• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    瘤毛獐牙菜愈傷組織誘導(dǎo)及生理生化特性研究

    2018-12-05 01:27:34鄒玉霞馬云桐毛勝楠鐘芙蓉申嬋
    中藥與臨床 2018年3期
    關(guān)鍵詞:獐牙菜胚性嫩莖

    鄒玉霞,馬云桐,毛勝楠,鐘芙蓉,申嬋

    瘤毛獐牙菜(Swertia pseudochinensisHara)為龍膽科獐牙菜屬植物,主要野生分布于我國河北、吉林、遼寧、黑龍江等地。2015年版《中國藥典》記載其以干燥全草入藥,藥材名為當(dāng)藥,具清濕熱、健胃的功效,用于治療濕熱黃疸,脅痛,痢疾腹痛,食欲不振[1]。

    商品主要來源于野生,近年來野生資源的急劇減少,不足以滿足市場(chǎng)需求。關(guān)于瘤毛獐牙菜的組培快繁已有相關(guān)研究[2],為了完善和優(yōu)化瘤毛獐牙菜快繁體系的建立,本研究以瘤毛獐牙菜嫩莖和嫩葉為材料,采用L9(34)正交試驗(yàn)探索植物生長調(diào)節(jié)劑對(duì)瘤毛獐牙菜愈傷組織誘導(dǎo)的影響;并對(duì)誘導(dǎo)出的胚性與非胚性愈傷組織進(jìn)行可溶性糖、可溶性蛋白含量及抗氧化物酶(SOD、POD、CAT)活性的測(cè)定,以期揭示愈傷組織誘導(dǎo)的潛在能力,為進(jìn)一步建立愈傷組織的胚胎發(fā)生能力與生化代謝間的關(guān)系提供依據(jù),為研究其體細(xì)胞胚胎發(fā)生奠定基礎(chǔ)。

    1 材料

    1.1 外植體

    供試品于2015年采自河北省承德市圍場(chǎng)內(nèi)健壯無病蟲害的植株,經(jīng)鑒定為瘤毛獐牙菜(Swertia pseudochinensisHara),選取成熟種子種于溫室內(nèi),次年四月取其嫩莖及嫩葉為外植體。

    1.2 儀器與試劑

    1.2.1 儀器 超凈工作臺(tái)(山東博科生物產(chǎn)業(yè)有限公司)、YH-JZ-Ⅱ接種器械滅菌器(上海宇涵生物科技有限公司)、GTOP系列智能光照培養(yǎng)箱(浙江托普儀器有限公司)、離心機(jī)(Hitachi centrifuge CT15RE)、全自動(dòng)樣品快速研磨儀(Tissuelyser-48上海凈信科技)、96孔板、EP管、酶標(biāo)儀(Thermo scientificTM varioskanTM FLASH)、移液槍(eppeudorf Research plus)等。

    1.2.2 試劑 0.1% HgCl2;植物生長調(diào)節(jié)劑6-芐氨基嘌呤(6-BA)、2, 4-二氯苯氧乙酸(2, 4-D)、玉米素(ZT);可溶性蛋白、可溶性糖、過氧化物酶(POD)、過氧化氫酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒(蘇州科銘生物技術(shù)有限公司)。

    2 方法

    2.1 外植體處理

    取瘤毛獐牙菜嫩莖及嫩葉,流水下沖洗30 min,置于超凈工作臺(tái)上。用75%酒精浸泡30 s,無菌水沖洗3次;0.1% HgCl2溶液浸泡5-6 min,無菌水沖洗5次,獲得無菌嫩莖嫩葉。

    2.2 愈傷組織的誘導(dǎo)

    2.2.1 瘤毛獐牙菜愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基 以MS為基本培養(yǎng)基;植物生長調(diào)節(jié)劑2, 4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、6-芐氨基嘌呤(6-BA)、玉米素(ZT)分別為A、B和C 3因素,每個(gè)因素各取3水平,應(yīng)用正交表L9(34)設(shè)計(jì)不同因素水平配比的培養(yǎng)基(表1);加入30 g/L 白糖和4.5 g/L瓊脂;pH值調(diào)至5.8~6.0;在121℃、1.1 kg/cm2的高壓滅菌鍋下滅菌30 min。

    表1 愈傷組織誘導(dǎo)L9(34)正交設(shè)計(jì)

    2.2.2 接種培養(yǎng)與觀察 在無菌條件下,將嫩莖剪成0.5-1 cm的小段,葉片剪成0.5 cm2的小塊分別接入含有不同激素培養(yǎng)基的組培瓶中,培養(yǎng)條件分別為A(光照):(25±1)℃、光照強(qiáng)度1500 lx、光照時(shí)間10 h/d;B(黑暗):(25±1)℃、黑暗條件。

    以上每個(gè)處理10瓶,每瓶8個(gè)接種點(diǎn),每7 d觀察一次并做記錄,40 d統(tǒng)計(jì)誘導(dǎo)率,中途長菌的不計(jì)入最終結(jié)果。

    愈傷組織誘導(dǎo)率(%)=產(chǎn)生愈傷組織的外植體數(shù)/接入的外植體數(shù)

    2.3 不同愈傷組織的生理生化研究

    以繼代40 d后的瘤毛獐牙菜胚性愈傷組織(embryogenic callus, EC)和非胚性愈傷組織(non-embryogenic callus ,N-EC)為材料,按照試劑盒說明書分別測(cè)定兩者中可溶性糖、可溶性蛋白含量以及過氧化物酶(POD)、過氧化氫酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性并比較分析。

    2.4 數(shù)據(jù)處理與分析

    采用Microsoft excel 2013對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)繪圖,SPSS 22.0軟件進(jìn)行方差分析和差異顯著性檢驗(yàn)。

    表2 瘤毛獐牙菜愈傷組織誘導(dǎo)率

    3 結(jié)果與分析

    3.1 瘤毛獐牙菜愈傷組織誘導(dǎo)率及外植體形態(tài)變化

    表3 瘤毛獐牙菜愈傷組織的形態(tài)變化

    3.1.1 不同外植體及光照對(duì)愈傷組織生長的影響 結(jié)合表2及表3可知:嫩莖和嫩葉作為外植體均能誘導(dǎo)出愈傷組織,當(dāng)僅從誘導(dǎo)率上觀察,同等條件下,嫩莖誘導(dǎo)率大多高于嫩葉誘導(dǎo)率。以愈傷誘導(dǎo)率、愈傷形態(tài)及愈傷形成時(shí)間作為評(píng)判指標(biāo)時(shí),嫩莖更適宜做外植體。對(duì)比光照及黑暗條件,發(fā)現(xiàn)黑暗條件下愈傷組織生長速度較快,出愈時(shí)間較早。

    3.1.2 植物生長調(diào)節(jié)劑對(duì)愈傷組織生長的影響

    表4 極差分析與方差分析(根據(jù)光照條件下嫩莖誘導(dǎo)率)

    結(jié)合不同外植體及光照條件考察結(jié)果,對(duì)表2中瘤毛獐牙菜的愈傷組織誘導(dǎo)率進(jìn)行極差及方差分析,結(jié)果如表3所示。2,4-D、6-BA 和ZT 3個(gè)因素對(duì)瘤毛獐牙菜愈傷組織誘導(dǎo)率的影響均不顯著,但影響程度略有差異,3種激素對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)率的影響依次為B(6-BA)>A(2,4-D)>C(ZT)。2,4-D、6-BA和ZT 3因素及其質(zhì)量濃度水平最佳組合為B3A2C3,即MS+6-BA1mg/L+2,4-D2 mg/L+ZT0.9 mg/L為瘤毛獐牙菜愈傷組織誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基。

    3.2 胚性愈傷組織與非胚性愈傷組織的生理生化研究

    將愈傷組織轉(zhuǎn)接入篩選出的最佳培養(yǎng)基中,隨著愈傷組織的生長,發(fā)現(xiàn)其出現(xiàn)了兩種不同類型。一種呈淺白色或白色,半透明,粘質(zhì)狀,具分化能力,在培養(yǎng)后期分化出胚狀體,這種愈傷組織為EC;另一種呈黃色或淺黃色,半透明,結(jié)構(gòu)疏松,表面粗糙或呈結(jié)晶狀,繼代培養(yǎng)之后只發(fā)生體積上的擴(kuò)增,而沒有胚狀體的分化,這種愈傷組織為N-EC。其中EC具有再生潛能,在適宜的條件下可繼續(xù)分化成具胚胎發(fā)生能力的胚狀體;而N-EC難以分化成功,再生成植株的可能性也較小[3,4]。這2種類型的愈傷組織通常根據(jù)其形態(tài)、顏色便可加以區(qū)別[5,6]。對(duì)這兩種愈傷組織分別進(jìn)行可溶性糖、可溶性蛋白及CAT、SOD、POD的測(cè)定。

    3.2.1 蛋白質(zhì)含量與可溶性糖含量

    圖1 不同類型愈傷組織蛋白質(zhì)和可溶性糖含量差異

    瘤毛獐牙菜EC和N-EC的蛋白質(zhì)、可溶性糖含量測(cè)定結(jié)果如圖1所示,結(jié)果表明EC的蛋白質(zhì)與可溶性糖含量分別為41.11 mg/g、15.91 mg/g,均顯著高于N-EC中的含量。

    3.2.2 抗氧化酶(CAT、SOD、POD)活性

    表5 不同愈傷組織抗氧化物酶活性及t檢驗(yàn)

    瘤毛獐牙菜EC與N-EC中CAT、SOD、POD活性測(cè)定結(jié)果及使用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)其差異顯著性結(jié)果如表4所示,結(jié)果表明EC中的CAT活性顯著高于N-EC;SOD活性低于N-EC,但未達(dá)到顯著性水平;POD活性顯著低于N-EC。

    4 討論與結(jié)論

    李茜茹[2]等人以瘤毛獐牙菜嫩莖為外植體對(duì)其組織培養(yǎng)及無性系建立進(jìn)行了初步研究,本研究在其基礎(chǔ)上對(duì)培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件進(jìn)行了進(jìn)一步的優(yōu)化和完善,并根據(jù)愈傷組織的形態(tài)將其分為了胚性愈傷組織和非胚性愈傷組織,同時(shí)測(cè)定了兩種愈傷組織內(nèi)抗氧化酶活性和可溶性糖、可溶性蛋白含量,揭示了兩種不同愈傷組織的生理狀態(tài),為進(jìn)一步分化和發(fā)育成苗提供指導(dǎo)意義。

    4.1 本實(shí)驗(yàn)對(duì)瘤毛獐牙菜愈傷組織誘導(dǎo)條件進(jìn)行優(yōu)化結(jié)果表明:黑暗條件有利于愈傷組織的形成,嫩莖相比嫩葉更有利于愈傷組織的形成且胚性組織較多。王榮明[7]、付偉[8]等在研究不同因素對(duì)南方紅豆杉以及中華卷柏愈傷組織誘導(dǎo)的影響時(shí)發(fā)現(xiàn),光照對(duì)愈傷組織的形成有抑制作用,暗培養(yǎng)可以在一定程度上減輕愈傷組織的褐變,與此實(shí)驗(yàn)結(jié)果相吻合。在愈傷誘導(dǎo)階段,ZT、6-BA、2,4-D發(fā)揮了不同的作用,MS+6-BA1mg/L+2,4-D2 mg/L+ZT0.9mg/L為瘤毛獐牙菜愈傷組織誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基。

    4.2 通過對(duì)瘤毛獐牙菜EC與N-EC生理生化指標(biāo)的測(cè)定,發(fā)現(xiàn)EC中可溶性糖及蛋白質(zhì)均顯著高于N-EC,表明EC代謝旺盛,蛋白質(zhì)合成活躍,為后期細(xì)胞的分化做準(zhǔn)備。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與孟姣等[9]在栓皮櫟胚性和非胚性愈傷組織生化特性研究中的報(bào)道一致。這在后續(xù)快繁體系的建立中,對(duì)培養(yǎng)基的選擇提供了參考依據(jù)。

    4.3 抗氧化酶類物質(zhì)活性測(cè)定結(jié)果顯示,EC中CAT的活性顯著高于N-EC,表明EC生理代謝強(qiáng),清除自由基能力高,活力旺盛;EC與N-EC中SOD差異不明顯;N-EC中POD高于EC,POD是木質(zhì)素合成代謝中的關(guān)鍵酶,其含量與木質(zhì)素合成的量成正相關(guān),而木質(zhì)素在細(xì)胞壁中有支撐細(xì)胞強(qiáng)度的作用[10]。從形態(tài)特征可見,N-EC結(jié)構(gòu)致密,不易分散,表明N-EC細(xì)胞壁形成的木質(zhì)素與POD有關(guān)。

    猜你喜歡
    獐牙菜胚性嫩莖
    紫紅獐牙菜對(duì)四氧嘧啶性糖尿病小鼠的降糖作用
    絲棉木松散型胚性愈傷組織的誘導(dǎo)與增殖*
    香樟胚性與非胚性愈傷組織間的差異研究
    番茄胚性愈傷組織誘導(dǎo)與增殖研究
    波羅蜜葉綠素缺失突變體嫩莖轉(zhuǎn)錄組分析
    川西獐牙菜乙酸乙酯部位的化學(xué)成分及活性研究
    基于ITS2序列的獐牙菜屬六種藥材的分子鑒定
    文冠果組培快繁體系的建立
    不同貯存方法對(duì)沅江荻蘆嫩莖總氨基酸含量的影響
    賓川獐牙菜化學(xué)成分的研究(Ⅱ)
    中成藥(2016年4期)2016-05-17 06:07:48
    亚洲一区二区三区欧美精品| 欧美精品啪啪一区二区三区| 亚洲av成人一区二区三| 国产精品 欧美亚洲| 桃色一区二区三区在线观看| 日韩欧美在线二视频| 国产激情久久老熟女| 欧美av亚洲av综合av国产av| 成人av一区二区三区在线看| 老汉色∧v一级毛片| 欧美一区二区精品小视频在线| 午夜激情av网站| 超碰97精品在线观看| 热re99久久精品国产66热6| 手机成人av网站| 国产精品亚洲一级av第二区| 麻豆久久精品国产亚洲av | 中亚洲国语对白在线视频| 夜夜爽天天搞| 夜夜夜夜夜久久久久| 国产av一区在线观看免费| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 午夜久久久在线观看| 可以在线观看毛片的网站| 丁香六月欧美| 咕卡用的链子| 日韩国内少妇激情av| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 动漫黄色视频在线观看| 91字幕亚洲| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 少妇被粗大的猛进出69影院| 黄片小视频在线播放| 99国产精品免费福利视频| 在线天堂中文资源库| 精品免费久久久久久久清纯| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 亚洲情色 制服丝袜| 国产精品国产高清国产av| 免费看a级黄色片| 国产免费现黄频在线看| 性少妇av在线| 国产精品久久久久成人av| 大型黄色视频在线免费观看| av有码第一页| 国产精品秋霞免费鲁丝片| av国产精品久久久久影院| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 欧美午夜高清在线| 成人手机av| 欧美中文日本在线观看视频| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| e午夜精品久久久久久久| 中文字幕高清在线视频| 91成人精品电影| 亚洲人成77777在线视频| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 久99久视频精品免费| 免费观看精品视频网站| 午夜激情av网站| 老司机亚洲免费影院| 久久久久久久精品吃奶| 日日干狠狠操夜夜爽| 1024香蕉在线观看| 国产精品九九99| 欧美激情高清一区二区三区| 交换朋友夫妻互换小说| 久久九九热精品免费| 免费在线观看亚洲国产| 国产精品 欧美亚洲| 免费在线观看日本一区| 亚洲专区字幕在线| 在线观看66精品国产| 亚洲全国av大片| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 他把我摸到了高潮在线观看| 久久久水蜜桃国产精品网| 天天添夜夜摸| 亚洲五月天丁香| 日本wwww免费看| 亚洲在线自拍视频| 高清在线国产一区| 免费搜索国产男女视频| 成人黄色视频免费在线看| 成年人黄色毛片网站| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 精品日产1卡2卡| 国产成人av激情在线播放| 亚洲中文日韩欧美视频| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 在线观看www视频免费| 国产野战对白在线观看| 黄片小视频在线播放| 男女下面插进去视频免费观看| 久久久久九九精品影院| 这个男人来自地球电影免费观看| bbb黄色大片| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 一二三四在线观看免费中文在| 最好的美女福利视频网| 欧美av亚洲av综合av国产av| 国产免费av片在线观看野外av| av有码第一页| 久9热在线精品视频| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 久久人妻av系列| 女同久久另类99精品国产91| 精品人妻1区二区| 欧美午夜高清在线| 久久精品成人免费网站| 色精品久久人妻99蜜桃| 国产区一区二久久| 国产xxxxx性猛交| 国产精品二区激情视频| 长腿黑丝高跟| 亚洲一区二区三区欧美精品| 国产精品 欧美亚洲| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 两人在一起打扑克的视频| 亚洲情色 制服丝袜| 精品一区二区三区视频在线观看免费 | 亚洲国产精品sss在线观看 | 国产精品亚洲av一区麻豆| 超碰成人久久| 12—13女人毛片做爰片一| 日韩欧美国产一区二区入口| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 国产av一区二区精品久久| 亚洲激情在线av| 视频在线观看一区二区三区| 高清av免费在线| 久久 成人 亚洲| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 天堂动漫精品| 黄片大片在线免费观看| 国产国语露脸激情在线看| 两个人看的免费小视频| 男男h啪啪无遮挡| 国产一区二区三区视频了| 欧美激情 高清一区二区三区| 高清黄色对白视频在线免费看| 成年女人毛片免费观看观看9| 日日夜夜操网爽| 亚洲精品中文字幕在线视频| avwww免费| 免费高清在线观看日韩| 99riav亚洲国产免费| 欧美成人免费av一区二区三区| 人人澡人人妻人| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 成人av一区二区三区在线看| 久久中文看片网| 夜夜爽天天搞| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 欧美乱色亚洲激情| 悠悠久久av| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 91av网站免费观看| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 亚洲精品中文字幕在线视频| 极品教师在线免费播放| 淫妇啪啪啪对白视频| 日韩精品青青久久久久久| 最近最新中文字幕大全免费视频| 伦理电影免费视频| 亚洲精品一区av在线观看| cao死你这个sao货| 亚洲av片天天在线观看| 在线观看一区二区三区| 亚洲人成电影观看| 伦理电影免费视频| 亚洲五月天丁香| 国产av精品麻豆| www.www免费av| www国产在线视频色| 中文字幕高清在线视频| 男人舔女人的私密视频| 99在线人妻在线中文字幕| 一区二区三区精品91| 精品日产1卡2卡| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 精品人妻1区二区| 午夜福利在线免费观看网站| 国产熟女午夜一区二区三区| 国产在线精品亚洲第一网站| 又紧又爽又黄一区二区| 一区福利在线观看| 天堂中文最新版在线下载| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 九色亚洲精品在线播放| 日韩视频一区二区在线观看| 国产精品一区二区在线不卡| 日韩成人在线观看一区二区三区| 午夜精品在线福利| 精品福利观看| 国产成人精品在线电影| 亚洲男人的天堂狠狠| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 亚洲国产欧美一区二区综合| netflix在线观看网站| 国产主播在线观看一区二区| 99热国产这里只有精品6| 不卡av一区二区三区| 国产精品一区二区三区四区久久 | 男女做爰动态图高潮gif福利片 | 91大片在线观看| 亚洲少妇的诱惑av| 后天国语完整版免费观看| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 亚洲av成人av| 欧美中文综合在线视频| 18禁观看日本| 一边摸一边抽搐一进一小说| 99国产精品99久久久久| 亚洲久久久国产精品| 欧美中文日本在线观看视频| 免费在线观看影片大全网站| 午夜福利在线观看吧| 看片在线看免费视频| 另类亚洲欧美激情| 两人在一起打扑克的视频| 天堂俺去俺来也www色官网| 久久久精品欧美日韩精品| 老司机福利观看| 亚洲全国av大片| 在线观看午夜福利视频| 不卡av一区二区三区| 欧美日本中文国产一区发布| 国产精品 欧美亚洲| 久久久久亚洲av毛片大全| 免费看十八禁软件| 又黄又粗又硬又大视频| 男女做爰动态图高潮gif福利片 | 天天添夜夜摸| 久久久久九九精品影院| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 亚洲午夜理论影院| 日本免费一区二区三区高清不卡 | 欧美激情极品国产一区二区三区| 人人妻人人澡人人看| 精品卡一卡二卡四卡免费| 一a级毛片在线观看| 日韩高清综合在线| 黄片播放在线免费| 999精品在线视频| 亚洲精品美女久久av网站| 嫁个100分男人电影在线观看| 黄色a级毛片大全视频| 国产精品亚洲一级av第二区| 国产精品一区二区三区四区久久 | 亚洲熟女毛片儿| 91精品三级在线观看| 日本vs欧美在线观看视频| 欧美日韩av久久| 国产精品二区激情视频| 精品无人区乱码1区二区| 91在线观看av| 国产av在哪里看| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 亚洲人成伊人成综合网2020| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 精品国产一区二区三区四区第35| 亚洲人成77777在线视频| 一区在线观看完整版| 免费av中文字幕在线| 在线观看免费高清a一片| 一区二区三区激情视频| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 国产欧美日韩一区二区精品| 国产av一区在线观看免费| 看黄色毛片网站| avwww免费| 久久午夜亚洲精品久久| 日韩大尺度精品在线看网址 | 亚洲成人免费电影在线观看| 亚洲中文av在线| 国产亚洲欧美98| 九色亚洲精品在线播放| 一二三四社区在线视频社区8| 日本wwww免费看| 欧美不卡视频在线免费观看 | 久9热在线精品视频| 一本综合久久免费| 两个人免费观看高清视频| 欧美精品一区二区免费开放| 成人精品一区二区免费| 国产不卡一卡二| a在线观看视频网站| 国产99久久九九免费精品| 99久久人妻综合| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 国产片内射在线| 国产高清视频在线播放一区| 午夜亚洲福利在线播放| 高清在线国产一区| 97碰自拍视频| a级毛片在线看网站| 日日爽夜夜爽网站| 国产三级在线视频| 久久精品成人免费网站| 美女福利国产在线| 精品一区二区三卡| 91国产中文字幕| 美国免费a级毛片| 在线永久观看黄色视频| 99香蕉大伊视频| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 国产欧美日韩一区二区三| 视频区图区小说| 女性被躁到高潮视频| 88av欧美| 亚洲一区高清亚洲精品| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 久久久水蜜桃国产精品网| 成熟少妇高潮喷水视频| 老熟妇仑乱视频hdxx| 亚洲一码二码三码区别大吗| xxx96com| 国产在线观看jvid| 久9热在线精品视频| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 黄片小视频在线播放| 夜夜夜夜夜久久久久| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 一区二区日韩欧美中文字幕| av福利片在线| 757午夜福利合集在线观看| 免费在线观看完整版高清| 成人国语在线视频| 国产成人欧美| 在线看a的网站| 国产精品一区二区在线不卡| 男女午夜视频在线观看| 在线观看午夜福利视频| 搡老熟女国产l中国老女人| 另类亚洲欧美激情| 女人精品久久久久毛片| 欧美成人午夜精品| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 国产高清国产精品国产三级| 欧美日本亚洲视频在线播放| 高清毛片免费观看视频网站 | av在线播放免费不卡| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 91九色精品人成在线观看| 国产一卡二卡三卡精品| 色婷婷av一区二区三区视频| 一区二区三区激情视频| 久久人妻熟女aⅴ| 国产99久久九九免费精品| avwww免费| 精品国产一区二区久久| 国产精品98久久久久久宅男小说| 亚洲中文av在线| 成人18禁在线播放| av中文乱码字幕在线| 亚洲五月天丁香| 咕卡用的链子| 99re在线观看精品视频| 亚洲人成电影观看| 一本综合久久免费| 国产精品免费一区二区三区在线| 亚洲一区高清亚洲精品| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 香蕉丝袜av| 精品一区二区三区av网在线观看| 99re在线观看精品视频| bbb黄色大片| 亚洲成人免费电影在线观看| 午夜亚洲福利在线播放| 高潮久久久久久久久久久不卡| 久久国产乱子伦精品免费另类| 身体一侧抽搐| 91av网站免费观看| 日韩大尺度精品在线看网址 | 亚洲,欧美精品.| 色综合欧美亚洲国产小说| 好男人电影高清在线观看| 丝袜人妻中文字幕| 欧美人与性动交α欧美软件| 国产一区二区三区综合在线观看| 99久久国产精品久久久| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 亚洲熟妇中文字幕五十中出 | 无遮挡黄片免费观看| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 曰老女人黄片| 午夜福利免费观看在线| 久久影院123| 欧美在线黄色| 视频区图区小说| 久久香蕉精品热| 国产有黄有色有爽视频| 人人澡人人妻人| 国产主播在线观看一区二区| 老司机午夜十八禁免费视频| 999精品在线视频| 久久久久久久久久久久大奶| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 少妇被粗大的猛进出69影院| 黄片播放在线免费| 视频区欧美日本亚洲| svipshipincom国产片| 精品国产一区二区三区四区第35| 日本三级黄在线观看| 精品人妻在线不人妻| 制服人妻中文乱码| 一二三四社区在线视频社区8| 一级毛片精品| 中文字幕人妻丝袜制服| 国产精品1区2区在线观看.| 国产精品久久视频播放| 老司机靠b影院| 无人区码免费观看不卡| 亚洲第一av免费看| 国产高清国产精品国产三级| 国产黄a三级三级三级人| 亚洲av片天天在线观看| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 亚洲精品成人av观看孕妇| 超色免费av| 热re99久久精品国产66热6| av福利片在线| 亚洲欧美日韩无卡精品| 国产av一区在线观看免费| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 中文字幕av电影在线播放| 成在线人永久免费视频| 手机成人av网站| 1024视频免费在线观看| 一进一出抽搐gif免费好疼 | avwww免费| av天堂久久9| 国产一区二区三区综合在线观看| 欧美乱码精品一区二区三区| 久久久久久久久久久久大奶| 亚洲一区二区三区色噜噜 | 妹子高潮喷水视频| 亚洲人成伊人成综合网2020| 国产不卡一卡二| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 成年人免费黄色播放视频| 男男h啪啪无遮挡| 午夜亚洲福利在线播放| 又紧又爽又黄一区二区| 欧美日韩福利视频一区二区| 国产深夜福利视频在线观看| 一级片'在线观看视频| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 国产精品一区二区在线不卡| 色综合站精品国产| 岛国在线观看网站| 久久九九热精品免费| www.自偷自拍.com| 欧美另类亚洲清纯唯美| 99国产精品免费福利视频| 亚洲av成人一区二区三| 久久久久久久久久久久大奶| 久久婷婷成人综合色麻豆| aaaaa片日本免费| 国产不卡一卡二| 黑人欧美特级aaaaaa片| 国产免费现黄频在线看| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 成人手机av| 国产精品影院久久| 多毛熟女@视频| 老汉色av国产亚洲站长工具| 免费日韩欧美在线观看| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 国产亚洲精品第一综合不卡| 欧美日韩视频精品一区| 一本综合久久免费| 黄色视频,在线免费观看| 国产精品电影一区二区三区| 国产精品一区二区三区四区久久 | 18禁观看日本| 精品熟女少妇八av免费久了| 中文亚洲av片在线观看爽| 免费看十八禁软件| 国产乱人伦免费视频| 日韩av在线大香蕉| 黄片大片在线免费观看| 亚洲一区二区三区不卡视频| 90打野战视频偷拍视频| 脱女人内裤的视频| 国产精品九九99| 国产高清国产精品国产三级| 欧美激情 高清一区二区三区| 久久国产精品人妻蜜桃| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 成人三级做爰电影| 99re在线观看精品视频| 久久久久国产一级毛片高清牌| 男女午夜视频在线观看| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 亚洲全国av大片| 黄色片一级片一级黄色片| 日本免费一区二区三区高清不卡 | 亚洲人成电影观看| 亚洲中文字幕日韩| 99riav亚洲国产免费| 夜夜看夜夜爽夜夜摸 | 高潮久久久久久久久久久不卡| 十八禁网站免费在线| 久久青草综合色| 在线天堂中文资源库| 国产精品野战在线观看 | 亚洲中文日韩欧美视频| 亚洲av电影在线进入| 91精品国产国语对白视频| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 久久国产精品影院| 老司机午夜十八禁免费视频| 久久天堂一区二区三区四区| 午夜91福利影院| 亚洲国产欧美一区二区综合| 成人国产一区最新在线观看| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 视频区欧美日本亚洲| 国产乱人伦免费视频| 女警被强在线播放| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 99国产精品99久久久久| 麻豆av在线久日| 18禁观看日本| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 欧美激情极品国产一区二区三区| 欧美日韩精品网址| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 免费av毛片视频| 亚洲欧美一区二区三区久久| 久久久久九九精品影院| 精品久久久久久,| 久久影院123| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 日韩大码丰满熟妇| 亚洲成人免费电影在线观看| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 久久久国产精品麻豆| 热re99久久国产66热| 国产成人精品在线电影| 香蕉久久夜色| 免费观看人在逋| 亚洲一区中文字幕在线| 麻豆av在线久日| 久久久久久免费高清国产稀缺| 国产欧美日韩一区二区精品| 国产精品综合久久久久久久免费 | av有码第一页| 午夜91福利影院| 51午夜福利影视在线观看| 国产精品国产高清国产av| 久久精品成人免费网站| 亚洲精品国产区一区二| 国产极品粉嫩免费观看在线| 999久久久国产精品视频| 操美女的视频在线观看| 精品一区二区三卡| 国产精品一区二区在线不卡| 长腿黑丝高跟| 午夜91福利影院| 亚洲一码二码三码区别大吗| 一二三四在线观看免费中文在| 久久精品亚洲av国产电影网| 亚洲国产精品sss在线观看 | 欧美激情 高清一区二区三区| 国产免费男女视频| 午夜精品久久久久久毛片777| 午夜福利欧美成人| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 久久精品91无色码中文字幕| 亚洲美女黄片视频| 99精品在免费线老司机午夜| 精品福利永久在线观看| av中文乱码字幕在线| 国产成人av激情在线播放| cao死你这个sao货| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 成人18禁在线播放| 免费观看人在逋| 一进一出抽搐gif免费好疼 | 午夜福利免费观看在线| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 免费在线观看影片大全网站| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 亚洲,欧美精品.| 国产精品 国内视频| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 亚洲人成电影观看| 老司机靠b影院| 老司机午夜福利在线观看视频| 午夜福利一区二区在线看| 日日夜夜操网爽| 久久中文字幕人妻熟女| 一二三四在线观看免费中文在| 99在线视频只有这里精品首页| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 少妇的丰满在线观看| 99精品欧美一区二区三区四区| 国产成+人综合+亚洲专区| 91国产中文字幕| 丰满饥渴人妻一区二区三| 亚洲免费av在线视频| 一区二区日韩欧美中文字幕| 99国产精品99久久久久| www.www免费av| av天堂在线播放| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 国产精品av久久久久免费|