龍葵酚類成分的研究

劉淑嫻， 宋玉潔， 王偉偉， 鄒少華， 李洪娟， 王春華， 趙 峰?

（1. 濱州醫(yī)學院藥學院， 國家中醫(yī)藥管理局方劑效應(yīng)與臨床評價重點研究室， 山東 煙臺 264003； 2. 煙臺毓璜頂醫(yī)院， 山東 煙臺 264000）

龍葵Solanum nigrum Linne 為茄科茄屬植物，廣泛分布于歐、 亞、 美洲的溫帶至熱帶地區(qū)， 我國各地均有分布， 因地域不同有野海椒、 燈龍草、 天茄菜等多種別稱， 喜生于田邊、 荒地及村莊附近[1］， 其干燥地上部分入藥， 性寒， 味苦、 微甘，有小毒， 歸心、 腎經(jīng)， 具有清熱解毒、 活血消腫、消炎利尿的作用， 臨床用于治療疔瘡癰腫、 小便不利、 腫瘤等癥[2］。 龍葵全草及其果實主要含有以螺甾烷為母核的生物堿及其苷、 螺甾烷醇類甾體及其苷類成分， 其中生物堿具有顯著的抗腫瘤活性，并能抑制惡性黑色素瘤侵襲與轉(zhuǎn)移[3-6］， 而其甾體皂苷具有抗炎活性[7-9］； 近年來發(fā)現(xiàn)龍葵含有的多糖類物質(zhì)亦表現(xiàn)出抗腫瘤活性[10］。 龍葵水提物富含多酚類成分， 能抑制肝脂質(zhì)堆積， 具有降血脂活性[11］， 但該研究僅應(yīng)用色譜法分析多酚類物質(zhì)，未對其進行分離與結(jié)構(gòu)表征。 為進一步探究龍葵中的活性成分， 本實驗對其乙醇提取物進行系統(tǒng)研究， 從中得到11 個化合物， 其中， 化合物1 為新天然化合物， 化合物2 為首次從該植物中分離得到， 化合物5～10 為首次從茄屬植物中分離得到。

1 儀器與試劑

Bruker Avance Ⅲ500 MHz 或600 MHz 核磁共振儀（德國Bruker 公司）； API 3200 型質(zhì)譜儀（美國AB 公司）； CHP20p MCI 樹脂 （日本三菱公司）； 制備及分析型薄層層析板（煙臺江友硅膠發(fā)展有限公司）； Sephadex LH-20 凝膠 （美國GE Pharmacia 公司）； Waters 600 型高效液相色譜儀（美國Waters 公司）； Rp C18柱（10 mm × 250 mm，5 μm， 北京慧德易科技有限責任公司）。 所用試劑均為分析純或色譜純。

龍葵采自山東省煙臺市， 經(jīng)濱州醫(yī)學院藥學院中藥學教研室林鶯副教授鑒定為正品。

2 提取與分離

龍葵的干燥地上部分4 kg 粉碎后， 10 倍量95%乙醇在常溫下超聲提取3 次， 提取液減壓回收溶劑得到浸膏0.5 kg， 分散于1 L 水后， 等體積乙酸乙酯萃取3 次， 減壓回收溶劑后， 得到乙酸乙酯萃取部分100 g。

乙酸乙酯萃取部分用少量甲醇溶解， 經(jīng)MCI 樹脂CHP20p 充分吸附后， 依次用水、 30%、 50%、70%、 90%甲醇、 純甲醇洗脫。 50%甲醇洗脫部位減壓 蒸 干， Sephadex LH-20 柱 （300 g， 3 cm ×40 cm） 分離， 先用石油醚-氯仿-甲醇（5 ∶5 ∶1）洗脫， 薄層色譜檢測， 合并組成相似洗脫液得到5個部分Fr.1～Fr.5， 再用氯仿-甲醇（1 ∶1） 洗脫得到8 個部分Fr.6～Fr.13。 Fr.7 （0.3 g） 用HPLC 半制備色譜分離（乙腈-水43 ∶57）， 得到18 個小部分Fr.7.1 ～Fr.7.18， Fr.7.5 經(jīng)HPLC 半 制 備 柱（乙腈-水31 ∶69） 得化合物10 （2.0 mg）、 11（9.0 mg）， Fr.7.13 經(jīng)HPLC 半制備柱（乙腈-水37 ∶63） 得化合物8 （11.0 mg）、 9 （2.0 mg）。Fr.8 （0.4 g） 經(jīng)HPLC 半制備柱（乙腈-水43 ∶57）得7 個小部分Fr.8.1～Fr.8.7， Fr.8.3 （21 mg） 經(jīng)HPLC 半制備柱（乙腈-水30 ∶70）， 再經(jīng)制備型薄層色譜（氯仿∶甲醇6 ∶1） 得化合物6 （11.0 mg）、 7 （5.0 mg）。 Fr.9 （0.3 g） 經(jīng)HPLC 半制備柱（乙腈-水47 ∶53） 得化合物1 （4.0 mg）、 4（13.0 mg）、 5 （10.0 mg）。 Fr.12 （10 mg） 經(jīng)HPLC 半制備柱 （乙腈-水56 ∶44） 得化合物2（4.0 mg）。 Fr.13 （20 mg） 經(jīng)HPLC 半制備柱（乙腈-水43 ∶57） 得化合物3 （8.0 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1： 白色無定型粉末， ESI-MS m／z：189.2 [M-H］-。1H-NMR （500 MHz， MeOH-d4） δ：7.34 （2H， d， J=8.0 Hz， H-2， 6）， 6.84 （2H， d，J=8.0 Hz， H-3， 5）， 5.36 （1H， dd， J=13.0， 3.0 Hz， H-7）， 2.72 （1H， dd， J= 17.0， 3.0 Hz， H-8a）， 3.13 （1H， dd， J= 17.0， 13.0 Hz， H-8b），5.91 （1H， d， J=2.5 Hz， H-11a）， 5.92 （1H， d，J=2.5 Hz， H-11b）；13C-NMR （125 MHz， MeOHd4） δ： 130.5 （C-1）， 120.6 （C-2， 6）， 116.3 （C-3， 5）， 158.6 （C-4）， 80.6 （C-7）， 44.2 （C-8），131.2 （C-9）， 170.7 （C-10）， 116.5 （C-11）。 以上數(shù)據(jù)與文獻[12］ 基本一致， 故鑒定為4- （4-羥基苯基） -2-亞甲基丁內(nèi)酯。

化合物2： 淡黃色無定型粉末， ESI-MS m／z：301.1 [M-H］-。1H-NMR （500 MHz， DMSO-d6） δ：6.20 （1H， brs， H-6）， 6.41 （1H， brs， H-8）， 7.69（1H， d， J=2.0 Hz， H-2′）， 6.89 （1H， d， J=8.5 Hz， H-5′），7.55 （1H，dd，J=8.5，2.0 Hz，H-6′），12.50 （1H， brs， OH-5）， 9.45 ～11.00 （4H， brs，OH-3， 7， 3′， 4′）；13C-NMR （125 MHz， DMSOd6） δ： 148.7 （C-2）， 136.8 （C-3）， 176.8 （C-4），161.7 （C-5）， 99.1 （C-6），164.8 （C-7），94.4 （C-8）， 157.2 （C-9）， 104.0 （C-10）， 123.0 （C-1′），115.8 （C-2′），146.0 （C-3′），147.8 （C-4′），116.5（C-5′）， 121.0 （C-6′）。 以上數(shù)據(jù)與文獻[13］ 基本一致， 故鑒定為槲皮素。

化合物3： 淡黃色無定型粉末， ESI-MS m／z：285.2 [M-H］-。1H-NMR （500 MHz， DMSO-d6） δ：6.20 （1H， d， J=2.0 Hz， H-6）， 6.45 （1H， d， J=2.0 Hz， H-8）， 8.05 （2H， d， J = 9.0 Hz， H-2′，6′）， 6.93 （2H， d， J = 9.0 Hz， H-3′， 5′）， 9.39（1H， brs， OH-3）， 12.49 （1H， s， OH-5）， 10.10（1H， brs， OH-7）， 10.79 （1H， brs， OH-4′）；13CNMR （125 MHz， DMSO-d6） δ： 146.9 （C-2），136.0 （C-3）， 176.2 （C-4）， 161.0 （C-5）， 98.5（C-6）， 164.4 （C-7）， 93.8 （C-8）， 156.4 （C-9），103.3 （C-10）， 122.0 （C-1′）， 129.7 （C-2′， 6′），115.7 （C-3′， 5′）， 159.4 （C-4′）。 以上數(shù)據(jù)與文獻[14］ 基本一致， 故鑒定為山柰酚。

化合物4： 白色無定型粉末， ESI-MS m／z：137.1 [M-H］-。1H-NMR （500 MHz， MeOH-d4） δ：7.89 （2H， d， J=8.5 Hz， H-2， 6）， 6.83 （2H， d，J=8.5 Hz， H-3， 5）；13C-NMR （125 MHz， MeOHd4） δ： 123.6 （C-1）， 133.5 （C-2， 6）， 116.7 （C-3， 5）， 163.7 （C-4）， 171.1 （-COOH）。 以上數(shù)據(jù)與文獻[15］ 基本一致， 故鑒定為對羥基苯甲酸。

化合物5： 白色無定型粉末， ESI-MS m／z：137.1 [M-H］-。1H-NMR （500 MHz， MeOH-d4） δ：7.19 （1H， dd， J=8.0， 2.0 Hz， H-3）， 7.45 （1H，m， H-4）， 7.22 （1H， ddd， J=8.0， 8.0， 2.0 Hz，H-5）， 8.09 （1H， dd， J=8.0， 2.0 Hz， H-6）；13CNMR （125 MHz， MeOH-d4） δ： 111.8 （C-1），162.6 （C-2）， 118.3 （C-3）， 137.4 （C-4）， 120.1（C-5）， 131.0 （C-6）， 175.3 （COOH）。 以上數(shù)據(jù)與文獻[16］ 基本一致， 故鑒定為鄰羥基苯甲酸。

化合物6： 白色無定型粉末， ESI-MS m／z：163.1 [M-H］-。1H-NMR （500 MHz， MeOH-d4） δ：7.47 （2H， d， J=9.0 Hz， H-2， 6）， 6.82 （2H， d，J=9.0 Hz，H-3， 5），7.62 （1H，d，J=16.0 Hz，H-7）， 6.30 （1H， d， J = 16.0 Hz， H-8）；13C-NMR（125 MHz， MeOH-d4） δ： 127.6 （C-1）， 131.6 （C-2， 6）， 117.3 （C-3， 5）， 161.7 （C-4）， 147.1 （C-7）， 116.3 （C-8）， 171.6 （C-9）。 以上數(shù)據(jù)與文獻[17］ 基本一致， 故鑒定為反式對羥基肉桂酸。

化合物7： 白色無定型粉末， ESI-MS m／z：163.1 [M-H］-。1H-NMR （500 MHz， MeOH-d4） δ：7.61 （2H， d， J=8.5 Hz， H-2， 6）， 6.75 （2H， d，J=8.5 Hz，H-3， 5），6.77 （1H，d，J=13.0 Hz，H-7）， 5.80 （1H， d， J = 13.0 Hz， H-8）；13C-NMR（125 MHz， MeOH-d4） δ： 127.8 （C-1）， 133.2 （C-2， 6）， 115.6 （C-3， 5）， 159.7 （C-4）， 143.9 （C-7）， 117.7 （C-8）， 170.4 （C-9）。 以上數(shù)據(jù)與文獻[18］ 基本一致， 故鑒定為順式對羥基肉桂酸。

化合物8： 白色無定型粉末， ESI-MS m／z：207.2 [M-H］-。1H-NMR （500 MHz， MeOH-d4） δ：7.05 （1H， d， J=2.0 Hz， H-2）， 6.80 （1H， d， J=8.5 Hz， H-5）， 6.95 （1H， dd， J=8.5， 2.0 Hz， H-6）， 7.55 （1H， d， J=16.0 Hz， H-7）， 6.26 （1H，d， J=16.0 Hz， H-8）， 4.22 （2H， q， J=7.0 Hz，-OCH2CH3）， 1.32 （ 3H， t， J = 7.0 Hz，-OCH2CH3）；13C-NMR （125 MHz， MeOH-d4） δ：127.1 （C-1）， 114.5 （C-2）， 146.2 （C-3）， 146.1（C-4）， 115.8 （C-5）， 122.3 （C-6）， 148.9 （C-7），114.5 （C-8）， 168.6 （C-9）， 60.8 （-OCH2CH3），13.9 （-OCH2CH3）。 以上數(shù)據(jù)與文獻[19］ 基本一致， 故鑒定為反式咖啡酸乙酯。

化合物9： 白色無定型粉末， ESI-MS m／z：207.1 [M-H］-。1H-NMR （500 MHz， MeOH-d4） δ：7.35 （1H， d， J=2.0 Hz， H-2）， 6.75 （1H， d， J=8.5 Hz， H-5）， 6.70 （1H， dd， J=8.5， 2.0 Hz， H-6）， 6.80 （1H， d， J=13.0 Hz， H-7）， 5.75 （1H，d， J=13.0 Hz， H-8）， 4.19 （2H， q， J=7.0 Hz，-OCH2CH3），1.28（3H， t， J=7.0 Hz， -OCH2CH3）；13C-NMR （150 MHz， MeOH-d4） δ： 125.7 （C-1），118.6 （C-2）， 147.5 （C-3）， 145.4 （C-4）， 117.2（C-5）， 129.1 （C-6）， 148.5 （C-7）， 119.5 （C-8），168.8 （ C-9）， 60.6 （-OCH2CH3）， 14.8 （-OCH2CH3）。 以上數(shù)據(jù)與文獻[20］ 基本一致， 故鑒定為順式咖啡酸乙酯。

化合物10： 白色無定型粉末， ESI-MS m／z：193.1 [M-H］-。1H-NMR （500 MHz， MeOH-d4） δ：7.66 （1H， d， J=2.0 Hz， H-2）， 6.75 （1H， d， J=8.5 Hz， H-5）， 7.06 （1H， dd， J=8.5， 2.0 Hz， H-6）， 6.67 （1H， d， J=13.0 Hz， H-7）， 5.83 （1H，d， J=13.0 Hz， H-8）， 3.88 （3H， s， -OCH3）；13CNMR （150 MHz， MeOH-d4） δ： 130.0 （C-1），116.6 （C-2）， 151.1 （C-3）， 150.0 （C-4）， 118.9（C-5）， 128.2 （C-6）， 146.1 （C-7）， 117.5 （C-8），172.3 （C-9）， 58.0 （-OCH3）。 以上數(shù)據(jù)與文獻[21］ 基本一致， 故鑒定為順式阿魏酸。

化合物11： 白色無定型粉末， ESI-MS m／z：193.2 [M-H］-。1H-NMR （500 MHz， MeOH-d4） δ：7.19 （1H， d， J=2.0 Hz， H-2）， 6.83 （1H， d， J=8.5 Hz， H-5）， 7.07 （1H， dd， J=8.5， 2.0 Hz， H-6）， 7.59 （1H， d， J=16.0 Hz， H-7）， 6.34 （1H，d， J=16.0 Hz， H-8）， 3.92 （3H， s， -OCH3）；13CNMR （125 MHz， MeOH-d4） δ： 129.3 （C-1），117.9 （C-2）， 151.8 （C-3）， 149.9 （C-4）， 117.6（C-5）， 125.5 （C-6）， 148.4 （C-7）， 113.3 （C-8），172.5 （C-9）， 58.1 （OCH3）。 以上數(shù)據(jù)與文獻[22］ 基本一致， 故鑒定為反式阿魏酸。

4 討論

文獻報道龍葵富含酚酸類成分， 僅有少量文獻報道酚類的提取物及其抗氧化活性， 或?qū)Ψ宇惛患课粦?yīng)用色譜法對比分析， 并測試其抗腫瘤、 降血脂活性， 對其分離和結(jié)構(gòu)研究較少。 本實驗首次從龍葵中分離得到1 個新天然產(chǎn)物， 為苯與α-亞甲基-γ-丁內(nèi)酯偶聯(lián)形成的衍生物， 其中α-亞甲基-γ-丁內(nèi)酯被認為是天名精內(nèi)酯酮發(fā)揮抑菌作用的主要活性官能團， 目前僅有一篇文獻報道它為合成抑菌活性衍生物的中間體[12］。 同時從龍葵乙酸乙酯部位得到多個黃酮和酚酸類成分， 其中3 個為含順式雙鍵的酚酸類成分， 該類成分具有顯著的抑菌、 抗氧化等活性， 為龍葵酚類成分的生物活性評價與藥用研究提供基礎(chǔ)。