食用菌對不同質(zhì)量濃度的那他霉素冰醋酸溶液的耐受性試驗(yàn)

張疏雨 徐 沖

（遼寧省微生物科學(xué)研究院，遼寧朝陽122000）

我國的食用菌產(chǎn)業(yè)是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的一個重要組成部分，但霉菌污染問題依然嚴(yán)重，導(dǎo)致食用菌污染的有木霉、毛霉、根霉、曲霉、鏈孢霉等[1]。這些雜菌爭奪培養(yǎng)料的養(yǎng)分，造成菌種、菌袋污染，成品率下降，嚴(yán)重的甚至絕收[2]。食用菌生產(chǎn)中多使用石灰粉、多菌靈、甲醛等殺菌劑，不能有效根除污染，且加大用量會抑制食用菌菌絲生長，因此尋求對霉菌抑制作用強(qiáng)，對食用菌影響小的防霉制劑是食用菌生產(chǎn)迫切需要解決的問題之一[3]。

那他霉素（Natamycin，NTM）又名匹馬菌素、游霉素，屬多烯大環(huán)內(nèi)酯類物質(zhì)。那他霉素能有效抑制和殺死霉菌、酵母［4］，且與化學(xué)合成抑菌劑相比，不易被人體吸收，無潛在過敏性。大多數(shù)霉菌在質(zhì)量濃度0.5～6 mg/L時就可以被抑制，但有些霉菌需要10～25 mg/L才能被抑制。大多數(shù)酵母菌在1～5 mg/L的質(zhì)量濃度就可以被抑制[5]。1996年，我國《食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》（GB 2760）中明確那他霉素可用作食品防腐劑，使用范圍包括乳酪、肉制品、肉湯、西式火腿、廣式月餅、糕點(diǎn)表面、果汁原漿、易發(fā)霉食品和加工器皿表面等[6]，但作為抑菌劑，那他霉素在食用菌生產(chǎn)中報道甚少。

由于那他霉素對食用菌和霉菌均有抑制作用，因此選擇一個既能有效地控制霉菌生長，又不影響食用菌正常生長的NTM質(zhì)量濃度是十分必要的。筆者以平菇、姬菇、金針菇、靈芝、雞腿菇、杏鮑菇、桑黃、羊肚菌、香菇、白靈菇等17種食用菌為研究對象，以菌絲長速為指標(biāo)，探究食用菌對那他霉素的耐受性及那他霉素對不同食用菌的作用質(zhì)量濃度范圍，為那他霉素在食用菌生產(chǎn)中的利用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試食用菌

供試食用菌有平菇、姬菇、金針菇、靈芝、雞腿菇、杏鮑菇、桑黃、羊肚菌、香菇、天山一號、蛹蟲草、豬苓、松黃菇、猴頭菌、博湖蘑菇、木耳及灰樹花，由西北農(nóng)林科技大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院微生物實(shí)驗(yàn)室及遼寧省微生物科學(xué)研究院提供。試驗(yàn)用那他霉素由鎮(zhèn)江東方生物工程設(shè)備技術(shù)公司提供，有效含量為50%。溶劑為冰醋酸。

1.2 培養(yǎng)基

基礎(chǔ)培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g，葡萄糖10 g，蔗糖10 g，蛋白胨2 g，磷酸二氫鉀1 g，硫酸鎂0.5 g，瓊脂粉12 g，蒸餾水1 000 mL（pH根據(jù)不同食用菌的培養(yǎng)條件而調(diào)節(jié)）。

試驗(yàn)培養(yǎng)基：在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，添加質(zhì)量濃度分別為0、2、4、6、8、10、12 mg/L 的NTM冰醋酸溶液。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 冰醋酸對那他霉素的溶解度曲線建立及母液pH調(diào)節(jié)

配制2%、4%、6%、8%、10%的冰醋酸溶液各100 mL。用分析天平稱量適量那他霉素，分別溶解于不同濃度的冰醋酸溶液中，直至不能溶解為止，找出不同濃度的冰醋酸溶液所能溶解的那他霉素的最大質(zhì)量。為了保持培養(yǎng)基pH適中，把NaOH事先加入基礎(chǔ)培養(yǎng)基，滅菌后，NTM醋酸母液由細(xì)菌過濾器過濾后加入相應(yīng)的試驗(yàn)培養(yǎng)基，得到pH為6.0的試驗(yàn)培養(yǎng)基，見表1。

表1 NaOH調(diào)節(jié)試驗(yàn)培養(yǎng)基的pH

1.3.2 不同食用菌對那他霉素的耐受性

將供試食用菌菌種活化，按照1.3.1制備pH為6.0的平板培養(yǎng)基，接種不同食用菌菌種，于25℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。根據(jù)不同食用菌的生長習(xí)性，每隔一段時間測量菌絲直徑，觀察菌落形態(tài)特征，并以菌絲生長速度為指標(biāo)評價食用菌對不同質(zhì)量濃度那他霉素冰醋酸溶液的耐受性。

1.3.3 數(shù)據(jù)分析

用DPS（Version 7.05）數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 母液濃度選擇

以冰醋酸濃度為橫坐標(biāo)，溶解的那他霉素質(zhì)量為縱坐標(biāo)，繪制曲線如圖1。

圖1 NTM在不同濃度冰醋酸溶液中溶解情況

由圖1可見，溶解NTM的質(zhì)量隨冰醋酸濃度的增加呈上升趨勢，經(jīng)計(jì)算得NTM質(zhì)量（Y1）與冰醋酸濃度（X1）之間的函數(shù)關(guān)系：

對方程（1）進(jìn)行方差分析，可得：F回歸=67.9313＞F0.01（2，3）=30.81652，R2=0.9784，表明該方程達(dá)到極顯著水平，其模型與實(shí)測值擬合較好。結(jié)合食用菌生長條件和試驗(yàn)條件，選用6%的冰醋酸溶解80 mg的NTM作為母液。

2.2 不同質(zhì)量濃度NTM培養(yǎng)基上食用菌菌落生長情況

不同質(zhì)量濃度NTM對食用菌生長（菌落）影響明顯，為節(jié)約篇幅，只給出靈芝和桑黃的菌落生長照片（圖2）。由圖2可見，隨著NTM冰醋酸溶液質(zhì)量濃度上升，靈芝及桑黃菌落直徑均逐漸變小，但菌絲生長狀態(tài)無明顯變化，說明提高NTM冰醋酸溶液的質(zhì)量濃度對食用菌的生長有明顯的抑制作用，但不影響其菌落形態(tài)（菌絲長勢）。

2.3 那他霉素對食用菌菌絲長速的影響

由圖3可見，當(dāng)NTM質(zhì)量濃度在0～2 mg/L時，除雞腿菇，其他食用菌菌絲生長速均較高且變幅不大，NTM質(zhì)量濃度為2～6 mg/L時，灰樹花、博湖蘑菇和桑黃菌絲生長速迅速下降，其他食用菌的菌絲生長速在0.7～1.2 cm/d，NTM質(zhì)量濃度大于8 mg/L時，雞腿菇菌絲生長速最慢，小于0.2 cm/d，羊肚菌菌絲生長速一直保持在較高水平。

3 小結(jié)與討論

冰醋酸能夠較好地溶解NTM，冰醋酸質(zhì)量濃度與溶解的那他霉素的質(zhì)量呈二次函數(shù)關(guān)系。

以食用菌可以承受的NTM最大質(zhì)量濃度的判定標(biāo)準(zhǔn)為菌絲生長速低于0.8 cm/d的NTM質(zhì)量濃度，試驗(yàn)大部分食用菌對那他霉素的耐受力較強(qiáng)，雞腿菇約為0.2 mg/L；姬菇、灰樹花、博湖蘑菇、桑黃約為2 mg/L；平菇、香菇、靈芝和金針菇約為4 mg/L；蛹蟲草、杏鮑菇、羊肚菌、天山一號和木耳約為6 mg/L；豬苓、猴頭和松黃菇約為8 mg/L。

根據(jù)文獻(xiàn)記載，大多數(shù)霉菌能被質(zhì)量濃度為0.5～6 mg/L的那他霉素抑制，依據(jù)殺滅污染菌所需中上質(zhì)量濃度來篩選適用食用菌品種為姬菇、灰樹花、博湖蘑菇、桑黃平菇、香菇、靈芝、金針菇、蛹蟲草、杏鮑菇、羊肚菌、天山一號和木耳，然后針對適用品種給出推薦質(zhì)量濃度為雞腿菇0.5～1 mg/L；姬菇、灰樹花、博湖蘑菇和桑黃為0.5～2 mg/L；平菇、香菇、靈芝和金針菇為0.5～4 mg/L；蛹蟲草、杏鮑菇、羊肚菌、天山一號和木耳為0.5～6 mg/L。極個別的霉菌能被質(zhì)量濃度為10～25 mg/L的那他霉素抑制，結(jié)合試驗(yàn)豬苓、猴頭和松黃菇耐受性較強(qiáng)，適用NTM質(zhì)量濃度為0.5～8 mg/L。

圖2 不同處理靈芝和桑黃菌落形態(tài)

圖3 NTM對食用菌菌絲生長速率的影響

食用菌對那他霉素的耐受性遠(yuǎn)大于霉菌。根據(jù)不同食用菌對那他霉素的耐受性并結(jié)合霉菌的耐受程度，在生產(chǎn)中添加適量的那他霉素，可以實(shí)現(xiàn)既不影響食用菌的生長又可以抑制霉菌污染。