從一道試題再說血細胞計數(shù)板的使用

徐業(yè)義

（常州市田家炳高級中學 江蘇常州 213000）

1 試題（部分）

（2021蘇錫常鎮(zhèn)高三一模生物試題20）（3）用移液器吸取少量酵母菌培養(yǎng)液，從計數(shù)板的_______（填圖1字母）處沿蓋玻片的下邊緣滴入一小滴。加樣后觀察血細胞計數(shù)板側(cè)面，不正確的是_______（填圖2字母）。

圖1 血細胞計數(shù)板示意圖

圖2 血細胞計數(shù)板側(cè)面示意圖

2 題目分析，問題聚焦

本小題的第一空考查血細胞計數(shù)板使用的培養(yǎng)液添加位置問題。圖1中有4個點可供選擇，但究竟從哪個點（哪些點）滴加才能使培養(yǎng)液滲入到計數(shù)室呢？圖2中供選答案A和B的區(qū)別是：A圖表示吸掉了多余的培養(yǎng)液，內(nèi)側(cè)凹槽內(nèi)不再有培養(yǎng)液。B圖表示沒有吸掉多余培養(yǎng)液，內(nèi)側(cè)凹槽內(nèi)仍有培養(yǎng)液。內(nèi)側(cè)凹槽內(nèi)有培養(yǎng)液對實驗結(jié)果會有影響嗎？下面分別通過實驗來加以說明。

2.1 培養(yǎng)液該從何處滴入才能滲入到計數(shù)室

血細胞計數(shù)板在使用時要“先將蓋玻片放在血細胞計數(shù)板的計數(shù)室上，用吸管吸取培養(yǎng)液，滴于蓋玻片邊緣，讓培養(yǎng)液自行滲入”。d處被蓋玻片覆蓋，不處于蓋玻片的邊緣，培養(yǎng)液無法從d處滴入，其余3處都處于蓋玻片的邊緣，滴入培養(yǎng)液能滲入計數(shù)室嗎？筆者實際操作結(jié)果是：從a、c兩處滴入培養(yǎng)液效果是一樣的，都只能滲入到外側(cè)平臺而無法進入內(nèi)側(cè)凹槽（圖3），當然也就不能到達計數(shù)室。從b處滴入，1滴可滲入本側(cè)計數(shù)室，再滴3滴（平均）可滲入對側(cè)計數(shù)室（利用血細胞計數(shù)板計數(shù)屬于定量實驗，需要多次測量取平均值，所以一般是兩個計數(shù)室都要有培養(yǎng)液滲入）。因此，就試題給定的4個位置來說，只能從b處滴入。除了b處，還有其他滴入位置嗎？嘗試了圖3中的e處，發(fā)現(xiàn)滴入的培養(yǎng)液滴數(shù)與滴入b處的相近，1滴滲入本側(cè)計數(shù)室，再滴2.8滴（平均）滲入對側(cè)計數(shù)室。要使兩側(cè)計數(shù)室都有培養(yǎng)液，除了從b（e）處滴入約4滴，還可采用分別從b（e）、g（f）處各滴入1滴，根據(jù)最終的計數(shù)結(jié)果比較，兩種滴加方法效果是相同的。

圖3 血細胞計數(shù)板部位及名稱標示（血蓋片尺寸22 mm×26 mm）

通過實驗可知，題中第一空只能選擇b，如果還給了e位置，也是要選的。滴加培養(yǎng)液位置的規(guī)律為：在血蓋片上、下邊緣的內(nèi)側(cè)凹槽以內(nèi)（含內(nèi)側(cè)凹槽）任一點滴加培養(yǎng)液都可滲入計數(shù)室，而在血蓋片上、下側(cè)邊緣內(nèi)側(cè)凹槽（不含）以外、側(cè)邊緣滴加培養(yǎng)液則不能滲入計數(shù)室。

2.2 內(nèi)側(cè)凹槽有培養(yǎng)液對計數(shù)結(jié)果有影響嗎

人教版教材要求將“多余培養(yǎng)液用濾紙吸去”。筆者實驗發(fā)現(xiàn)用吸水紙從血蓋片邊緣吸多余培養(yǎng)液，有時內(nèi)側(cè)凹槽內(nèi)培養(yǎng)液會被完全吸掉，有時仍有殘余。只有將吸水紙擰出小尖端伸入到內(nèi)側(cè)凹槽內(nèi)才能保證將多余培養(yǎng)液完全吸掉。內(nèi)側(cè)凹槽內(nèi)殘余的培養(yǎng)液會不會使血蓋片處于一定的漂浮狀態(tài)，造成血蓋片下表面與計數(shù)室底部之間的距離大于0.1 mm而計數(shù)不準呢？筆者進行了測試，結(jié)果見表1。

表1 內(nèi)側(cè)凹槽內(nèi)殘余培養(yǎng)液對計數(shù)結(jié)果的影響

從表1的數(shù)據(jù)可以明顯看出，內(nèi)側(cè)凹槽內(nèi)有培養(yǎng)液時計數(shù)室內(nèi)細胞數(shù)要大于沒有培養(yǎng)液時的，且計數(shù)室內(nèi)細胞數(shù)隨著殘余培養(yǎng)液的增多而增多。在吸去多余培養(yǎng)液時，觀察顯微鏡視野中酵母菌細胞的移動情況，發(fā)現(xiàn)：大部分酵母菌處于計數(shù)室底部不隨多余培養(yǎng)液的吸掉而移動，有少部分酵母菌處于培養(yǎng)液的上層，隨著多余培養(yǎng)液的吸掉而快速移動，直到內(nèi)側(cè)凹槽內(nèi)不再有培養(yǎng)液，酵母細胞的移動才逐漸停止。不管是計數(shù)結(jié)果，還是觀察吸去多余培養(yǎng)液時酵母菌的移動情況，都表明只有將多余培養(yǎng)液完全吸掉（內(nèi)側(cè)凹槽內(nèi)看不到液體）計數(shù)室內(nèi)的酵母細胞數(shù)才不會繼續(xù)減少而達到穩(wěn)定。所以題目第二空必須選圖2的B。

3 實驗拓展：能否用普通蓋玻片代替血蓋片進行計數(shù)

血蓋片是血細胞計數(shù)板的專用蓋玻片，它比普通蓋玻片要大、厚、重，規(guī)格有22 mm×26 mm×0.34 mm（0.45 g）、20 mm×22 mm×0.5 mm（0.5 g）、24 mm×50 mm×0.17 mm（0.47 g）等，第一種最為常見。不少生物實驗室只有普通蓋玻片而沒有血蓋片，普通蓋玻片常用的規(guī)格是18 mm×18 mm×0.13 mm（0.09 g），一個蓋玻片只能勉強同時蓋住兩個計數(shù)室（兩計數(shù)室間的距離約17 mm），且因普通蓋玻片太輕以及水的浸潤現(xiàn)象等原因，從蓋玻片邊緣滴入培養(yǎng)液后常會出現(xiàn)蓋玻片向血細胞計數(shù)板邊緣移動的現(xiàn)象。這樣，重新擺正蓋玻片的位置后再吸掉多余培養(yǎng)液時會造成更多細胞已經(jīng)沉降到計數(shù)室底部，從而造成計數(shù)數(shù)值偏大。筆者通過在普通蓋玻片中央滴加一滴清水來增加蓋玻片的重量而防止滴加培養(yǎng)液時的移動，取得了較好的效果（表2）。

表2 普通蓋玻片是否滴加清水與血蓋片的計數(shù)

從實驗結(jié)果來看，在普通蓋玻片上滴加清水后與血蓋片的計數(shù)結(jié)果并無明顯差異。而如果用普通蓋玻片不滴加清水則計數(shù)結(jié)果明顯要比血蓋片的要大。因此，如果沒有血蓋片必須使用普通蓋玻片時，要盡量保證普通蓋玻片在滴加培養(yǎng)液時不要移動。