和崩解劑的量，使得此口崩片含藥量和崩解時(shí)間均達(dá)到要求，這為某些口感不錯(cuò)且沒(méi)有刺激性的中成藥做成口崩片這一新劑型提供了思路。此外，文獻(xiàn)研究可知，片劑制備多采用干法制粒或濕法制粒壓片法[14-15]，而制粒都需要經(jīng)過(guò)干燥操作，會(huì)對(duì)冰片等易揮發(fā)成分造成進(jìn)一步的損失。而口崩片常采用粉末直接壓片法制備[16]，減少了干燥過(guò)程中某些成分的損失，并且相對(duì)顆粒劑而言，操作也不繁瑣。同時(shí)，鑒于目前國(guó)家關(guān)于口崩片這一新劑型的法規(guī)及標(biāo)準(zhǔn)尚不完善，本次實(shí)驗(yàn)前經(jīng)多方查閱文獻(xiàn)，將硬度標(biāo)準(zhǔn)暫定為4～6 kg，將脆碎度標(biāo)準(zhǔn)暫定為減失重量不得超過(guò)5%[17]。經(jīng)本次實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，此暫定標(biāo)準(zhǔn)可行，為《中華人民共和國(guó)藥典》盡快完成口崩片的標(biāo)準(zhǔn)制定提供了一個(gè)實(shí)例。

白細(xì)胞滲出是炎癥反應(yīng)最重要的指征，而PGE2是其中一個(gè)很重要的炎癥介質(zhì)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示，各組經(jīng)造模后日常狀態(tài)出現(xiàn)異常，尤其是口腔分泌物增多；同時(shí)血常規(guī)出現(xiàn)異常，PGE2含量升高，說(shuō)明造模成功。經(jīng)用金石利咽顆粒、金石利咽口崩片或草珊瑚含片治療后日常狀態(tài)漸趨正常，且血常規(guī)和PGE2含量恢復(fù)明顯。結(jié)果表明，金石利咽顆粒、金石利咽口崩片和陽(yáng)性對(duì)照藥草珊瑚含片均對(duì)急性咽炎有一定的治療效果。此外，金石利咽口崩片組與金石利咽顆粒組比較，血常規(guī)和 PGE2含量雖然在數(shù)值稍好，但統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果并沒(méi)有顯著性差異(p>0.05)，表明兩者對(duì)急性咽炎療效良好且接近。同時(shí)，金石利咽口崩片真正服用時(shí)是在口腔1 min內(nèi)崩解，起效速度遠(yuǎn)超金石利咽顆粒，對(duì)于急性咽炎能夠更快地起效，發(fā)揮作用，況且口崩片對(duì)于咽喉腫痛、吞咽不便這類(lèi)的咽炎患者，較之顆粒劑具有天然的優(yōu)勢(shì)，含服過(guò)程中延長(zhǎng)了藥物與咽喉炎癥病灶的接觸時(shí)間，所以將金石利咽顆粒制成口崩片是完全可行且有優(yōu)勢(shì)的。