從側(cè)蒿二氯甲烷部分分離純化活性物質(zhì)

童杰

摘要：蒿屬植物大多數(shù)含有黃酮、生物堿、有機酸和揮發(fā)油，具有很高的藥用價值，多為中醫(yī)藥及民間常用藥材[1]。本文對蒿屬植物中的側(cè)蒿用有機溶劑提取得到浸膏，然后對二氯甲烷萃取部位進行分離、純化，利用柱層析、高效液相等方法制備出單體化合物，最后運用1H NMR、13C NMR等波譜學方法鑒定化合物的結(jié)構(gòu)

關(guān)鍵詞：側(cè)蒿；二氯甲烷部位；分離純化；化學成分

1、前言

蒿屬（Artemisia）植物屬于菊科（Compositae）多為一、二年生或多年生草本植物，少數(shù)為灌木或半灌木，并且大多伴有濃烈的揮發(fā)性氣味[2]。蒿屬植物大多數(shù)含有黃酮、生物堿、有機酸和揮發(fā)油，因而具有很高的藥用價值，多為中醫(yī)藥及民間常用藥材[3]。

1.2蒿屬植物的活性物質(zhì)

蒿屬植物的活性物質(zhì)主要有：黃酮、生物堿、有機酸和揮發(fā)油。黃酮類化合物廣泛存在于天然植物中，為植物體多酚類代謝物，它是藥用植物的主要藥理活性之一[4]；生物堿自然界中廣泛存在的一類含氮堿性有機化合物，大多具有顯著的生物活性，是許多藥用植物的重要有效成分[6]；揮發(fā)油是植物體內(nèi)的次生代謝產(chǎn)物，是由一系列相對分子質(zhì)量較小的化合物組成，大多數(shù)具有芳香性氣味，易揮發(fā)；有機酸是指廣泛存在于植物的根、莖、葉特別是果實中的具有酸性的有機化合物。有機酸具有抑菌、抗菌作用，抑菌效果好，且具有綠色環(huán)保的特點，其應用前景非常廣闊[10]。

本次實驗研究對象為側(cè)蒿，側(cè)蒿，菊科，秦嶺與大巴山地區(qū)特有種[14]。多生長在海拔1000-2300米地區(qū)林下、林緣、山谷，坡地及河邊等[10]。通過運用有機物萃取、柱層析、薄層色譜、高效液相等方法對側(cè)蒿提取物進行分離、提純，直到得到單體化合物，最后運用1H NMR、13C NMR等波譜學方法鑒定化合物的結(jié)構(gòu)

2、實驗部分

2.1材料

甲醇、乙腈、四氫呋喃（HPLC級試劑），上海星可高純?nèi)軇┯邢薰?；甲醇、二氯甲烷、無水乙醇、石油醚、丙酮、乙酸乙酯和濃硫酸（分析純試劑），國藥集團化學試劑有限公司；氘代氯仿（光譜級試劑），美國劍橋同位素實驗室公司；實驗室用水為Milli-Q Integral 5型純水儀生產(chǎn)的超純水；CHP20/P120 MCI樹脂均為日本三菱化學公司產(chǎn)品；

2.2儀器

1260型分析兼半制備型高效液相色譜儀，美國安捷倫公司生產(chǎn)；SunFire C18 5um 4.6*250 mm分析型色譜柱，美國沃特世公司生產(chǎn)；SunFire C18 5um 19*250mm制備型色譜柱，美國沃特世公司生產(chǎn)；Millipore Integral 5純水儀，德國默克密理博公司生產(chǎn)；R-210型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（配Vac V-700無油真空隔膜泵和V-850真空控制器），瑞士布琪公司生產(chǎn)；EL204型電子天平，瑞士梅特勒-托利多公司生產(chǎn)；DLSB-5/25型低溫冷卻液循環(huán)泵，河南鞏義市予華儀器。

2.3實驗方法

2.3.1材料的預處理

將采摘好的側(cè)蒿樣品整株先用剪刀將其剪成3-5cm的小段，分批放入高速多功能粉碎機中粉碎，每次粉碎時間保持在10mim左右。粉碎后稱重得側(cè)蒿粉末5.70kg。

2.3.2萃取分液

用95%乙醇將側(cè)蒿粉末進行滲漉法提取，將側(cè)蒿浸液轉(zhuǎn)移到旋蒸瓶中，水浴溫度控制在40℃左右，旋干稱重得到0.44kg浸膏。按溶劑極性的大小，先后用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取浸膏。萃取完全后得到的提取物質(zhì)量為：石油醚：220g、二氯甲烷33.78g、乙酸乙酯61.22g、正丁醇29.60g、水相：93.17g。

2.3.2MCI柱色譜

取二氯甲烷部分，經(jīng)薄層色譜分析，樣品含較多雜質(zhì)，且樣品為深綠色，含較多色素，故采用CHP20/P120 MCI樹脂進行脫色粗分離。樣品約5g，取CHP20/P120 MCI樹脂7.5mL進行拌樣，200mL填料裝柱，依次用20%、40%、60%、80%、90%、100%甲醇水溶液進行沖洗，得到20%甲醇流份0.5L（標記為A），40%甲醇流份0.5L（標記為B），60%甲醇流份0.5L（標記為C），80%甲醇流份6.3L（標記為D），90%甲醇流份8.2L（標記為E），100%甲醇流份18.6L（標記為F），旋蒸后轉(zhuǎn)移至西林瓶，發(fā)現(xiàn)C有黃色針狀晶體析出。

2.3.3凝膠柱色譜

為了進一步分離樣品，采用凝膠柱色譜的方法進一步分離。凝膠柱色譜是一種按分子量大小，將物質(zhì)分開的方法。中等分子后流出，分子最小的最后流出。

將流速控制在7-12s/滴，用錐形瓶接收溶劑，當樣品離凝膠柱底部20cm左右后，換用西林瓶接收溶劑，每瓶接收量不超過1/3，并標號為“1、2、3……180”，溶劑揮發(fā)后，發(fā)現(xiàn)114-138有晶體析出，晶體為淡黃色。

3.制備單體

經(jīng)MCI柱色譜、凝膠柱色譜以及高效液相色譜儀分離，C中可分離出一個較純的單體，制備單體時采用安捷倫1260型分析兼半制備型高效液相色譜儀，制備條件為：反向柱，柱溫箱溫度為35℃，流速為4.7mL/min，流動相體系為乙腈和超純水，每次進樣量為100uL，乙腈濃度為5%，出峰時間tR=90min，將出峰時間流出的溶劑接收到試管里，將溶劑蒸干，發(fā)現(xiàn)試管中有淺黃色針狀晶體，收集試管中的制備的物質(zhì)，稱重有15.2mg。標記為TJ-1

4.結(jié)構(gòu)鑒定

將制備的TJ-1進行核磁分析，結(jié)果如下：1H-NMR （CD3OD） δ 6.23 （1H， d， J = 9.42 Hz， H-3）， 7.89 （1H， d， J = 9.42 Hz， H-4）， 6.82 （1H， s， H-8）， 7.14 （1H， s， H-5）， 3.91 （3H， s， OCH3）， 8.10 （1H， s， OH）； 13C-NMR （CD3OD） δ 163.00 （CO）， 150.00 （C-9）， 149.00 （C-7）， 146.00（C-6）， 144.91 （C-4）， 111.15 （C-3）， 110.00 （C-10）， 108.63 （C-5）， 102.57 （C-8）， 55.51 （OCH3）；以上數(shù)據(jù)與文獻[11]對照，鑒定化合物為東莨菪素 （Scopoletin），屬于香豆素類化合物。

單體TJ-1結(jié)構(gòu)如下：

參考文獻：

[1]宋敏麗.山西歷山國家自然保護區(qū)蒿屬藥用植物資源的研究[J].農(nóng)產(chǎn)品加工（創(chuàng)新版），2011（10）：45-48.

[2]Yue Y X，Shi B L，Zhang P F，et a1.Recent advance in study on biological action of Artemisia Linn plants in animal produc— tion.Chinese Journal of Animal Science，2015，51（15）：79—82.

[3]陳林，宋乃平，王磊等.基于文獻計量分析的蒿屬植物研究進展[J].草業(yè)學報，2017，（12）：223～235.

[4]譚仁祥.植物成分分析[M].北京科學出版社，2002：486-502.

[5]祝寅淏，王帥，李瑤，陳宗耀，范紅艷.黃酮類化合物藥理作用的研究進展[J].吉林醫(yī)藥學院學報，2018，39（03）：219-223.

[6]徐小龍，鄒建國，劉燕燕，彭海龍，吳琴芬.藥用生物堿的應用與分離純化技術(shù)[J].食品科學，2009，30（15）：238-240.