探討補陽還五湯類方成分的藥代動力學比較研究

宋亞娟

【摘 要】目的：對比分析補陽還五湯類方（補陽還五湯和腦健片）中阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯A、藁本內(nèi)酯在大鼠體內(nèi)的藥代動力學特征。方法：將補陽還五湯類方灌胃頸靜脈插管大鼠，采用HPLC-DAD法同時檢測3種成分在不同時間點的血藥濃度，經(jīng)DAS2.0計算得單成分的藥代動力學參數(shù)，再采用總量統(tǒng)計矩（相似度）法整合成整體藥代動力學參數(shù)并進行比較。結(jié)果：3種成分在體內(nèi)的總量統(tǒng)計參數(shù)相差甚遠，而3種成分總和的統(tǒng)計矩參數(shù)卻比較接近，補陽還五湯和腦健片在大鼠體內(nèi)AUC分別為240.6和133.0，MRT分別為3.192 min和3.259 min，VRT分別為21.59 min2和19.75 min2；補陽還五湯和腦健片中3種成分總量的相似度達到0.977 8。結(jié)論：補陽還五湯和腦健片在體內(nèi)代謝過程具有相似性，中藥復方發(fā)揮功效依賴于多成分的整體貢獻。

【關(guān)鍵詞】藥代動力學；補陽還五湯；腦健片；阿魏酸；洋川芎內(nèi)酯A；藁本內(nèi)酯

【中圖分類號】R749.053 【文獻標志碼】B 【文章編號】1005-0019（2018）10-094-01

補陽還五湯類方包括補陽還五湯及其精簡方（腦健片）。補陽還五湯出自《醫(yī)林改錯·癱痿論》，由黃芪、川芎、當歸等7味中藥組成，系清代醫(yī)家王清任創(chuàng)立的治療半身不遂辨證屬氣虛血瘀證的經(jīng)典名方。腦健片處方是遵循補陽還五湯之方義，秉承“益氣祛瘀生新法”，將補陽還五湯精簡為黃芪、川芎和地龍，經(jīng)過二次開發(fā)而成的新型制劑。本課題組前期研究表明，腦健片治療腦缺血療效顯著[1-2]，現(xiàn)進一步對其代謝動力學進行研究，選擇補陽還五湯類方均含有的阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯A、藁本內(nèi)酯3種入血成分為檢測指標，研究大鼠灌胃后體內(nèi)藥代動力學參數(shù)變化，旨在探討精簡方配伍變化后其同類成分的藥物動力學變化行為。

1 材料與方法

1.1 藥物與試劑 補陽還五湯干浸膏（黃芪120 g，當歸6 g，赤芍4.5 g，川芎3 g，紅花3 g，桃仁3 g，地龍3 g）和腦健片干浸膏（黃芪30 g，川芎9 g，地龍6 g）均由湖南省中醫(yī)藥研究院中藥所張水寒教授提供，所有藥材質(zhì)量均符合2010年版《中華人民共和國藥典》標準。補陽還五湯按傳統(tǒng)水煎法濃縮干燥后制備成干浸膏，相當于原藥材4.5 g/g。腦健片按新工藝制備，其中川芎以揮發(fā)油量為考察指標，對川芎粗粉進行SFE-CO2萃取，不加夾帶劑，提取1.5 h；地龍以醇浸膏得率及氮含量為指標，溫浸2次，第1次加5倍量50%乙醇溫浸48 h，第2次加4倍量50%乙醇溫浸48 h；再合并藥渣，與黃芪藥粉一同水煎，所有藥液濃縮干燥后即得干浸膏，相當于原藥材4.7 g/g。

阿魏酸對照品（批號MUST-12112204）、洋川芎內(nèi)酯A對照品（批號MUST-12121202）、藁本內(nèi)酯對照品（批號MUST- 12082702），北京盈澤納新化工技術(shù)研究院；乙腈，美國Tedia公司，色譜純；甲醇，美國Tedia公司，色譜純；怡寶純凈水（華潤怡寶飲料有限公司），其他試劑均為分析純。

1.2 儀器 Instech自動采血系統(tǒng)（Instech Solomon公司），離心濃縮儀（Centri Vap，LABCONCO），Agilent-1260型高效液相色譜儀，配有自動進樣器，四元梯度泵，在線真空脫氣機，柱溫箱和二極管陣列檢測器（DAD）；超聲波清洗儀（SB-3200D，寧波新其生物科技股份有限公司），分析天平（JA-3003，上海恒平科學儀器有限公司），Elipse XDB-C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，安捷倫公司）。

1.3 動物 SPF級雄性SD大鼠20只，9～10周齡，體質(zhì)量260～300 g，湖南斯萊克景達實驗動物有限公司，許可證號SCXK（湘）2011-0003。室溫無菌喂養(yǎng)，自由飲食飲水。

1.4 分組、給藥及處理 建立大鼠實時活體采血方法。將SD大鼠麻醉后固定于手術(shù)臺上，切開頸下靜脈，分離頸靜脈，埋線，待血液充盈時用眼科剪將頸靜脈剪開一小口，插入特制PU軟管約20 mm深并固定，縫合傷口。灌胃后將插管大鼠與Instech自動采血系統(tǒng)連接。將頸靜脈插管的健康SD大鼠分為補陽還五湯組和腦健片組，每組5只。二方均以4倍于人體劑量的原藥材給藥[3]，折算成干浸膏量分別為12.04 g/kg體質(zhì)量和9.64 g/kg體質(zhì)量。灌胃前采血作為空白血漿，再分別于5、15、30、45、60、90、120、180、240、300、360、480 min采血0.5 mL，并取上層血漿，-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5 供試品溶液的制備 取藥物血漿100 μL，加0.1 mol/L鹽酸50 μL，混勻后加800 μL乙酸乙酯，渦旋震蕩5 min，8000 r/min離心10 min，取上清液；重復上述操作，合并上清液，離心濃縮儀揮干溶劑后殘渣用50 μL甲醇復溶。

1.6 對照品溶液的制備 分別精密稱量阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯A、藁本內(nèi)酯對照品，用甲醇溶液制成濃度分別為0.125、0.1、2.5 g/L的標準溶液。其中阿魏酸對照品溶液中含5%乙酸，4 ℃冰箱避光保存?zhèn)溆?，藁本?nèi)酯-20 ℃冰箱避光保存?zhèn)溆谩?/p>

1.7 色譜條件 本研究采用HPLC-DAD法與腦健片體外成分測定建立的方法[4]一致。色譜條件：Elipse XDB-C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 ？m），柱溫30 ℃；以0.3%乙酸水（A）和乙腈（C）為流動相進行梯度洗脫（0～5 min，15% C；5～30 min，15%～31% C；30～32 min，31%～36% C；32～82 min，36%～72% C；82～90 min，72%～95% C），流速1.0 mL/min；檢測波長為阿魏酸325 nm、洋川芎內(nèi)酯A 280 nm、藁本內(nèi)酯328 nm。

1.8 數(shù)據(jù)分析 采用DAS2.0軟件，分別獲得阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯A和藁本內(nèi)酯3種成分的經(jīng)典藥代動力學參數(shù)，參照文獻[5-6]按總量統(tǒng)計矩（相似度）法計算藥代動力學總量統(tǒng)計矩參數(shù)，并進行比較分析。

2 結(jié)果

系統(tǒng)適用性與專屬性考察

分別取空白血漿，加入阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯A、藁本內(nèi)酯標準品溶液的空白血漿，補陽還五湯和腦健片給藥后30 min的藥物血漿樣本，處理后上樣分析。結(jié)果顯示血漿中內(nèi)源性物質(zhì)不干擾測定，該方法專屬性良好。根據(jù)前期研究結(jié)果，由保留時間和紫外光譜圖確定1號峰為阿魏酸，2號峰為洋川芎內(nèi)酯A，3號峰為藁本內(nèi)酯[4]。

3 討論

中藥發(fā)揮藥效往往取決于多種藥效成分的協(xié)同作用，講究君臣佐使配伍原則。采用傳統(tǒng)西藥藥代動力學模型對中藥復方藥代參數(shù)進行分析，發(fā)現(xiàn)同一藥效成分在不同藥效部位、不同藥材及不同配伍復方中的藥代動力學特征均不盡相同。采用傳統(tǒng)西藥單一成分藥代動力學模型對中藥多成分在體內(nèi)藥代動力學行為進行評價存在一定的局限性，不能充分體現(xiàn)補陽還五湯類方整體成分在體內(nèi)的真實代謝過程。本研究采用總量統(tǒng)計矩參數(shù)對經(jīng)典房室模型的藥動參數(shù)繼續(xù)深入分析，既能反映總量藥物濃度的動力學行為，又能與單個成分的統(tǒng)計矩參數(shù)關(guān)聯(lián)，是整合多成分藥物動力學較宜的數(shù)學處理方法，同時更能體現(xiàn)出中藥多種化學成分多靶點、多途徑、多環(huán)節(jié)進行整合調(diào)節(jié)的優(yōu)越性。

參考文獻

[1] 劉芳，劉青萍，王宇紅，等.補陽還五湯及其精簡方抗腦缺血損傷功效比較[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2014，21（9）：46-49.

[2] 劉芳，王宇紅，蔡光先，等.補陽還五湯及其精簡方（腦健片）對腦缺血大鼠海馬組織CDK4/Cyclin D1表達的影響[J].中國中藥雜志，2015， 40（20）：4058-4062.

[3] 夏相宜，王宇紅，蔡光先，等.腦健膠囊對MCAO大鼠腦水腫、腦梗死面積及體質(zhì)量的影響[J].中醫(yī)學報，2014，29（4）：532-534.