孕晚期子癇前期患者入院時外周血、分娩時臍血及胎盤組織miR-126表達觀察

董迪榮，張元珍，鄺伊敏，尹秋，龔青，李家福

(1武漢大學中南醫(yī)院，武漢 430071；2大冶市中醫(yī)醫(yī)院)

子癇前期(PE)是孕產(chǎn)婦及圍產(chǎn)兒病死率增高的重要原因之一。流行病學顯示，PE的發(fā)病率為3%～10%[1,2]。血管內(nèi)皮損傷是妊娠期高血壓疾病生理改變的中心環(huán)節(jié)，PE患者多出現(xiàn)血管內(nèi)皮功能紊亂，微血管收縮和血管內(nèi)血栓形成最終導致了胎盤供血不足[3]。微小RNA(miR)是一種非編碼短的小RNA，參與發(fā)育、分化、凋亡等生理過程[4]。人胎盤中表達有大量的miR，重度PE患者胎盤組織中miR-130、miR-181、miR-222、miR-195、miR-126等表達增加[5]。微小RNA-126(miR-126)是近年發(fā)現(xiàn)的一種小分子調(diào)節(jié)物質(zhì)，具有調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細胞和促進血管生成的功能，在正常組織的血管發(fā)生和血管炎癥反應等病理過程中發(fā)揮重要作用[6]，但miR-126在PE中的研究鮮有報道。本研究觀察了PE孕晚期孕婦血清miR-126水平變化，旨在探討miR-126在PE高危人群篩查中的價值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2017年3月～2018年4月武漢大學中南醫(yī)院收治的PE孕晚期孕婦52例(觀察組)，診斷參照《妊娠期高血壓疾病診治指南(2015)》[7]，除PE相關母胎并發(fā)癥外，無其他內(nèi)外科并發(fā)癥。早發(fā)型(<34周)27例和晚發(fā)型(≥34周)25例。另選同期孕晚期正常孕婦68例(對照組)，血壓正常，無蛋白尿，分娩健康足月兒(孕周≥37周)，無內(nèi)外科并發(fā)癥。兩組均排除多胎妊娠、胎膜早破、多囊卵巢綜合征和不明陰道流血等患者。本研究已經(jīng)過我院倫理委員會批準，患者均知情同意。

1.2 孕婦血清、臍血血清、胎盤組織miR-126檢測 ①標本收集：采集所有入選對象晨起空腹肘靜脈血5 mL，置于EDTA管中，離心機(2 500 r/min)離心15 min，收集血清，儲存于-70 ℃。孕婦分娩后立即收集臍血和胎盤。從臍帶植入點旁5 cm處將胎盤分為母體面部份、中間部份、胎兒面部份共3部分，切開時盡量避免胎盤梗死和鈣化部份。采集中間部份的絨毛，體積為2 cm×2 cm×2 cm，冰生理鹽水中沖洗后儲存于-70 ℃[8]。②胎盤組織miR-126檢測：碾磨法提取胎盤組織中的RNA，miRNA 3′端加Poly(A)處理、修飾后逆轉錄，置于-20 ℃下保存，進行實時熒光定量PCR檢測。檢測時將miR-126 nmol per OD引物稀釋為100 μmol，將2倍miRNA premix混合后離心，0 ℃下反應，反應體系包括miRNA premix 10 μL、miR-126 2 nmols per OD 0.4 μL、reverse primer 0.4 μL、miRNA第一鏈cDNA 2 μL、去離子水7.2 μL。反應過程為起始模板變性、PCR循環(huán)中模板變性、退火和延伸。③血清miR-126檢測：采用離心柱型分離試劑盒分離血清中miRNA，200 μL血清中加入200 μL裂解液，離心后進行RNA的提取，檢測步驟同“②”。本研究所選的內(nèi)參基因為U6，miRNA相對量的計算采用 CT法。miR-126的相對表達量為2-ΔΔCt， CT(閾值循環(huán)數(shù))=待測樣本基因Ct均值-待測樣本內(nèi)參Ct均值[9]。

1.3 一般資料收集及血生化指標檢測 入院時，收集患者年齡、孕次、產(chǎn)次、孕前身體質(zhì)量指數(shù)(BMI)、孕周、定期檢查例數(shù)、最高收縮壓、最高舒張壓、新生兒質(zhì)量等一般資料，患者的最高收縮壓和舒張壓為入院后未服用降壓藥前所測的最高值；檢測甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-c)、低密度膽固醇(LDL-c)、血肌酐、尿酸和白蛋白等生化指標，血生化指標動態(tài)復查，以全部測得值的中位數(shù)作為最終數(shù)據(jù)。

2 結果

2.1 兩組孕婦血清、臍血血清miR-126水平及胎盤組織miR-126表達比較 結果見表1。

表1 兩組孕婦血清、臍血血清miR-126水平及胎盤組織miR-126表達比較

注：與對照組比較，*P<0.05。

2.2 兩組年齡、孕次、產(chǎn)次、孕前BMI、妊娠期體質(zhì)量增加值比較 結果見表2。

表2 兩組年齡、孕次、產(chǎn)次、孕前BMI、妊娠期體質(zhì)量增加值比較

注：與對照組比較，*P<0.05。

2.3 兩組分娩孕周、定期檢查例數(shù)、最高收縮壓、最高舒張壓、新生兒質(zhì)量比較 觀察組及對照組定期檢查比率分別為63.46%(33/19)、88.24%(60/8)，兩組比較，P<0.05。兩組分娩孕周、最高收縮壓、最高舒張壓、新生兒質(zhì)量比較見表3。

表3 兩組分娩孕周、最高收縮壓、最高舒張壓、新生兒質(zhì)量比較

注：與對照組比較，*P<0.05。

2.4 兩組TG、TC、HDL-c、LDL-c、血肌酐、尿酸、白蛋白水平比較 結果見表4。

表4 兩組TG、TC、HDL-c、LDL-c、血肌酐、尿酸、白蛋白水平比較

注：與對照組比較，*P<0.05。

2.5 觀察組孕婦血清miR-126水平與臨床指標的相關性 相關性分析顯示，觀察組孕婦血清miR-126水平與年齡呈負相關(-4.02，P<0.05)，而與分娩孕周、收縮壓、舒張壓、新生兒體質(zhì)量、白蛋白、血肌酐、尿酸均無相關性(P均>0.05)。

3 討論

PE是指妊娠20周后出現(xiàn)新發(fā)的高血壓，且伴有蛋白尿或其他系統(tǒng)的損害，嚴重的系統(tǒng)損害使其成為孕婦圍產(chǎn)期發(fā)病率和病死率升高的主要原因。PE是是孕產(chǎn)婦和圍產(chǎn)兒患病率和病死率增高的主要原因之一，尤其對于孕晚期孕婦[3]。既往研究[10]證實，miR表達異常與人類疾病的發(fā)生有關。文獻[11]報道，PE患者胎盤和外周血中miR的異常表達也會使細胞功能紊亂。Wang等[12]發(fā)現(xiàn)，PE患者胎盤中miR-20a的高表達會抑制叉頭框蛋白A1，導致滋養(yǎng)層細胞增殖和侵襲能力下降。Muralimanoharan等[13]發(fā)現(xiàn)，PE患者胎盤組織中miR-210的表達水平增高會導致線粒體功能紊亂。

miR-126是Deeppak等于2006年發(fā)現(xiàn)的一類小分子RNA，與血管生成密切相關[14,15]。miR-126在血管內(nèi)皮細胞中的含量最為豐富，且具有特異性，其可以調(diào)節(jié)細胞增殖、遷移和血管生成[16,17]。研究[14]發(fā)現(xiàn)，miR-126可以通過調(diào)節(jié)內(nèi)皮祖細胞的功能參與胎盤血管的新生。本研究發(fā)現(xiàn)，PE患者外周血和胎盤組織中miR-126的表達水平均明顯升高，這與Yan等[18]研究一致。本研究發(fā)現(xiàn)，觀察組孕婦血清miR-126水平和胎盤組織miR-126表達高于對照組，臍血血清miR-126水平無差異，說明miR-126可能與PE的發(fā)病有關，孕婦血清異常表達的miR-126可能來源于胎盤。本研究還發(fā)現(xiàn)，觀察組早發(fā)型和晚發(fā)型孕婦血清、臍血血清miR-126水平及胎盤組織中miR-126表達均無明顯差異，提示miR-126參與這兩型的病理機制可能類似，且與發(fā)病時間無關。結果提示，孕晚期檢測孕婦miR-126的表達水平可能有助于PE高危人群的篩查。

既往有研究[2]發(fā)現(xiàn)，PE發(fā)病的高危因素有初產(chǎn)婦、孕婦年齡<20歲、分娩時孕周<32周、產(chǎn)前保健<5次等。本研究顯示，觀察組孕婦血清miR-126水平與年齡呈負相關，說明隨著年齡的增長，孕婦外周血清miR-126水平下降。而孕婦血清miR-126水平與分娩孕周、收縮壓和舒張壓等無關，這可能是因為PE多為胎盤源性，機體全身系統(tǒng)炎癥反應過度激活[19]。

總之，孕晚期孕婦血清和胎盤組織中miR-126異常表達，其可能參與了PE的發(fā)病，且隨著年齡的增長，其在孕婦血清中的水平越低。孕晚期對孕婦血清miR-124的檢測有助于PE高危人群的篩查。