毛梗豨薟化學(xué)成分的研究

丁林芬， 王海垠， 王德升，2， 謝章巧，2， 聶 偉，2， 宋流東?， 吳興德

（1. 昆明醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院暨云南省天然藥物藥理重點實驗室， 云南 昆明 650500； 2. 中國科學(xué)院昆明植物研究所植物化學(xué)與西部植物資源持續(xù)利用國家重點實驗室， 云南 昆明 650201）

豨薟草為菊科植物豨薟Siegesbeckia orientalis L.、 腺梗豨薟S． pubescens Makino 或毛梗 豨薟S．glabrescens Makino 的干燥地上部分， 別名肥豬草、肥豬菜、 粘蒼子等， 其味辛、 苦， 性寒， 歸肝、 腎經(jīng)， 具有祛風(fēng)濕、 利關(guān)節(jié)、 解毒的作用[1］。 毛梗豨薟作為其重要基源植物， 廣泛分布于浙江、 福建、 安徽、 江西、 湖北、 湖南、 四川、 廣東、 云南等省， 大多生長于路邊、 曠野荒草地、 山坡灌叢中， 海拔300～1 000 m[2］， 具有抗腫瘤、 抗菌、 抗過敏等作用[3-6］， 但其化學(xué)成分研究僅報道少數(shù)黃酮類和萜類[7-8］。 為明確毛梗豨薟藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，本實驗從其95%乙醇提取物中分離鑒定11 個化合物， 其中1～5 為二萜， 6 ～7 為倍半萜， 8 ～9 為黃酮， 10～11 為酚類化合物， 4 ～7、 10 為首次從該植物中分離得到。

1 材料

Avance Ⅲ500 MHz、 AM-400 MHz 核磁共振儀（TMS 為內(nèi)標(biāo)， 德國Bruker 公司）； 1290 UPLC／6540 Q-TOF 液質(zhì)聯(lián)用儀 （美國Agilent 公司）；Auto-Spec Premier P776 三扇型雙聚焦磁質(zhì)譜儀（美國Waters 公司）； 柱色譜硅膠 （100 ～200、200～300 目）、 GF254薄層色譜硅膠板（臨沂市海洋化工廠）。 甲醇、 石油醚、 氯仿、 乙酸乙酯、 丙酮等均為工業(yè)純； 顯色劑為10%H2SO4乙醇溶液。 毛梗豨薟于2015 年10 月購自昆明市菊花園中藥材市場， 經(jīng)中國科學(xué)院昆明植物研究所成曉副研究員鑒定為正品， 標(biāo)本存放在昆明醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院（20151001s）。

2 提取與分離

干燥毛梗豨薟10 kg 粉碎后， 95% 乙醇提?。?0 L×3 次， 每次2 d）， 合并提取液， 減壓濃縮后得浸膏1.3 kg， 分散于水中， 乙酸乙酯萃取3 次（每次3 L）， 回收溶劑后， 得乙酸乙酯部分450 g，經(jīng)硅膠柱層析 （100 ～200 目）， 用石油醚-丙酮（9 ∶1、 8 ∶2、 7 ∶3、 6 ∶4、 1 ∶1） 梯度洗脫，TLC 檢測合并得Fr.1～Fr.7。 Fr.3 （3.5 g） 經(jīng)石油醚-乙酸乙酯（100 ∶1～20 ∶1） 梯度洗脫， TLC 檢測合并得Fr.3.1 ～Fr.3.7， Fr.3.3 （180 mg） 經(jīng)硅膠柱層析及Sephadex LH-20 （氯仿-甲醇， 1 ∶1）得化合物4 （11 mg）、 6 （15 mg）； Fr.4 （80 g） 經(jīng)中壓液相色譜（MCI 柱）， 用甲醇-水（40 ∶60 ～100 ∶0） 梯度洗脫， TLC 檢測合并得Fr.4.1 ～Fr.4.8， Fr.4.2 （190 mg） 經(jīng)硅膠柱層析 （石油醚-乙酸乙酯， 10 ∶1） 及Sephadex LH-20 （氯仿-甲醇， 1 ∶1） 得化合物2 （17 mg）、 7 （9 mg）、 10（12 mg）； Fr.4.5 （315 mg） 經(jīng)硅膠柱層析， 用氯仿-丙酮（200 ∶1）、 石油醚-異丙醇 （100 ∶1 ～20 ∶1） 洗脫， 得化合物3 （6 mg）、 8 （13 mg）、11 （9 mg）； Fr.6 （36 g） 經(jīng)硅膠柱層析， 用石油醚-乙酸乙酯（8.5 ∶1.5 ～6 ∶4） 洗脫， TLC 檢測合并得Fr.6.1 ～Fr.6.3， Fr.6.2 （650 mg） 經(jīng)硅膠柱層析， 用氯仿-丙酮（50 ∶1）、 石油醚-異丙醇（80 ∶1～20 ∶1） 洗脫， 得化合物1 （7 mg）、 5 （11 mg）、 9 （5 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1： 白色粉末， ESI-MS m／z： 361.2[M＋Na］＋。1H-NMR （500 MHz， CDCl3＋CD3OD） δ：3.68 （1H， m， H-2）， 5.04 （1H， s， H-14）， 3.21（1H， dd， J=9.0， 1.9 Hz， H-15）， 3.48 （1H， dd，J=11.0，9.0 Hz，H-16a），3.39 （1H，dd，J=11.0，1.9 Hz， H-16b）， 0.80 （3H， s， H-17）， 0.93 （3H，s， H-18）， 3.61 （2H， ABq， J=11.3 Hz， H-19），0.68 （3H， s， H-20）；13C-NMR （125 MHz， CDCl3＋CD3OD） δ：47.3 （C-1），64.2 （C-2），43.7 （C-3），39.3 （C-4）， 55.0 （C-5）， 21.9 （C-6）， 36.1 （C-7）， 138.4 （C-8），50.8 （C-9），40.3 （C-10），18.4（C-11）， 31.7 （C-12）， 37.1 （C-13）， 128.3 （C-14）， 75.9 （C-15）， 63.1 （C-16）， 22.5 （C-17），27.1 （C-18）， 64.7 （C-19）， 16.6 （C-20）。 數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9］ 一致， 鑒定為奇任醇。

化合物2： 白色粉末， ESI-MS m／z： 345.2[M＋Na］＋， 361.2 [M ＋K］＋。1H-NMR （500 MHz，CDCl3） δ： 3.24 （1H， dd， J=11.2， 4.7 Hz， H-3），5.10 （1H， s， H-14）， 3.58 （1H， d， J=9.1 Hz， H-15）， 3.71 （1H， d， J = 11.2 Hz， H-16a）， 3.51（1H， dd， J=11.2，9.1 Hz， H-16b），0.88 （3H， s，H-17），1.00 （3H，s，H-18），0.81 （3H，s，H-19），0.76 （3H， s， H-20）；13C-NMR （125 MHz， CDCl3）δ：37.1 （C-1），27.6 （C-2），79.1 （C-3），38.9 （C-4）， 54.2 （C-5）， 22.2 （C-6）， 35.9 （C-7）， 139.7（C-8）， 50.4 （C-9）， 38.1 （C-10）， 18.4 （C-11），31.6 （C-12）， 37.3 （C-13）， 127.4 （C-14）， 76.5（C-15）， 63.4 （C-16）， 23.2 （C-17）， 28.5 （C-18）， 14.8 （C-19）， 15.7 （C-20）。 數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10-11］ 一致， 鑒定為豨薟精醇。

化合物3： 白色粉末， ESI-MS m／z： 401.3[M＋Na］＋。1H-NMR （500 MHz， CDCl3） δ： 3.80（1H， m， H-2）， 5.05 （1H， s， H-14）， 3.98 （1H，t， J=7.1 Hz， H-15）， 3.87 （1H， t， J=7.1 Hz， H-16a）， 3.73 （1H， t， J = 7.1 Hz， H-16b）， 0.88（3H， s， H-17）， 1.03 （3H， s， H-18）， 3.68 （1H，d， J=11.4 Hz， H-19a），3.30 （1H， d， J=11.4 Hz，H-19b）， 0.78 （3H， s， H-20）， 1.38 （3H， s， H-22）， 1.32 （3H， s， H-23）；13C-NMR （125 MHz，CDCl3） δ： 47.9 （C-1）， 65.2 （C-2）， 44.1 （C-3），39.7 （C-4）， 55.1 （C-5）， 22.0 （C-6）， 36.2 （C-7）， 138.9 （C-8），50.5 （C-9），40.5 （C-10），18.5（C-11）， 31.9 （C-12）， 35.8 （C-13）， 127.5 （C-14）， 79.8 （C-15）， 65.3 （C-16）， 22.5 （C-17），27.3 （C-18）， 64.6 （C-19）， 17.0 （C-20）， 108.6（C-21）， 26.3 （C-22）， 25.3 （C-23）。 數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12］ 一致， 鑒定為isopropylidenkirenol。

化合物4： 白色粉末， EI-MS m／z： 83 （30），101 （100）， 135 （31）， 261 （61）， 276 （52）， 316（25）， 362 （28） [M］＋。1H-NMR （500 MHz，CDCl3） δ： 3.26 （1H， dd， J=11.7， 4.0 Hz， H-3），5.06 （1H， s， H-14）， 4.02 （1H， t， J=7.2 Hz， H-15）， 3.89 （1H， t， J=7.2 Hz， H-16a）， 3.74 （1H，t， J=7.2 Hz， H-16b）， 0.90 （3H， s， H-17）， 1.01（3H， s， H-18）， 0.81 （3H， s， H-19）， 0.76 （3H，s， H-20）， 1.40 （3H， s， H-22）， 1.34 （3H， s， H-23）；13C-NMR （125 MHz， CDCl3） δ： 37.1 （C-1），27.6 （C-2）， 79.1 （C-3）， 38.2 （C-4）， 54.2 （C-5）， 22.2 （C-6）， 36.0 （C-7）， 139.7 （C-8）， 50.2（C-9）， 39.0 （C-10）， 18.2 （C-11）， 32.1 （C-12），35.9 （C-13）， 126.8 （C-14）， 79.8 （C-15）， 65.4（C-16）， 22.5 （C-17）， 28.5 （C-18）， 15.7 （C-19）， 14.9 （C-20）， 108.6 （C-21）， 26.3 （C-22），25.3 （C-23）。 數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) [13］ 一致， 鑒定為3α， 15， 16-trihydroxy-ent-pimara-8 （14） -en-15，16-acetonide。

化合物5： 白色粉末， ESI-MS m／z： 335.2[M-H］-。1H-NMR （500 MHz， CDCl3＋CD3OD） δ：3.69 （1H， t， J=7.2 Hz， H-17a），3.57 （1H， t， J=7.2 Hz， H-17b）， 1.22 （3H， s， H-18）， 1.14 （3H，s， H-20）；13C-NMR （125 MHz， CDCl3＋CD3OD） δ：40.6 （C-1）， 19.0 （C-2）， 37.9 （C-3）， 43.5 （C-4）， 56.7 （C-5）， 22.1 （C-6）， 41.9 （C-7）， 44.6（C-8）， 55.7 （C-9）， 39.6 （C-10）， 18.5 （C-11），26.1 （C-12）， 45.0 （C-13）， 37.1 （C-14）， 52.6（C-15）， 81.7 （C-16）， 65.9 （C-17）， 29.7 （C-18）， 180.6 （C-19）， 15.4 （C-20）。 數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14］ 一致， 鑒定為16α， 17-dihydroxy-ent-kaura-19-oic acid。

化合物6： 白色粉末， ESI-MS m／z： 285.1[M＋Cl］-。1H-NMR （500 MHz， CDCl3） δ： 3.83（1H， t， J=9.7 Hz， H-4）， 4.23 （1H， m， H-8），6.14 （1H， d， J=3.5 Hz， H-13a）， 5.44 （1H， d，J=3.5 Hz， H-13b）， 0.94 （3H， d， J=6.5 Hz， H-14）， 0.88 （3H， s， H-15）；13C-NMR （125 MHz，CDCl3） δ： 45.2 （C-1）， 25.6 （C-2）， 28.8 （C-3），83.9 （C-4）， 44.6 （C-5）， 38.1 （C-6）， 47.7 （C-7）， 81.7 （C-8），44.4 （C-9），30.3 （C-10），140.9（C-11）， 170.3 （C-12）， 119.6 （C-13）， 20.5 （C-14）， 17.5 （C-15）。 數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) [15-16］ 一致，鑒定為2-desoxy-4-epi-pulchellin。

化合物7： 無色油狀物， ESI-MS m／z： 259.2[M ＋Na］＋。1H-NMR （500 MHz， CDCl3） δ： 5.52（1H， d， J=4.5 Hz， H-6），4.02 （2H， brs， H-11），1.26 （3H， s， H-13）， 0.88 （3H， d， J=6.4 Hz， H-14）， 0.91 （3H， d， J = 6.4 Hz， H-15）；13C-NMR（125 MHz， CDCl3） δ： 58.9 （C-1）， 34.6 （C-2），27.1 （C-3）， 56.1 （C-4）， 51.5 （C-5）， 132.9 （C-6）， 141.7 （C-7），24.9 （C-8），39.9 （C-9），213.7（C-10）， 67.2 （C-11）， 33.1 （C-12）， 24.7 （C-13）， 22.1 （C-14）， 19.9 （C-15）。 數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[17-18］ 一致， 鑒定為aphanamol Ⅰ。

化合物8： 黃 色 粉 末， ESI-MS m／z： 315.1[M-H］-， 631.1 [2M-H］-。1H-NMR （500 MHz，CD3COCD3） δ： 6.23 （1H， d， J=1.6 Hz， H-6），6.46 （1H， d， J=1.6 Hz， H-8）， 7.67 （1H， d， J=1.9 Hz， H-2′）， 6.97 （1H， d， J=8.5 Hz， H-5′），7.56 （1H， dd， J = 8.5， 1.9 Hz， H-6′）， 12.78（1H， s， 5-OH）， 3.84 （3H， s， 3-OCH3）；13C-NMR（125 MHz， CD3COCD3） δ： 156.7 （C-2）， 139.2（C-3）， 179.4 （C-4）， 163.1 （C-5）， 99.3 （C-6），164.9 （C-7）， 94.4 （C-8）， 157.8 （C-9）， 105.7（C-10）， 122.9 （C-1′）， 116.2 （C-2′）， 145.9 （C-3′）， 149.1 （C-4′）， 116.1 （C-5′）， 122.0 （C-6′），60.1 （3-OCH3）。 數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[19］ 一致， 鑒定為3-O-甲基槲皮素。

化合物9： 黃 色 粉 末， ESI-MS m／z： 301.0[M-H］-， 603.1 [2M-H］-。1H-NMR （500 MHz，CD3OD） δ： 6.16 （1H， d， J=1.5 Hz， H-6）， 6.35（1H， s， H-8）， 7.72 （1H， d， J=1.5 Hz， H-2′），6.87 （1H， d， J=8.5 Hz， H-5′）， 7.61 （1H， dd，J= 8.5， 1.5 Hz， H-6′）；13C-NMR （125 MHz，CD3OD） δ： 147.9 （C-2）， 137.2 （C-3）， 177.3 （C-4）， 162.4 （C-5），99.2 （C-6），165.5 （C-7），94.4（C-8）， 158.2 （C-9）， 104.8 （C-10）， 124.1 （C-1′）， 116.2 （C-2′）， 146.2 （C-3′）， 148.7 （C-4′），115.9 （C-5′）， 121.7 （C-6′）。 數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[20］一致， 鑒定為槲皮素。

化合物10： 無色油狀物， ESI-MS m／z： 151.0[M-H］-。1H-NMR （400 MHz， CDCl3） δ：7.40 （1H，d， J=1.6 Hz， H-2）， 7.02 （1H， d， J=8.5 Hz， H-5）， 7.41 （1H， dd， J=8.5， 1.6 Hz， H-6）， 9.81（1H， s， H-7）， 3.94 （3H， s， 3-OCH3）；13C-NMR（100 MHz， CDCl3） δ： 129.7 （C-1）， 108.8 （C-2），147.2 （C-3）， 151.8 （C-4）， 114.4 （C-5）， 127.6（C-6）， 191.0 （C-7）， 56.1 （3-OCH3）。 數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[21］ 一致， 鑒定為香草醛。

化合物11： 無色油狀物， ESI-MS m／z： 163.0[M-H］-。1H-NMR （400 MHz， CD3OD） δ： 7.44（2H， d，J=8.8 Hz，H-2，6），6.79 （2H，d，J=8.8 Hz， H-3， 5）， 7.57 （1H， d， J= 16.0 Hz， H-7），6.29 （1H， d， J = 16.0 Hz， H-8）；13C-NMR （100 MHz， CD3OD） δ：127.4 （C-1），130.9 （C-2，C-6），116.8 （C-3， C-5）， 161.0 （C-4）， 146.0 （C-7），116.5 （C-8）， 171.7 （-COOH）。 數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[22］一致， 鑒定為反式對羥基肉桂酸。

4 討論

本實驗從毛梗豨薟95% 乙醇提取物中分離得到11 個化合物， 包括5 個二萜（1 ～5）、 2 個倍半萜（6 ～7）、 2 個黃酮（8 ～9）、 2 個酚類（10 ～11）， 4～7、 10 為首次從該植物中發(fā)現(xiàn)。 化合物1、5 具有較好的抗炎鎮(zhèn)痛及抗血栓作用[14，23-25］， 6 具有顯著抗炎活性[26］， 8 也具有一定抗炎鎮(zhèn)痛作用[3］， 這些活性成分為毛梗豨薟治療風(fēng)濕痹痛、筋骨無力、 腰膝酸軟、 四肢麻痹、 半身不遂、 風(fēng)疹濕瘡等病癥提供依據(jù)， 并可促進(jìn)其開發(fā)利用。