一例仔豬水腫病的病原分離鑒定及藥敏試驗(yàn)

刁富花

摘要：從大通縣某規(guī)模養(yǎng)豬場(chǎng)患病仔豬分離病原菌，根據(jù)病原菌形態(tài)、培養(yǎng)特性和生化特性，鑒定為大腸桿菌。同時(shí)進(jìn)行藥敏試驗(yàn)表明該菌對(duì)氧氟沙星、丁胺卡那霉素和慶大霉素高度敏感，為臨床用藥提供科學(xué)依據(jù)。

關(guān)鍵詞：仔豬；水腫?。淮竽c桿菌；分離鑒定；藥敏試驗(yàn)

1發(fā)病情況

2017年2月，大通縣某規(guī)模養(yǎng)豬場(chǎng)飼養(yǎng)的斷乳仔豬陸續(xù)發(fā)病。臨床癥狀主要是頭、眼瞼、頸部和腿部水腫，喜臥；個(gè)別病豬晚上食料，次日清晨死于欄舍，發(fā)病急，死亡快。豬場(chǎng)獸醫(yī)人員使用青霉素等治療，效果不明顯，截止化驗(yàn)室就診，發(fā)病豬總共30頭，死亡16頭。對(duì)病死豬剖檢可見胃大彎、賁門部水腫，胃黏膜層與肌肉層間水腫，呈膠凍樣，胃底彌漫性出血；結(jié)腸腸系膜及其淋巴結(jié)水腫；心包、腹腔和胸腔積液。為確定病原菌，對(duì)病死豬進(jìn)行了病原分離鑒定與藥敏試驗(yàn)。

2材料與方法

2.1實(shí)驗(yàn)材料

麥康凱培養(yǎng)基、伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基、肉湯瓊脂培養(yǎng)基、三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基；糖發(fā)酵管、普通肉湯培養(yǎng)基、藥敏紙片；實(shí)驗(yàn)仔豬由大通縣某規(guī)模養(yǎng)豬場(chǎng)提供。

2.2病原菌分離鑒定

2.2.1細(xì)菌分離無菌采集病死仔豬大腸內(nèi)容物、腸系膜淋巴結(jié)、肝臟、脾臟等組織接種在麥康凱培養(yǎng)基，經(jīng)37℃培養(yǎng)24h后，選取可疑菌落分別接種在肉湯瓊脂培養(yǎng)基、伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基上，于37℃培養(yǎng)12-24h，對(duì)菌落形態(tài)進(jìn)行觀察，并且選取培養(yǎng)菌落通過生理鹽水稀釋后涂片，革蘭氏染色、鏡檢。

2.2.2生化鑒定將病原菌接種在三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基、甘露醇、麥芽糖、葡萄糖、蔗糖、水楊苷、V-P、M.R.、乳糖、阿拉伯糖、果糖、木糖以及尿素酶反應(yīng)管，經(jīng)37℃反應(yīng)72h。

2.2.3致病性實(shí)驗(yàn)選取該規(guī)模養(yǎng)豬場(chǎng)斷乳仔豬8頭，設(shè)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，每組4頭。將分離的病原菌的普通肉湯培養(yǎng)物通過超聲波破碎后離心，取上清液以一定劑量靜脈注射給實(shí)驗(yàn)組斷乳仔豬；采用生理鹽水注射對(duì)照組斷乳仔豬，臨床觀察結(jié)果。

2.2.4血清型鑒定在血瓊脂平板上培養(yǎng)分離菌24h后，添加福爾馬林3mL/L，經(jīng)37℃滅活24h，選取適量菌液進(jìn)行無菌檢測(cè)，檢驗(yàn)合格后，按0.3mL/只肌注于小白鼠腿部，10d后采集小白鼠血液并分離血清，同標(biāo)準(zhǔn)大腸桿菌0141K88菌液進(jìn)行平板凝集試驗(yàn)。

2.3藥敏試驗(yàn)

將致病性分離菌通過生理鹽水稀釋后，均勻地涂抹在營(yíng)養(yǎng)肉湯瓊脂平板上，然后將藥敏紙片（氨芐西林、紅霉素、頭孢唑啉、慶大霉素、氧氟沙星、硫酸卡那霉素、丁胺卡那霉素、磺胺甲基異惡唑、頭孢呋辛）平鋪在肉瓊脂培養(yǎng)基上，在37℃生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，觀察并記錄藥敏試驗(yàn)結(jié)果。依據(jù)有無抑菌圈和抑菌圈直徑大小，判定病原菌對(duì)不同試驗(yàn)藥物的敏感程度。

3結(jié)果

3.1培養(yǎng)特性

麥康凱培養(yǎng)基上的菌落通過肉眼觀察可見表面光滑、濕潤(rùn)且圓整，呈粉紅色；伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基上可見圓整、暗黑色菌落；革蘭氏染色鏡檢可見兩端鈍圓、成對(duì)或單個(gè)存在的革蘭氏陰性小桿菌。

3.2生化試驗(yàn)結(jié)果

病原菌在三糖鐵培養(yǎng)基上產(chǎn)酸產(chǎn)氣，不產(chǎn)生H2S；病原菌的生化試驗(yàn)結(jié)果見（表1）。由表1可知，蔗糖、阿拉伯糖、果糖、木糖、乳糖、甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)為陽性，葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，M.R.試驗(yàn)為陽性，水楊苷、尿素酶試驗(yàn)和V-P試驗(yàn)為陰性，同大腸桿菌的生化特性相符合。

3.3致病性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

實(shí)驗(yàn)組的4頭斷乳仔豬全部出現(xiàn)典型水腫病癥狀及病理變化；而對(duì)照組4頭斷乳仔豬沒有異常癥狀。

3.4血清型鑒定結(jié)果

小白鼠血清同標(biāo)準(zhǔn)大腸桿菌0141K88菌液出現(xiàn)凝集。表明該菌血清型為0141。

3.5藥敏試驗(yàn)結(jié)果

藥敏試驗(yàn)結(jié)果見（表2）。病原菌對(duì)氧氟沙星、丁胺卡那霉素和慶大霉素高度敏感；對(duì)頭孢唑啉、頭孢呋辛中度敏感；對(duì)氨芐西林、紅霉素、磺胺甲基異惡唑和硫酸卡那霉素具有耐藥性。

4治療

經(jīng)藥敏試驗(yàn)，選用高度敏感藥物進(jìn)行注射治療，同時(shí)為達(dá)到利尿消腫和保肝解毒的目的，可采用葡萄糖、維生素等進(jìn)行輔助治療；為強(qiáng)化治療效果，還可在飼料中添加中草藥或微生態(tài)制劑。通過上述治療方案，發(fā)病豬于7d后精神和食欲逐步恢復(fù)正常，水腫消失，2周后回訪，未出現(xiàn)新病例，有效控制了豬場(chǎng)疫情。

5小結(jié)與討論

1）豬水腫病是一種急性腸毒血癥，多發(fā)于斷奶仔豬，主要特征是發(fā)病突然，頭部、耳部、頸部等處紅腫，胃壁、腸系膜顯著水腫。本病致死率高達(dá)90%以上，給養(yǎng)殖業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。

2）仔豬水腫病的血清型多樣，具有易變性和地域性，對(duì)豬場(chǎng)定期進(jìn)行病原菌的分離鑒定，旨在有針對(duì)性地使用常見的優(yōu)勢(shì)菌株制成自家滅活疫苗進(jìn)行免疫，效果良好；通過對(duì)大通縣該豬場(chǎng)仔豬水腫病進(jìn)行細(xì)菌學(xué)和血清學(xué)調(diào)查，明確了仔豬水腫病病原的主要血清型（O141）和藥物敏感性，為本地區(qū)仔豬水腫病的防治提供了科學(xué)依據(jù)。