PIK3CA及GST-π在人骨肉瘤多藥耐藥細(xì)胞株MG-63/ADM中的表達(dá)

丁萬(wàn)軍，曾濤，張煜坤，肖祝雅，郭衛(wèi)春，余鈴，戈偉

武漢大學(xué)人民醫(yī)院1腫瘤科，3骨科，武漢 430060

2武漢大學(xué)人民醫(yī)院東院內(nèi)分泌科，武漢 430075

骨肉瘤是較常見的骨惡性腫瘤之一，發(fā)病部位以股骨遠(yuǎn)端和脛骨近端最多見，發(fā)病年齡10～20歲者占60%[1]。截肢術(shù)曾經(jīng)是骨肉瘤的標(biāo)準(zhǔn)治療術(shù)式，但術(shù)后患者的5年生存率不足20%[2]。隨著腫瘤化療的發(fā)展，化療聯(lián)合保肢手術(shù)是新興的治療骨肉瘤的有效策略，可使患者的5年生存率提高近50%[3]。對(duì)于晚期骨肉瘤患者，化療是其主要的治療手段。然而有部分骨肉瘤患者因多藥耐藥而對(duì)化療不敏感，導(dǎo)致治療失敗，這是影響骨肉瘤患者預(yù)后的主要原因之一[4]。因此近年來(lái)，關(guān)于骨肉瘤化療耐藥的機(jī)制及尋找逆轉(zhuǎn)化療耐藥的新的靶點(diǎn)或藥物，是骨肉瘤相關(guān)研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。

谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶-π（glutathione-S-transferaseπ，GST-π）是細(xì)胞內(nèi)解毒系統(tǒng)的關(guān)鍵組成部分，也是目前已經(jīng)證實(shí)的與多藥耐藥密切相關(guān)的蛋白[5]。磷脂酰肌醇-3-激酶（phosphatidylinositol 3-hydroxy kinase，PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B，PKB，也稱AKT）信號(hào)通路是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)并證實(shí)的在人類多種腫瘤的發(fā)生、生長(zhǎng)及侵襲過(guò)程中具有關(guān)鍵作用的信號(hào)通路，其在多種腫瘤中激活，參與腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)、抵抗凋亡等多個(gè)環(huán)節(jié)。有研究發(fā)現(xiàn)，PI3K/AKT在腫瘤的多藥耐藥中可能也發(fā)揮重要作用[6]。磷脂酰肌醇-3-激酶催化亞單位（phosphatidylinositol-4，5-bisphosphate 3-kinase catalytic subunit alpha，PIK3CA）基因編碼Ⅰ類PI3K的p110催化亞單位。研究報(bào)道，在骨肉瘤中，PIK3CA較正常組織高表達(dá)[7]，但其作用機(jī)制，尤其是其與骨肉瘤化療耐藥的關(guān)系目前仍不明確。

本文采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR）和蛋白質(zhì)印跡法（Western blot）檢測(cè)PIK3CA和GST-π在人骨肉瘤MG-63細(xì)胞及多藥耐藥細(xì)胞株MG-63/多柔比星（doxorubicin，adriamycin，ADM）中的表達(dá)水平，旨在探討骨肉瘤中PIK3CA和GST-π表達(dá)情況與骨肉瘤化療多藥耐藥的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

人骨肉瘤MG-63細(xì)胞株購(gòu)自武漢大學(xué)典型培養(yǎng)物保藏中心；RPMI 1640培養(yǎng)基購(gòu)自美國(guó)Hyclone公司；胎牛血清、DMEM培養(yǎng)基購(gòu)自美國(guó)Gibco公司；四甲基偶氮唑藍(lán)、二甲基亞砜購(gòu)自上海碧云天生物技術(shù)有限公司；雙抗（青霉素、鏈霉素）購(gòu)自美國(guó)Gibco公司；Trizol試劑購(gòu)自美國(guó)Invitrogen公司；ADM購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；細(xì)胞周期檢測(cè)試劑盒購(gòu)自杭州聯(lián)科生物技術(shù)股份有限公司；噻唑藍(lán)（methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide，MTT）檢測(cè)試劑盒購(gòu)自武漢科昊佳生物科技有限公司；蛋白抽提-亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)胞漿和胞核蛋白提取試劑盒購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司，兔抗人β-actin抗體和兔抗人PI3K p110α抗體均購(gòu)自美國(guó)Thermo公司；鼠抗人GST-π單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)Santa公司；聚偏二氟乙烯（polyvinylidene fluoride，PVDF）膜購(gòu)自美國(guó)Millipore公司；細(xì)胞培養(yǎng)瓶及96孔培養(yǎng)板均購(gòu)自美國(guó)Corning公司；細(xì)胞培養(yǎng)箱和自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀均購(gòu)自美國(guó)Thermo公司；IX70倒置熒光顯微鏡購(gòu)自日本Olympus公司；Gel-Doc 2000凝膠成像系統(tǒng)購(gòu)自美國(guó)Bio-Rad公司；垂直電泳槽購(gòu)自北京六一生物科技有限公司；JYECP3000型高壓多用電泳儀購(gòu)自北京君意東方電泳設(shè)備有限公司；UV-1000紫外透射分析儀購(gòu)自上海鄂禾儀器有限公司；Lambda Bio 20紫外-可見分光光度計(jì)購(gòu)自美國(guó)PerkinElmer公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 MG-63細(xì)胞多藥耐藥株的建立 將復(fù)蘇的MG-63細(xì)胞移入5 cm×5 cm的細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，加入含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液，置于5%CO2、37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)、傳代。依據(jù)文獻(xiàn)[8]，先將低濃度的ADM作用于MG-63細(xì)胞，然后ADM的濃度逐步遞增，通過(guò)間歇作用的方法誘導(dǎo)細(xì)胞耐藥。①取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的MG-63細(xì)胞接種至含ADM的DMEM培養(yǎng)液中。②ADM從0.05 mg/L的低濃度開始，作用48 h后即棄去含ADM的培養(yǎng)液，加入新鮮培養(yǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng)。③待MG-63細(xì)胞恢復(fù)正常生長(zhǎng)后行消化傳代，在無(wú)菌操作臺(tái)中打開培養(yǎng)瓶瓶蓋，用一次性無(wú)菌巴氏吸管吸出細(xì)胞懸液，移至10 ml無(wú)菌EP管中，1000 r/min離心5 min。吸取離心后的上清液，加入3 ml新鮮的含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液，輕輕吹打制成單細(xì)胞懸液，吸取1 ml轉(zhuǎn)入新的培養(yǎng)瓶中，加入含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液補(bǔ)足至5 ml。在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞密度及是否分布均勻，置于5%CO2、37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。④采用濃度為0.1 mg/L的ADM處理傳代培養(yǎng)的細(xì)胞48 h。按以上方法，重復(fù)ADM處理、換液培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)過(guò)程，在此過(guò)程中逐步遞增ADM的藥物濃度：0.05、0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 μg/ml。將在2.0 μg/ml ADM中可以穩(wěn)定生長(zhǎng)時(shí)獲得的耐藥細(xì)胞株命名為MG-63/ADM，整個(gè)耐藥誘導(dǎo)歷時(shí)70天。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中每4周重復(fù)檢測(cè)1次MG-63/ADM細(xì)胞的耐藥性。

1.2.2 MTT法檢測(cè)MG-63/ADM細(xì)胞的耐藥性培養(yǎng)MG-63、MG-63/ADM細(xì)胞至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。用0.25%胰蛋白酶消化后離心收集制成單細(xì)胞懸液，兩種細(xì)胞均以1×104/孔接種于96孔板。置于DMEM培養(yǎng)液中培養(yǎng)24 h后分組。處理組：加入含2 μg/ml ADM的DMEM培養(yǎng)液；陰性對(duì)照組：加入不含藥物的DMEM培養(yǎng)液；空白對(duì)照組：無(wú)細(xì)胞，只加DMEM培養(yǎng)液。每組設(shè)6個(gè)復(fù)孔。將各組細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)，取培養(yǎng)24、48、72 h的細(xì)胞進(jìn)行MTT檢測(cè)。按照MTT檢測(cè)試劑盒中的操作步驟，每孔加入100 μl的MTT溶液，繼續(xù)培養(yǎng)4 h后去除上清（不能移走結(jié)晶），每孔加入150 μl的二甲基亞砜，搖床低速振蕩10 min溶解結(jié)晶，全自動(dòng)酶標(biāo)儀測(cè)定490 nm處的吸光度（optical density，OD）值。

細(xì)胞抑制率（inhibition rate，IR）=[1-（處理組OD值-空白對(duì)照組OD值）（/陰性對(duì)照組OD值-空白對(duì)照組OD值）]×100%。根據(jù)文獻(xiàn)[9]中的方法，計(jì)算MG-63、MG-63/ADM細(xì)胞對(duì)ADM的半數(shù)抑制濃度（half effective inhibition concentrations，IC50），根據(jù) IC50計(jì)算耐藥指數(shù)（resistance index，RI）[10]。RI=MG-63/ADM細(xì)胞IC50/MG-63細(xì)胞IC50。

1.2.3 Western blot檢測(cè)PIK3CA及GST-TT的蛋白表達(dá) 收集培養(yǎng)的MG-63、MG-63/ADM細(xì)胞，按細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核蛋白提取試劑盒說(shuō)明分別提取細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核蛋白。應(yīng)用96孔板按BCA蛋白定量試劑盒說(shuō)明進(jìn)行蛋白定量，每組3個(gè)復(fù)孔，紫外分光光度儀檢測(cè)562 nm處的OD值，計(jì)算蛋白濃度。將蛋白調(diào)整到相同濃度，-70℃凍存?zhèn)溆谩?/p>

每孔加入50 μg蛋白，進(jìn)行十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE），電壓為100 V，電泳2～3 h后轉(zhuǎn)PVDF膜，轉(zhuǎn)膜成功后置于5%脫脂奶粉封閉液中，37℃封閉2 h，PBST洗膜，加入一抗PI3K p110α、GST-π及β-actin（1∶10 000稀釋），4℃過(guò)夜。第2天用磷酸鹽緩沖液（phosphate buffer saline，PBS）洗膜后加通用型二抗（1∶5000稀釋），37℃孵育1 h，洗膜后電化學(xué)發(fā)光法（electrochemiluminescence，ECL）曝光，曝光后的膠片依次顯影、定影，室溫晾干，掃描。采用Imagepro圖像分析軟件分析目的蛋白和β-actin的灰度值。目的蛋白相對(duì)表達(dá)量=目的蛋白灰度值/β-actin灰度值。

1.2.4 RT-PCR檢測(cè)PIK3CAmRNA和GST-πmRNA的表達(dá)水平 應(yīng)用RT-PCR方法檢測(cè)PIK3CAmRNA和GST-πmRNA的表達(dá)水平。選取與檢測(cè)PIK3CA蛋白表達(dá)同樣分組的6孔細(xì)胞，使用Trizol Reagent提取軟骨細(xì)胞總RNA，紫外分光光度儀測(cè)量其濃度，-70℃保存。用Fermentas RTPCR兩步法試劑盒行逆轉(zhuǎn)錄和PCR擴(kuò)增。GST-π上游引物為5'-CCCAAGTTCCAGGACGGAGAC-3'，下游引物為5'-TCAGCAGCAAGTCCAGAGGF-3'，擴(kuò)增片段為325 bp；PIK3CA上游引物為5'-CCTTGTTCAGCTACGCCTTC-3'，下游引物為5'-CATGGTGAACACGTTCTTGG-3'，擴(kuò)增片段為565 bp；βactin上游引物為5'-CCTGACCGAGCGTGGCTACAGC-3'，下游引物為5'-AGCCTCAGGGCATCGGAAC-3'，擴(kuò)增片段為205 bp。擴(kuò)增條件：95℃預(yù)變性7 min；95 ℃變性30 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸55 s，共30個(gè)循環(huán)；72℃5 min終止循環(huán)。將擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行1.5%瓊脂糖凝膠電泳，紫外透射儀下觀察擴(kuò)增產(chǎn)物的特異條帶。采用Band Scan 5.0軟件行條帶分析，測(cè)定條帶的光密度（A）值。以β-actin作為內(nèi)參，目的基因相對(duì)表達(dá)量=目的基因條帶的A值/β-actin條帶的A值。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 18.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MTT法檢測(cè)MG-63/ADM細(xì)胞的耐藥性

MTT檢測(cè)結(jié)果顯示，MG-63/ADM細(xì)胞對(duì)ADM的IC50和RI均明顯高于MG-63細(xì)胞，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。（表1）

表1 MG-63和MG-63/ADM細(xì)胞對(duì)ADM的IC50及R（I±s）

表1 MG-63和MG-63/ADM細(xì)胞對(duì)ADM的IC50及R（I±s）

細(xì)胞類型MG-63細(xì)胞MG-63/ADM細(xì)胞t值P值0.16±0.07 1.97±0.56 7.856 0.000 1.00±0.12 11.35±2.40 10.550 0.000 IC50（μg/ml）RI

2.2 Western blot檢測(cè)PIK3CA和GST-π蛋白的表達(dá)水平

Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示，MG-63/ADM細(xì)胞中PIK3CA和GST-π蛋白的相對(duì)表達(dá)量均明顯高于MG-63細(xì)胞，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。（表2、圖1）

表2 MG-63和MG-63/ADM細(xì)胞中PIK3CA和GST-π蛋白相對(duì)表達(dá)量的比較（±s）

表2 MG-63和MG-63/ADM細(xì)胞中PIK3CA和GST-π蛋白相對(duì)表達(dá)量的比較（±s）

細(xì)胞類型MG-63細(xì)胞MG-63/ADM細(xì)胞t值P值0.23±0.06 0.81±0.07 15.410 0.000 0.26±0.07 0.83±0.09 12.246 0.000 PIK3CA蛋白GST-π蛋白

圖1 Western blot檢測(cè)不同細(xì)胞中PIK3CA和GST-π的表達(dá)情況

2.3 RT-PCR檢測(cè)PIK3CA mRNA和GST-π mRNA的表達(dá)水平

RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，MG-63/ADM細(xì)胞中PIK3CAmRNA和GST-πmRNA的相對(duì)表達(dá)量均明顯高于MG-63細(xì)胞，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。（表3）

表3 MG-63和MG-63/ADM細(xì)胞中PIK3CA mRNA和GST-π mRNA相對(duì)表達(dá)量的比較（±s）

表3 MG-63和MG-63/ADM細(xì)胞中PIK3CA mRNA和GST-π mRNA相對(duì)表達(dá)量的比較（±s）

細(xì)胞類型MG-63細(xì)胞MG-63/ADM細(xì)胞t值P值PIK3CA mRNA 0.19±0.06 0.67±0.07 12.753 0.000 GST-π mRNA 0.22±0.04 0.74±0.06 17.664 0.000

2.4 PIK3CA和GST-π蛋白表達(dá)的相關(guān)性

Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示，MG-63/ADM細(xì)胞中PIK3CA與GST-π蛋白的表達(dá)呈正相關(guān)（r＝0.866，P＜0.01）。

3 討論

骨肉瘤是發(fā)病率最高的原發(fā)骨惡性腫瘤，以往主要的治療手段是采取截肢手術(shù)，然而術(shù)后患者容易復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致預(yù)后極差。近年來(lái)隨著骨肉瘤化療的發(fā)展，患者的總體預(yù)后得到了極大的改善，化療聯(lián)合手術(shù)成為目前的標(biāo)準(zhǔn)治療模式。但部分骨肉瘤患者存在原發(fā)多藥耐藥現(xiàn)象。多藥耐藥性是指對(duì)一種藥物具有耐藥性的同時(shí)，對(duì)其他性質(zhì)不同、作用機(jī)制不同的腫瘤化療藥物也具有耐藥性。多藥耐藥是導(dǎo)致腫瘤化療失敗的重要原因之一，并且已經(jīng)成為影響這部分骨肉瘤患者預(yù)后的重要因素。因此，建立骨肉瘤多藥耐藥細(xì)胞株是體外研究其耐藥機(jī)制的基礎(chǔ)。

已有研究證實(shí)，通過(guò)持續(xù)誘導(dǎo)或大劑量間歇誘導(dǎo)等方法體外建立骨肉瘤多藥耐藥細(xì)胞株是可行的[10]。由于大劑量間歇誘導(dǎo)法更接近臨床化療實(shí)際，因此本研究采用了大劑量間歇誘導(dǎo)法。骨肉瘤化療的主要藥物包括鉑類、蒽環(huán)類和達(dá)卡巴嗪等，其中ADM是骨肉瘤最主要的化療藥物之一[9]。本實(shí)驗(yàn)采取大劑量ADM間歇干預(yù)骨肉瘤MG-63細(xì)胞進(jìn)行體外誘導(dǎo)，歷時(shí)70天成功建立了骨肉瘤ADM耐藥細(xì)胞MG-63/ADM，通過(guò)MTT法檢測(cè)細(xì)胞的耐藥性，結(jié)果證實(shí)MG-63/ADM細(xì)胞對(duì)ADM呈中度耐藥，IC50為（1.97±0.56）μg/ml，RI為（11.35±2.40），說(shuō)明該耐藥株具有耐藥性。

根據(jù)Krishna和Mayer[11]曾作出的分類標(biāo)準(zhǔn)，可將多藥耐藥分為兩類：典型抗藥機(jī)制與非典型抗藥機(jī)制。典型抗藥機(jī)制中多藥耐藥相關(guān)蛋白及P-糖蛋白（P-gp）發(fā)揮主要的抗藥作用，非典型抗藥機(jī)制中谷胱苷肽S-轉(zhuǎn)移酶（glutathione S-transferase，GST）及拓?fù)洚悩?gòu)酶等在多藥耐藥中發(fā)揮主要作用。

GST是同源二聚體酶超基因家族的一種，有θ、μ、α、π等多種同工酶，其N端谷胱甘肽的結(jié)合位點(diǎn)含有酪氨酸殘基，其羥基可以與硫醇化谷胱甘肽形成氫鍵，在催化反應(yīng)中具有重要作用，C端為親電子結(jié)合區(qū)，為底物結(jié)合位點(diǎn)[12]。GST-π催化谷胱甘肽（glutathione，GSH）的巰基，使其與多種體內(nèi)或者體外來(lái)源的親電化合物結(jié)合，結(jié)合后形成極性較大的復(fù)合物，這些復(fù)合物可以被多藥耐藥蛋白和P-gp等泵出體外，從而實(shí)現(xiàn)GST-π的解毒作用。但同時(shí)，大多數(shù)化療藥物也可被GST-π催化與GSH結(jié)合形成GSH-藥物復(fù)合物，同樣易被多藥耐藥蛋白泵出體外，使抗腫瘤藥物在體內(nèi)的作用時(shí)間變短，不能有效發(fā)揮作用，導(dǎo)致臨床上發(fā)生腫瘤細(xì)胞多藥耐藥[13]。通常，GST-π高表達(dá)的腫瘤患者更容易耐藥，因此臨床用藥中，GST-π含量可以作為制定腫瘤化療方案的一個(gè)重要參考，有些易耐藥的化療藥物就不適用于GST-π含量高的患者。GST-π除了通過(guò)直接的細(xì)胞解毒，還可以抑制凋亡的MARK通路，抑制腫瘤細(xì)胞凋亡而導(dǎo)致耐藥[14]。本研究應(yīng)用Western blot及RT-PCR方法檢測(cè)人骨肉瘤MG-63細(xì)胞及耐藥細(xì)胞株MG-63/ADM中GST-π蛋白及GST-πmNRA的表達(dá)水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，MG-63/ADM細(xì)胞中GST-π蛋白和GST-πmNRA的相對(duì)表達(dá)量均明顯高于MG-63細(xì)胞（P＜0.01），提示GST-π的過(guò)表達(dá)可能與骨肉瘤化療耐藥有關(guān)，但GST-π表達(dá)的調(diào)節(jié)機(jī)制仍不明確。

PIK3CA基因定位于染色體3q26.3，長(zhǎng)度為34 kb，包含21個(gè)外顯子。PIK3CA基因編碼Ⅰ類PI3K的p110催化亞單位，即PI3K p110a。PI3K p110a具有類脂激酶和蛋白激酶的雙重活性，促使AKT活化，活化的AKT可以磷酸化多種底物，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化、遷移、凋亡等有關(guān)的信號(hào)通路，因此PI3K/AKT通路在細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮重要作用。約4/5的PIK3CA突變發(fā)生在螺旋區(qū)（exon 9）和激酶區(qū)（exon 20）這兩個(gè)熱點(diǎn)區(qū)域，其突變不僅可以減少細(xì)胞凋亡，還可以促進(jìn)腫瘤浸潤(rùn)，提高下游激酶PI3K的活性，導(dǎo)致PI3K/AKT信號(hào)通路的激活[15]。PI3K/AKT信號(hào)通路是細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖和抗凋亡的重要調(diào)節(jié)因素，近年來(lái)研究表明其與腫瘤耐藥的關(guān)系也十分密切。張棟等[15]研究發(fā)現(xiàn)，卵巢癌順鉑耐藥機(jī)制與PI3K/AKT信號(hào)通路的異常有關(guān)，并且證實(shí)通過(guò)抑制PI3K/AKT信號(hào)通路能增強(qiáng)卵巢癌對(duì)順鉑的敏感性。Wang等[6]研究發(fā)現(xiàn)，PI3K/AKT信號(hào)通路的激活可以使結(jié)腸癌細(xì)胞對(duì)5-氟尿嘧啶的耐藥性明顯增加。O'Gorman等[16]研究發(fā)現(xiàn)，PI3K/AKT信號(hào)通路與HL60細(xì)胞的耐藥有關(guān)，抑制該信號(hào)通路的激活可促進(jìn)多種化療藥物誘導(dǎo)的HL60細(xì)胞凋亡。Gobin等[17]研究發(fā)現(xiàn)，PI3K突變頻率高和（或）其在腫瘤細(xì)胞中的催化功能增加是骨肉瘤增殖轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵機(jī)制。但目前有關(guān)PIK3CA與骨肉瘤耐藥關(guān)系的研究極少，本研究采用Western blot和RT-PCR方法檢測(cè)人骨肉瘤MG-63細(xì)胞及耐藥細(xì)胞株MG-63/ADM中PIK3CA的蛋白和mRNA表達(dá)水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，MG-63/ADM細(xì)胞中PIK3CA的蛋白和mRNA相對(duì)表達(dá)量均明顯高于MG-63細(xì)胞，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。同時(shí)本研究發(fā)現(xiàn)，MG-63/ADM細(xì)胞中PIK3CA與GST-π蛋白的表達(dá)呈正相關(guān)，提示PIK3CA可能通過(guò)調(diào)控GST-π的表達(dá)影響骨肉瘤的化療敏感性。

綜上所述，人骨肉瘤耐藥細(xì)胞株MG-63/ADM中PIK3CA和GST-π的mRNA和蛋白表達(dá)水平均明顯高于人骨肉瘤MG-63細(xì)胞，提示PIK3CA及GST-π可能參與骨肉瘤多藥耐藥過(guò)程。同時(shí)PIK3CA與GST-π蛋白的表達(dá)呈正相關(guān)，提示PIK3CA可能是人骨肉瘤細(xì)胞GST-π介導(dǎo)的多藥耐藥的關(guān)鍵機(jī)制之一。