白術(shù)通利膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)優(yōu)化研究

高媛 鞏偉 吳洋

[摘要]目的 對(duì)白術(shù)通利膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行提高和優(yōu)化。方法 鑒別項(xiàng)下，采用薄層色譜法分別對(duì)白術(shù)、川芎、補(bǔ)骨脂、澤瀉和山楂進(jìn)行鑒別；含量測(cè)定項(xiàng)下用高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定白術(shù)中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ的含量的含量，測(cè)定條件為色譜柱采用島津ODS-VP3色譜柱，長(zhǎng)250 mm，內(nèi)徑4.6 mm，粒徑5 μm；以甲醇-水（77∶23）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為276 nm，柱溫35℃。結(jié)果 薄層色譜鑒別斑點(diǎn)顯色清晰，分離度號(hào)，靈敏度高，能有效鑒別出所需要鑒別的成分；含量測(cè)定白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ在4.0～16.0 μg/ml的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.9998，n=7），平均回收率為99.37%，RSD為0.84%（n=9）。結(jié)論 白術(shù)通利膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)經(jīng)提高后可用于其質(zhì)量控制。

[關(guān)鍵詞]白術(shù)通利膠囊；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高；白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ；薄層色譜法；高效液相色譜法

[中圖分類號(hào)] R283 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2018）11（c）-0021-05

[Abstract] Objective To improve and optimize the quality standard of Baizhu Tongli capsules. Mehtods In the identification， Thin layer chromatography （TLC） was used to identify the Atractylodes Macrocephala， Ligusticum Chuanxiong， Psoralen， Alisma Orientalis and Hawthorn respectively. Under the content determination， the content of Atractylenolide Ⅰ in Atractylodes Macrocephala was determined by high performance liquid chromatography （HPLC） method. The conditions were as follows： the chromatographic column used SHIMADZU ODS-VP3 column， 250 mm long， inner diameter of 4.6 mm， and the particle diameter is 5 μm， and the methanol water （77∶23） was used as the method. The mobile phase was detected at 276 nm and the column temperature was 35℃. Results The TLC identification spots had clear color， separation number， high sensitivity， and could effectively identify the components needed to identify. The content determination of Atractylodes Ⅰ in the concentration range of 4.0-16.0 μg/ml was good （r=0.9998， n=7）， the average recovery rate was 99.37% （RSD=0.84%， n=9）. Conclusion The improvement is easy-operated and accurate which has a good specificity for the quality control of Baizhu Tongli Capsules.

[Key words] Baizhu Tongli Capsules； Quality standard improvement； Atractylenolide Ⅰ； Thin layer chromatography； High performance liquid chromatography

白術(shù)通利膠囊是原濟(jì)南軍區(qū)批準(zhǔn)的軍隊(duì)醫(yī)療機(jī)構(gòu)非標(biāo)準(zhǔn)制劑，臨床上主要用于治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎，并能緩解高尿酸血癥癥狀。該制劑臨床應(yīng)用三十多年，療效確切，應(yīng)用效果良好。該制劑的處方由白術(shù)、川芎、補(bǔ)骨脂、澤瀉、山楂、蘇木、蒼術(shù)、丹參等八味藥材組成，白術(shù)具有健脾益氣，燥濕利水之功效[1]，為君藥，川芎、補(bǔ)骨脂、澤瀉、山楂合為臣藥，輔以蘇木、蒼術(shù)、丹參，共奏健脾利濕、通利關(guān)節(jié)之功。但該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)極為簡(jiǎn)單，僅有性狀和鑒別項(xiàng)，且鑒別項(xiàng)均為化學(xué)反應(yīng)，專屬性不強(qiáng)，難以有效控制其生產(chǎn)質(zhì)量，因此有必要對(duì)其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行提高和優(yōu)化。本研究即對(duì)鑒別項(xiàng)和含量測(cè)定項(xiàng)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)提高，擬采用薄層色譜鑒別處方中的白術(shù)、川芎、補(bǔ)骨脂、澤瀉和山楂，采用高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定來(lái)源于白術(shù)的有效成分白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ（C15H18O2）的含量[2]。

1儀器與材料

高效液相色譜儀（LC-20AT）、電子分析天平（AUW 220D）均為日本島津科技公司生產(chǎn)；薄層觀察分析儀（TLA-1型）生產(chǎn)商為長(zhǎng)沙克羅瑪公司；上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠生產(chǎn)的GZX-DH-300S電熱恒溫干燥箱。津奧特賽恩斯儀器有限公司生產(chǎn)的AS-3120A超聲波清洗器；法國(guó)Millipore公司生產(chǎn)的Synergy-UV超純水器。

批號(hào)為120925-201109的白術(shù)對(duì)照藥材、批號(hào)為120918-201102的川芎對(duì)照藥材、批號(hào)為121056-200503的補(bǔ)骨脂對(duì)照藥材、批號(hào)為121081-201004的瀉對(duì)照藥材、批號(hào)為121138-200905的山楂對(duì)照藥材、批號(hào)為111975-201501的白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ對(duì)照品（含測(cè)按99.1%計(jì)）等，以上對(duì)照藥材或?qū)φ掌酚芍袡z院標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)處生產(chǎn)；TEDIA公司生產(chǎn)的色譜純級(jí)甲醇，自制超純水，青島海洋化工分廠生產(chǎn)的GF254和硅膠G薄層板。白術(shù)通利膠囊（3批，濟(jì)南軍區(qū)總醫(yī)院制劑室生產(chǎn)，規(guī)格：10 g/袋，批號(hào)分別為20170301，20170505， 20170716），陰性對(duì)照制劑委托濟(jì)南軍區(qū)總醫(yī)院制劑室生產(chǎn)。

2方法與結(jié)果

2.1鑒別（薄層色譜法）

2.1.1白術(shù)[3-4]

取白術(shù)通利膠囊內(nèi)容物2 g，加正己烷5 ml，超聲處理（功率280 W，頻率40 kHz）20 min，靜置并吸取上方清晰溶液，再水浴上加熱，濃縮成供試品溶液。另取白術(shù)對(duì)照藥材0.5 g，按照上述步驟濃縮成對(duì)照藥材溶液。另取缺白術(shù)的陰性對(duì)照制劑2 g，按照上述步驟濃縮成陰性對(duì)照溶液。又取適量的白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ對(duì)照品，加甲醇溶解制成濃度為1 mg/ml的對(duì)照品溶液。照《中國(guó)藥典》2015年版四部通則0502之薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述每一種溶液各10 μl，分別點(diǎn)于預(yù)制好的同一塊G板上，展開劑選擇為石油醚（60～90℃）-苯-乙酸乙酯（15∶2∶1），按程序薄層展開，顯色劑選擇10%硫酸乙醇溶液，電熱箱設(shè)定90℃后加熱30 min，檢視條件為365 nm紫外燈。檢視結(jié)果：供試品溶液產(chǎn)生的薄層色譜與對(duì)照藥材及對(duì)照品溶液產(chǎn)生的薄層色譜相比較，在相應(yīng)的位置顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照色譜無(wú)相應(yīng)的斑點(diǎn)（圖1）。

2.1.2川芎[3，5]

取白術(shù)通利膠囊內(nèi)容物1 g置燒瓶中，燒瓶中加入20 ml的乙醚，用回流裝置加入回流1 h，將燒瓶溶液過(guò)濾，取濾液于通風(fēng)櫥內(nèi)揮干，殘?jiān)稳?.2 ml的乙酸乙酯溶解后為供試品溶液。另取川芎對(duì)照藥材2 g，按照上述步驟制作對(duì)照藥材溶液。再取缺川芎陰性對(duì)照制劑2 g，按照上述步驟制作陰性對(duì)照溶液。照《中國(guó)藥典》2015年版四部通則0502的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述每一溶液各5 μl，分別點(diǎn)于預(yù)制好的同一塊G板上，展開劑選擇為正己烷-乙酸乙酯（9∶1），按程序薄層展開，檢視條件為365 nm紫外燈。檢視結(jié)果：供試品溶液產(chǎn)生的薄層色譜與對(duì)照藥材溶液產(chǎn)生的薄層色譜相比較，在相應(yīng)的位置顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照色譜無(wú)相應(yīng)的斑點(diǎn)（圖2）。

2.1.3補(bǔ)骨脂[3，6]

取白術(shù)通利膠囊內(nèi)容物1 g置錐形瓶中，錐形瓶中倒入20 ml的乙酸乙酯，用（功率280 W，頻率40 kHz）的超聲處理15 min，將溶液過(guò)濾，濾液置通風(fēng)櫥內(nèi)在通過(guò)水浴鍋蒸干，蒸干后的殘?jiān)稳? ml的乙酸乙酯，此為供試品溶液。再取缺補(bǔ)骨脂的陰性對(duì)照溶液1 g，按照上述步驟制作陰性對(duì)照溶液。另取適量的補(bǔ)骨脂素對(duì)照品，滴加乙酸乙酯制作2 mg/ml的對(duì)照品溶液。照《中國(guó)藥典》2015年版四部通則0502之薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述每一溶液各5 μl，分別點(diǎn)于預(yù)制好的同一塊G板上，展開劑選擇為正己烷-乙酸乙酯（4∶1），按程序薄層展開，顯色劑選擇以10%氫氧化鉀甲醇溶液，檢視條件為365 nm紫外燈。檢視結(jié)果：供試品溶液產(chǎn)生的薄層色譜與對(duì)照品溶液產(chǎn)生的薄層色譜相比較，在相應(yīng)的位置顯相同的黃白色熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照色譜無(wú)相應(yīng)的斑點(diǎn)（圖3）。

2.1.4澤瀉[3，7]

取白術(shù)通利膠囊內(nèi)容物2 g，加50%乙醇50 ml，回流提取1 h，濾過(guò)，濾液濃縮至約6 ml，加等量水稀釋，用乙酸乙酯20 ml，分次提取，合并提取液后將乙酸乙酯層在通風(fēng)櫥內(nèi)加熱濃縮到2 ml左右，制作試品溶液。另取澤瀉對(duì)照藥材2 g，按照上述相同步驟制作對(duì)照藥材溶液。再取缺澤瀉的陰性對(duì)照制劑2 g，按照上述相同步驟制作對(duì)陰性對(duì)照溶液。照《中國(guó)藥典》2015年版四部通則0502之薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述每一溶液各10 μl，分別點(diǎn)于預(yù)制好的同一塊G板上，展開劑選擇為甲苯-乙酸乙酯-甲酸（14∶7∶2），按照程序展開，在恒溫箱內(nèi)105℃的條件下加熱。檢視結(jié)果：供試品溶液產(chǎn)生的薄層色譜與對(duì)照藥材溶液產(chǎn)生的薄層色譜相比較，在相應(yīng)的位置顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照色譜無(wú)相應(yīng)的斑點(diǎn)（圖4）。

2.1.5山楂[3，8]

取白術(shù)通利膠囊內(nèi)容物1 g，加乙酸乙酯20 ml，用設(shè)定條件為功率280 W、頻率40 kHz的超聲處理15 min，超聲后的乙酸乙酯溶液過(guò)濾，將濾液在通風(fēng)櫥內(nèi)揮干，殘?jiān)渭?.5 ml的甲醇制作供試品溶液。另取山楂對(duì)照藥材2 g，按照上述步驟制作對(duì)照藥材溶液。再取缺山楂的陰性對(duì)照制劑2 g，按照上述步驟制作陰性對(duì)照溶液。照《中國(guó)藥典》2015年版四部通則0502之薄層色譜法試驗(yàn)吸取上述每一溶液各10 μl，分別點(diǎn)于預(yù)制好的同一塊G板上，展開劑選擇為甲苯-乙酸乙酯-甲酸（20∶4∶0.5），按照程序展開，顯色劑為硫酸乙醇溶液（3∶10），恒溫箱內(nèi)80℃加熱。檢視結(jié)果：供試品溶液產(chǎn)生的薄層色譜與對(duì)照藥材溶液產(chǎn)生的薄層色譜相比較，在相應(yīng)的位置顯相同的紫紅色斑點(diǎn)，陰性對(duì)照色譜無(wú)相應(yīng)的斑點(diǎn)（圖5）。

2.2白術(shù)中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ的含量測(cè)定[9-10]

2.2.1色譜條件

色譜柱采用島津ODS-VP3色譜柱，長(zhǎng)250 mm，內(nèi)徑4.6 mm，粒徑5 μm；以甲醇-水（77∶23）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)設(shè)定為276 nm，柱溫設(shè)定為35℃。理論板數(shù)的要求：按白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ色譜峰計(jì)算應(yīng)不低于3000（圖6）。

2.2.2溶液的制備

2.2.2.1白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ對(duì)照品溶液的制備 用適當(dāng)工具取適量的白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ對(duì)照品，用電子分析天平精密稱定，記錄數(shù)據(jù)，然后將之放置100 ml的容量瓶中，在容量瓶中加入甲醇，制成白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ對(duì)照品貯備液，其濃度為50 μg/ml。

2.2.2.2供試品溶液的制備 用適當(dāng)工具取適量的白術(shù)通利膠囊內(nèi)容物，用研缽研細(xì)之后再混合均勻，取混勻物10 g左右，用電子分析天平精密稱定，記錄數(shù)據(jù)，再放置到100 ml的錐形瓶中，錐形瓶中加入10 ml的甲醇，回流1 h，放冷，濾過(guò)，濾液全部轉(zhuǎn)移至10 ml量瓶中，加適量甲醇定容至容量瓶上的刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.2.3陰性對(duì)照溶液的制備 用適當(dāng)工具取適量的不含白術(shù)的陰性對(duì)照制劑適量，用研缽研細(xì)之后再混合均勻，取混勻物10 g左右，按照“2.2.2.2”的步驟，制備陰性對(duì)照溶液。

2.2.3線性關(guān)系考察

分別精密吸取2.2.2.1項(xiàng)目下對(duì)照品貯備液適量，加甲醇配制成質(zhì)量濃度分別為4.0、6.0、8.0、10.0、12.0、14.0、16.0 μg/ml的一系列對(duì)照品溶液，分別編號(hào)為1～7號(hào)溶液，按上述色譜條件，分別進(jìn)樣10 μl，以白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ的實(shí)際濃度（X）作為橫坐標(biāo)，其相應(yīng)的峰面積（Y）作為縱坐標(biāo)，畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上得出線性方程為Y=11778X-2634（R2=0.9997）。結(jié)果顯示，白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ在4.0～16 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.4精密度試驗(yàn)

取標(biāo)號(hào)為4的對(duì)照品溶液，精密吸取10μl的進(jìn)樣量，連續(xù)6次進(jìn)樣，讀取6個(gè)峰面積。結(jié)果顯示，白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ色譜峰的峰面積的RSD為0.65%，提示儀器的精密度良好。

2.2.5重復(fù)性試驗(yàn)

取適量的白術(shù)通利膠囊（批號(hào)：20170301）內(nèi)容物，按照“2.2.2.2”項(xiàng)下的方法同樣制備6分供試品溶液，測(cè)定白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ的含量。結(jié)果顯示，白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ的平均含量為8.0 μg/g，RSD=1.23%（n=6），提示方法的重復(fù)性良好。

2.2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)

取“2.2.5”項(xiàng)下供試品溶液一份，置于液相色譜儀中，進(jìn)樣量為10 μl，每2小時(shí)測(cè)定1次，測(cè)定至第12小時(shí)。結(jié)果，白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ的峰面積RSD為0.88 %，提示供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.7加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量的白術(shù)通利膠囊內(nèi)容物9份（批號(hào)：20170301），每份約5 g，分別精密加入80%、100%、120%的白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ對(duì)照品，按“2.2.2.2”項(xiàng)下的方法同樣制備供試品容易，測(cè)定峰面積，按照準(zhǔn)確度公式計(jì)算加樣回收率，計(jì)算結(jié)果顯示白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ的平均加樣回收率為99.37%，RSD為0.84%，符合要求（表1）。

2.2.8樣品含量測(cè)定

取3批白術(shù)通利膠囊適量，按“2.2.2”方法制備供試品溶液，測(cè)定并計(jì)算含量。3批白術(shù)通利膠囊的平均含量為8.0 μg/g，結(jié)果見表2。

3討論

薄層色譜法作為一種成熟有效的鑒別方法，已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于中成藥的質(zhì)量控制當(dāng)中[11]。一般來(lái)講，中成藥的化學(xué)成分復(fù)雜多變，因此如果要對(duì)中成藥進(jìn)行有效的質(zhì)量監(jiān)控，會(huì)有眾多的干擾因素，是故在薄層色譜鑒別過(guò)程中，需要采取合理有效的前處理步驟，才能得到科學(xué)、準(zhǔn)確的薄層色譜圖。通過(guò)多次探索和研究，本試驗(yàn)中供試品溶液、對(duì)照品溶液或?qū)φ账幉娜芤核a(chǎn)生的薄層色譜圖中的薄層特征明顯，分離度較好，上述方法比化學(xué)反應(yīng)靈敏，專屬性較強(qiáng)，體現(xiàn)出了薄層色譜法鑒別處方中的有關(guān)藥物的優(yōu)越性。

白術(shù)通利膠囊處方中，君藥是白術(shù)。白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ為白術(shù)的有效藥理成分[12]，結(jié)合中國(guó)藥典[3]和文獻(xiàn)報(bào)道[13-15]相關(guān)內(nèi)容，含量測(cè)定決定采用HPLC法測(cè)定白術(shù)通利膠囊中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ的含量。方法學(xué)考察顯示，用HPLC對(duì)該制劑中的白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ進(jìn)行含量測(cè)定是合理、有效和可行的。白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ的含量限（幅）度的制定，則需要依照《中國(guó)藥典》藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則的要求[16]來(lái)制定，應(yīng)至少測(cè)定3批及以上的含量數(shù)據(jù)，按其平均值的±20%作為限度的制定幅度。本次測(cè)定的白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ的含量平均值為8.0 μg/g，將其調(diào)低20%，為6.4 μg/g，因此擬定白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ的含量限度為6.4 μg/g。以上為白術(shù)通利膠囊中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ含量限度的確定提供了參考。

綜上所述，經(jīng)提高后的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)操作簡(jiǎn)便、精密度好、結(jié)果準(zhǔn)確，可用于白術(shù)通利膠囊的質(zhì)量控制。

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