探討影響金銀花組織再生率的因素

許蘭杰，余永亮，譚政委，楊紅旗，董薇，梁慧珍*，蘆海靈，李春明

（河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院芝麻研究中心，河南鄭州 450002）

金銀花（Lonicera japonica Thund.）又名忍冬，是忍冬科忍冬屬多年生常綠藤本植物，是一種珍貴的觀賞樹種和綠化材料，也是臨床常用中草藥，具有清熱解毒、涼散風(fēng)熱之功效。宋代以前只用莖和葉，明代則莖、葉、花同等入藥，但是不同部位其化學(xué)成分不同，功效不同。

1 外植體

1.1 外植體

金銀花不同組織部位均可以作為外植體用于組織培養(yǎng)，主要有帶芽莖段、頂芽、葉片。李利改等[1]以金銀花葉片作為外植體誘導(dǎo)愈傷組織，基礎(chǔ)誘導(dǎo)培養(yǎng)基為B5+IAA 1.0mg/L+6-BA 2.2mg/L+KT 2.0mg/L+LH 2000。劉偉等[2]和任敏[3]以金銀花帶芽莖段為外植體成功誘導(dǎo)出腋芽，二者區(qū)別培養(yǎng)基中激素不同（MS+BA 0.1 and 0.5 mg/L+NAA 0.1mg/L）。趙賢慧[4]和陳明霞等[5]以金銀花的頂芽為外植體，最適培養(yǎng)基均為：MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.1～0.2 mg/L。王文靜等[6]以紅金銀花頂芽、當(dāng)年生幼莖和葉片為外植體，發(fā)現(xiàn)外植體類型對(duì)紅金銀花組織培養(yǎng)的污染率及愈傷組織的誘導(dǎo)率均有影響；頂芽啟動(dòng)愈傷組織時(shí)間短、生長(zhǎng)速度快、成活率最高，為最佳外植體。

1.2 滅菌方法

針對(duì)金銀花種苗的特殊性，不同研究者總結(jié)了一套金銀花外植體滅菌的最佳方法。趙賢慧等對(duì)紅金銀花外植體采用75%的乙醇30s+0.2%升汞5min 處理，可以達(dá)到理想的滅菌效果[7]。任敏采用75%的乙醇45 s+0.15%升汞滅菌8min 可以對(duì)帶腋芽莖段滅菌[3]。文明玲等采用75%乙醇30s+0.1%升汞8min、紫外燈照射30min+75%乙醇30s+0.1%升汞8min、75%堿化乙醇30s+0.1%升汞8min、紫外燈照射30min+75%堿化乙醇30s+0.1%升汞8min、紫外燈照射60min+75%堿化乙醇30s+0.1%升汞8min 等5 種方法處理金銀花外植體，結(jié)果表明紫外燈照射30min+75%堿化乙醇30s+0.1%升汞8min 方法可以顯著降低外植體污染率，并提高萌發(fā)率[8]?？傊?，研究者采用的基本藥品均為75%乙醇和升汞，區(qū)別在于優(yōu)化了75%乙醇處理時(shí)間和升汞濃度。

2 基因型

大量研究表明，基因型對(duì)組織培養(yǎng)和植株再生影響較大。目前已經(jīng)在水稻、玉米、小麥和番茄等作物上開展了相關(guān)研究，而金銀花組織培養(yǎng)針對(duì)于一種金銀花品種的快繁，未研究同一組培條件下不同基因型金銀花的組織再生率差異。于惠敏等[9]研究了11 個(gè)番茄基因型品種的組織培養(yǎng)和植株再生能力，發(fā)現(xiàn)不同基因型的植株再生能力存在著明顯差異。孫建昌等[10]研究了4 個(gè)水稻品種的組織培養(yǎng)特性，表明不同外植體的組織培養(yǎng)特性差異較大。趙賢慧[4]以紅金銀花的頂芽為外植體，經(jīng)過(guò)初代培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)和生根培養(yǎng)獲得了理想的生根苗。任敏[3]以河南封丘金銀花品種帶腋芽莖段為外植體，可以獲得無(wú)菌苗。

3 培養(yǎng)基種類

金銀花用于外植體誘導(dǎo)愈傷組織的基礎(chǔ)培養(yǎng)基有MS 和B5，以MS 應(yīng)用較多，差異主要在于激素的濃度。趙賢慧[4]發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基類型對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)率有一定的影響，但是小于不同濃度NAA 對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)率的影響。過(guò)低或過(guò)高濃度的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑都不利于愈傷組織的生長(zhǎng)。植物組織培養(yǎng)常用的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑有NAA、6-BA、KT。王文靜等[6]發(fā)現(xiàn)對(duì)紅金銀花頂芽誘導(dǎo)率最高的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑組合為 KT 1.5mg/L+6-BA 1.5mg/L+a-NAA 0.5mg/L。王慧俐和江小紅[11]對(duì)灰氈毛忍冬莖段誘導(dǎo)培養(yǎng)，最佳激素為6-BA 1.5mg/L+NAA 0.1mg/L，萌發(fā)率為100%。覃擁靈[12]以宜州當(dāng)?shù)刂饕疸y花品種皺葉忍冬的莖段為外植體，誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.5mg/L+IBA 0.05mg/L。單廣福等[13]發(fā)現(xiàn)花蕾下部為外植體，誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+NAA 2.0mg/L+6-BA 0.01mg/L+2,4-D 0.5mg/L 時(shí)誘導(dǎo)率可達(dá)100%。

4 展望

金銀花外植體主要有葉、莖尖、莖等，依據(jù)不同的誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方，不同外植體的誘導(dǎo)率均達(dá)到100%；對(duì)金銀花愈傷組織誘導(dǎo)率影響較大的因素主要是激素配比。目前，尚未有進(jìn)行不同金銀花基因型對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)率的比較試驗(yàn)。本文為金銀花組織培養(yǎng)工作提供一定的參考。