路路通的藥理作用研究概述*

封若雨，朱新宇，邢峰麗，葛少欽△

(1. 河北大學(xué)中醫(yī)學(xué)院，河北 保定 071000； 2. 石家莊市中醫(yī)院老年病科，石家莊 050000)

路路通別名九孔子、楓果，為金縷梅科植物楓香樹冬天采集的干燥果序，于2000年收錄入《中國藥典》。其主產(chǎn)于蘇、皖、浙、贛、湘等省,性味苦、平，歸肝腎經(jīng)，具有祛風(fēng)除濕、疏肝活絡(luò)、利水通經(jīng)等功效。路路通主要成分包括樺木酮酸、沒食子酸、路路通酮A及其他萜類、脂肪族、芳香族等[1-2]，具有抗炎消腫、抑制病原微生物、保護神經(jīng)、抗氧化、抗腫瘤等作用，主要用于炎癥、關(guān)節(jié)痛、腦血管病、腫瘤等治療。

1 抗炎消腫鎮(zhèn)痛作用

路路通具有抗炎消腫鎮(zhèn)痛的作用，其發(fā)揮作用的主要成分是樺木酮酸(又名路路通酸)和沒食子酸，主要通過降低毛細(xì)血管通透性，抑制炎性介質(zhì)分泌，參與NF-KB信號通路等途徑發(fā)揮抗炎效應(yīng)。

1.1 樺木酮酸的抗炎研究

劉婷等[3]認(rèn)為，路路路通對急性滲出性炎癥有較好的療效。路路通中的樺木酮酸成分能降低醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性亢進，并減少小鼠的扭體次數(shù)，應(yīng)用10 mg/kg劑量時效果最佳。同時路通水煎劑比樺木酮酸的抗炎作用持久，這可能與路路通的其他抗炎成分有關(guān)，值得深入挖掘。

Vasilevsky等[4]采用Sonogashira反應(yīng)制備了樺木酮酸乙炔衍生物，并將其用于角叉菜膠誘導(dǎo)的水腫小鼠模型，發(fā)現(xiàn)可以明顯減輕小鼠的水腫程度。秦彩玲等[5]進一步證實，路路通水煎劑大中劑量(10 g生藥/kg、5 g生藥/kg)能明顯抑制角叉菜膠引起的小鼠足跖腫脹，還能減輕小鼠因醋酸引起的疼痛感，在特定條件下路路通的劑量與消腫效果呈正相關(guān)?？紤]其作用機制與毛細(xì)血管通透性有關(guān)，具體作用途徑還需進一步的分析研究。

1.2 沒食子酸的抗炎研究

路路通中的沒食子酸能減輕炎性細(xì)胞的浸潤，改善氣道高反應(yīng)性，下調(diào)MyD88/NF-KB信號通路，抑制IL-33介導(dǎo)的ILC2激活和刺激Th2細(xì)胞因子釋放，從而減輕卵白蛋白誘導(dǎo)所致小鼠的哮喘癥狀[6]。另外，沒食子酸衍生物不僅能抑制肺成纖維細(xì)胞的增殖，還可轉(zhuǎn)化生長因子β1/Smad2信號通路和平衡NOX4/Nrf2，一定程度抑制炎癥因子的激活[7]，由此可見沒食子酸可從多途徑減輕肺部炎癥。

2 抑制病原微生物作用

研究表明，路路通中的樺木酮酸及沒食子酸對病毒、細(xì)菌及真菌均有一定的抑制效果，而且路路通揮發(fā)油中抑菌成分屬于天然植物抗菌劑，具有高效、無毒或低毒、不易產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)點。

2.1 樺木酮酸及其衍生物的抑制微生物研究

路路通的樺木酮酸成分及其3-肟的甜樺酸酰胺能有效抑制甲型流感病毒生長，樺木酮酸3-肟與L-蛋氨酸的結(jié)合物對HIV-1也有一定活性，樺酸十八烷基酰胺還可干預(yù)1型單純皰疹病毒的生長[8]。樺木酮酸及其衍生物干預(yù)病毒生長，考慮與影響病毒細(xì)胞膜有關(guān)，這為臨床治療病毒型性流感提供了一條治療途徑。

2.2 路路通中揮發(fā)油的微生物抑制作用

路路通對某些真菌、細(xì)菌也有抑制作用。劉玉民等[9]采用水蒸氣蒸餾法從路路通揮發(fā)油中提煉出β-蒎烯、α-蒎烯并進行抑菌活性實驗，發(fā)現(xiàn)路路通揮發(fā)油對青霉、枯草桿菌、黃曲霉、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌均有一定抑制作用。其中對枯草桿菌的抑制作用最強，對大腸桿菌的抑制作用最弱。尤其是對金黃色葡萄球菌的抑菌效果達到對照品青霉素鈉抑菌圈的一半左右[9]，金黃色葡萄球菌的耐藥十分普遍，路路通的揮發(fā)油等草本植物提取物抗菌作用值得深入研究。

2.3 沒食子酸的微生物抑制作用

許維國等[10]選用沒食子酸干預(yù)金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、腸炎沙門菌、鼠傷寒沙門菌、蠟樣芽孢桿菌、白色念珠菌的生長，結(jié)果發(fā)現(xiàn)沒食子酸對金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、腸炎沙門菌、鼠傷寒沙門菌均有較好的抑制作用，而對蠟樣芽孢桿菌、白色念珠菌影響較小。有人進一步發(fā)現(xiàn)，沒食子酸能顯著抑制白色假絲酵母菌的生物膜形成[11]。還有文獻報道[12]，沒食子酸接枝殼聚糖對假單胞菌、大腸桿菌、不動桿菌、金黃色葡萄球菌、嗜熱芽孢桿菌、沙門氏菌、單核細(xì)胞增生李斯特菌的抑菌性能顯著提高。

同時，1、1-二苯基-2-苦味酰肼(DPPH)自由基清除實驗表明，沒食子酸接枝殼聚糖抗氧化性能也有所提高，此與張雅麗等[13]實驗結(jié)果相符。沒食子酸可使高敏感菌單增李斯特菌中間處凹陷、胞膜出現(xiàn)破損、細(xì)胞質(zhì)泄漏導(dǎo)致細(xì)菌死亡達到抑菌效果。

3 神經(jīng)保護作用

3.1 沒食子酸的神經(jīng)保護作用

路路通中的沒食子酸在治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病方面具有潛在價值，考慮其可能是通過維持鈣穩(wěn)態(tài)及營養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞發(fā)揮神經(jīng)保護作用。國外研究[14]報道，當(dāng)腦外傷、腦出血其他因素導(dǎo)致腦神經(jīng)細(xì)胞外液谷氨酸含量劇增時，會誘發(fā)大腦內(nèi)谷氨酸受體過度刺激，從而引起神經(jīng)興奮性毒性，而路路通能夠減輕腦神經(jīng)毒性。沒食子酸既可通過維持鈣穩(wěn)態(tài)和胰島素樣生長因子的表達，保護神經(jīng)元免受谷氨酸誘導(dǎo)的神經(jīng)元毒性侵?jǐn)_，又可改善皮層神經(jīng)元抗氧化譜，抑制促炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生，這就將谷氨酸神經(jīng)毒性降到最低，達到保護腦神經(jīng)的作用。還有研究發(fā)現(xiàn)[15]，口服沒食子酸不僅可提高4月齡APP/PS1小鼠的空間參考記憶和空間工作記憶能力，還可彌補9月齡小鼠在空間學(xué)習(xí)、參考記憶和短期識別方面存在的缺陷，可見沒食子酸具有一定的營養(yǎng)神經(jīng)作用。與此同時沒食子酸在體外和體內(nèi)均可顯著降低Abeta1-42的聚集體，此項研究彌補了現(xiàn)有治療阿爾茲海默病藥物的不足，為進一步研制阿爾茲海默病藥物提供了理論依據(jù)。此類研究揭示了路路通對腦出血患者的可能保護途徑，但是否可應(yīng)用于腦梗死患者，目前尚無相關(guān)臨床研究。

3.2 路路通注射液的神經(jīng)保護作用

國內(nèi)學(xué)者[16]通過動物模型及臨床影像學(xué)證實，路路通注射液能夠明顯抑制腦水腫的發(fā)生，縮短水腫半暗帶的恢復(fù)時間，對血腫周圍缺血區(qū)的腦組織有保護作用，并可參與腦出血急性期的治療，促進側(cè)枝循環(huán)的建立。裘學(xué)輝[17]采用立體定位技術(shù)建立大鼠實驗性腦出血模型，發(fā)現(xiàn)路路通注射液能夠減輕腦出血后繼發(fā)性腦損害，減輕腦水腫，降低顱內(nèi)壓，加速血腫清除，減輕占位效應(yīng)，改善神經(jīng)功能缺損。

4 抗氧化作用

路路通具有抗氧化作用，其機制可能是沒食子酸通過減少組織細(xì)胞氧化反應(yīng)，或通過提高與自由基的親和力從而清除自由基。

路路通中的沒食子酸對人肝微粒體細(xì)胞色素P450介導(dǎo)的氧化具有抑制作用，對Fenton反應(yīng)產(chǎn)生的羥自由基和黃嘌呤-黃嘌呤氧化酶自由基反應(yīng)產(chǎn)生的超氧陰離子自由基具有較強的清除能力，從而減少組織細(xì)胞反應(yīng)性氧原的堆積，減輕氧化失衡對機體造成的危害[18]。謝曉艷等[19]研究同樣表明，路路通中的沒食子酸質(zhì)量濃度在50～400μg·mL-1的條件下，可明顯清除DPPH羥自由基、一氧化氮以及羥自由基，從而發(fā)揮抑制脂質(zhì)氧化作用，且對自由基清除能力及脂質(zhì)過氧化抑制效應(yīng)均高于維生素C。這提示沒食子酸在一定的濃度下，可提高自由基的親和力，從而清除自由基，發(fā)揮抗氧化作用，其作用機制不除外與人肝微粒體細(xì)胞色素P450有關(guān)。

在動脈粥樣硬化、心力衰竭、高血壓等心血管疾病的發(fā)展過程中，氧化應(yīng)激反應(yīng)起到了加速作用[20]，而路路通的抗氧化作用能否延緩此類疾病的進程值得進一步思考與研究。

5 抗腫瘤作用

路路通中的樺木酮酸是一種五環(huán)路丙烷型三萜類化合物，對各種癌細(xì)胞具有細(xì)胞毒性，并能誘導(dǎo)實體瘤內(nèi)源性凋亡，臨床中可用于癌癥的治療。

5.1 抗肝癌

張秀娟等[21-24]通過實驗研究證實，路路通中的樺木酮酸可抑制肝癌細(xì)胞進展，其機制具體如下。樺木酮酸可把肝癌細(xì)胞阻滯于S期和G2期，隨著樺木酮酸劑量的增加,H22細(xì)胞S期和G2期的含量逐漸增多。樺木酮酸能上調(diào)P53的活性，抑制PI3K和AKT蛋白，從而抑制肝癌細(xì)胞的存活通道。樺木酮酸通過提高Caspase-3, 9的活性，促進肝癌細(xì)胞凋亡。樺木酮酸可使S180腫瘤細(xì)胞體積明顯增大、細(xì)胞淡染，通過引起腫瘤細(xì)胞腫脹誘發(fā)肝癌細(xì)胞凋亡。另外，樺木酮酸咪唑類化合物能顯著改善營養(yǎng)不良的肝細(xì)胞，減輕細(xì)胞溶解性損傷，加快肝實質(zhì)的修復(fù)速度[25]。

5.2 抗前列腺癌

樺木酮酸在體外細(xì)胞培養(yǎng)中具有高度特異性的抗前列腺癌活性。然由于樺樹酮酸為非水溶性物質(zhì)，其體內(nèi)抗癌活性無法得到充分測定。近幾年，親水性Boc-賴氨酸-白樺酸的合成提高了樺木酮酸的生物利用度，也釋放了樺木酮酸抗前列腺癌活性[26]。細(xì)胞毒性試驗中，Boc-賴氨酸化樺木酮酸對LNCaP前列腺癌細(xì)胞有95.7%的抑制作用。體內(nèi)實驗中，其對人前列腺LNCaP異種移植的雄性無胸腺小鼠腫瘤細(xì)胞抑制達92%。

5.3 抗乳腺癌及抗宮頸癌

穆曉婷等[27]發(fā)現(xiàn)，不同濃度的樺木酮酸對乳腺癌MCF-7細(xì)胞、宮頸癌C-33 A細(xì)胞的增殖均表現(xiàn)出一定的抑制作用，且呈濃度時間依賴性。流式結(jié)果顯示，樺木酮酸將乳腺癌MCF-7細(xì)胞阻滯在S期,并誘導(dǎo)其凋亡。樺木酮酸將宮頸癌C-33 A細(xì)胞阻滯在G1-S期，其機制與細(xì)胞周期阻滯和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡有關(guān)。此外，樺木酮酸合成酰胺可抑制小鼠移植性肺癌生長和轉(zhuǎn)移擴散，其中3-[-oxo-20(29)-lupen-28-油氨基]-丙酸抑制原發(fā)腫瘤生長，減少肺轉(zhuǎn)移數(shù)達2倍以上[28]。

樺木酮酸對各個階段的白血病干細(xì)胞(leukemia stem cell，LSC)細(xì)胞群均保持殺傷能力和抑制LSC細(xì)胞集落的形成，BTA通過上調(diào)BAX、抑制Bcl-2和survivin基因而導(dǎo)致線粒體跨膜電位的喪失，從而激活caspase 9，隨后激活下游caspase 3/7，從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。路路通中的樺木酮酸可用于抑制多種癌細(xì)胞的生長及擴散，一方面與其本身結(jié)構(gòu)及化學(xué)衍生物有關(guān)，另一方面與不同癌細(xì)胞不同生理特性密切相連。

6 路路通的其他藥理研究

路路通可以通過調(diào)節(jié)AKT/ERK信號通路，下調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶-1和金屬蛋白酶-3及上調(diào)組織金屬蛋白酶抑制劑-1，從而抑制膠原沉積和血管生成標(biāo)志物表達的目的，達到抑制皮膚纖維細(xì)胞過度增殖、遷移和侵襲[29]。目前臨床中針對瘢痕疙瘩常規(guī)采用壓力、激光、手術(shù)及化學(xué)療法，藥物多使用類固醇制劑，隨著用藥劑量及療程的增加，副作用也隨之增多。路路通的無激素及抑制膠原蛋白沉積的作用，為臨床在治療皮膚病如瘢痕、痤瘡等疾患提供了一個新思路，值得將來據(jù)此進一步探索。

7 展望與總結(jié)

隨著現(xiàn)代技術(shù)的革新，路路通及其衍生物的藥用價值被更多的挖掘出來，其抑制病原微生物、抗炎消腫鎮(zhèn)痛、抗氧化作用已得到證實，其護肝、保護神經(jīng)作用已運用于臨床，其抗癌價值正被深層次開發(fā)。

路路通包含萜類、脂肪族、芳香族等多種的活性藥理成分，現(xiàn)階段研究較多的為萜類。本文中的樺木酮酸及沒食子酸為其核心構(gòu)成。路路通的化學(xué)成分復(fù)雜，有效成分難以區(qū)分，大多數(shù)藥理實驗僅能說明路路通的某些成分在某個環(huán)節(jié)起作用，無法體現(xiàn)中醫(yī)的整體觀念、辨證論治及中藥多層次、多靶點等特點，其相關(guān)機制仍需更多探索。中藥的藥理作用不能等同于已經(jīng)發(fā)現(xiàn)有限的幾個有效成分的藥理作用，如路路通水煎劑比樺木酮酸的抗炎作用持續(xù)時間長，具體的作用成分和作用機制需深入挖掘，而且對路路通量效關(guān)系研究以及劑型開發(fā)也需繼續(xù)跟進。