• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    PKC和ROCK對(duì)硝苯地平舒張血管作用的影響*

    2018-10-29 09:46:52胡晶晶張玉潔李榮巧梁泰剛楊彩紅李青山
    中國病理生理雜志 2018年10期
    關(guān)鍵詞:阻斷劑激動(dòng)劑硝苯地平

    胡晶晶, 張玉潔, 李榮巧, 梁泰剛, 楊彩紅, 李青山△

    (山西醫(yī)科大學(xué) 1藥學(xué)院, 2基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院, 山西 太原 030001)

    由于心腦血管疾病具有較高的死亡率和致殘率,近年來對(duì)心腦血管疾病的治療引發(fā)了更多的關(guān)注。硝苯地平(nifedipine)作為第一代鈣拮抗劑,是治療心血管疾病高血壓、頑固性充血性心力衰竭和心絞痛的一線藥。目前認(rèn)為硝苯地平的主要作用機(jī)制是阻止鈣內(nèi)流,抑制血管、支氣管和子宮平滑肌的興奮-收縮偶聯(lián),產(chǎn)生松弛血管平滑肌,擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、周圍小動(dòng)脈及降低外周血管阻力[1]。蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)及Rho相關(guān)激酶(Rho-associated kinase,ROCK)作為治療心血管疾病的新靶點(diǎn),均屬絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶,是細(xì)胞內(nèi)很重要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子。迄今為止,已從哺乳動(dòng)物中分離出至少12種PKC亞型和20余種Rho家族成員。PKC及ROCK通常以無活性的形式存在于細(xì)胞質(zhì)中,當(dāng)其激活后從胞質(zhì)轉(zhuǎn)移至胞膜,并經(jīng)歷一系列復(fù)雜的磷酸化過程引發(fā)相應(yīng)的生物學(xué)功能改變,參與多種生理和病理過程?;罨蟮腜KC及ROCK參與肌動(dòng)蛋白骨架的調(diào)節(jié)和平滑肌細(xì)胞收縮等細(xì)胞活動(dòng),其高表達(dá)和異常活化與許多心血管疾病的發(fā)生及發(fā)展密切相關(guān),如高血壓、動(dòng)脈粥樣硬化、心力衰竭和肺動(dòng)脈高壓等[2-3]。PKC及ROCK作為治療心血管疾病的靶點(diǎn)其活性狀態(tài)是否會(huì)影響硝苯地平的舒張血管作用目前還不清楚,因此,本課題在大鼠離體血管環(huán)上研究PKC和ROCK是否與硝苯地平舒血管作用有關(guān)。

    材 料 和 方 法

    1 實(shí)驗(yàn)材料

    1.1實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備 八通道離體組織器官恒溫灌流裝置(成都泰盟科技有限公司);高靈敏度張力傳感器及PowerLab數(shù)據(jù)采集分析系統(tǒng)(埃德儀器國際貿(mào)易有限公司);HH-601超級(jí)恒溫水浴(常州市頂新實(shí)驗(yàn)儀器有限公司);電子天平(上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司);PHS-3C型pH計(jì)(上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司)。

    1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)雄性Sprague-Dawley大鼠,體重均為250~300 g,由山西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,許可證號(hào)為SYXK(晉)2015-0001。動(dòng)物飼養(yǎng)條件為溫度(22±2)℃,濕度45%~60%,自由攝食及飲水。

    1.3實(shí)驗(yàn)試劑 苯腎上腺素(phenylephrine,PE)、去甲腎上腺素(norepinephrine,NE)、乙酰膽堿(acetylcholine,ACh)、氯化鋇(barium chloride,BaCl2)、四乙胺(tetraethylammonium,TEA)、4-氨基吡啶(4- aminopyridine,4-AP)、格列本脲(glibenclamide,Gli)、星孢菌素(staurosporine,STA)、佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)、法舒地爾(fasudil)、血管緊張素 II(angiotensin II,Ang-II)和硝苯地平均購自Sigma。其余試劑均為分析純。

    2 方法

    2.1大鼠主動(dòng)脈血管環(huán)的制備[4]大鼠斷頭處死后,迅速游離主動(dòng)脈,置于4 ℃、100% O2飽和的生理鹽溶液(physiologic salt solution, PSS)中,將分離干凈的血管剪成3~4 mm的分段血管環(huán),用2個(gè)三角型掛鉤貫穿血管環(huán)管腔,將其水平置于10 mL浴槽中,浴槽內(nèi)裝有5 mL PSS溶液,37 ℃恒溫,并持續(xù)通以100%的O2,下端固定,上端連于張力傳感器,PowerLab數(shù)據(jù)采集分析系統(tǒng)記錄血管張力變化。將基礎(chǔ)張力調(diào)至2 g左右,浴槽內(nèi)每隔15 min換PSS 1次,平衡1 h。制備去內(nèi)皮血管環(huán)時(shí),使用與主動(dòng)脈內(nèi)徑相當(dāng)?shù)拿薨舸┤胙軆?nèi)摩擦其內(nèi)壁2次,以求完全去除血管內(nèi)皮細(xì)胞。

    2.2血管環(huán)內(nèi)皮功能的檢測(cè) 用60 mmol/L的KCl預(yù)收縮血管環(huán)2次,以誘發(fā)血管的最大收縮幅度,待血管穩(wěn)定達(dá)到坪值后(即連續(xù)2次同樣的刺激所引起的收縮幅度差別小于5%),加入PE(10-6mol/L)使血管收縮,穩(wěn)定后,加入ACh(10-5mol/L),觀察血管的舒張情況來檢驗(yàn)內(nèi)皮完整性。以PE刺激收縮后的穩(wěn)定張力為100%,最大舒張幅度大于70%的血管環(huán)即認(rèn)為血管內(nèi)皮完整,最大舒張幅度小于5%的血管環(huán)即認(rèn)為血管內(nèi)皮已去除完全。

    2.3硝苯地平對(duì)大鼠主動(dòng)脈環(huán)基礎(chǔ)張力的影響 基礎(chǔ)狀態(tài)大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)用PSS平衡1 h,后加入累積濃度(10-10mol/L、10-9mol/L、10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L和10-5mol/L)的硝苯地平或等體積溶劑,觀察血管張力變化。

    2.4硝苯地平對(duì)內(nèi)皮完整組和去內(nèi)皮組主動(dòng)脈環(huán)張力的影響 血管環(huán)穩(wěn)定后,內(nèi)皮完整和去內(nèi)皮的大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)分別經(jīng)NE(10-6mol/L)和KCl(60 mmol/L)預(yù)收縮,張力平衡后,實(shí)驗(yàn)組加入累積濃度的硝苯地平,對(duì)照組加入等體積溶劑,以分別加入NE和KCl誘發(fā)的血管環(huán)的最大收縮幅度為100%,計(jì)算施加硝苯地平后血管舒張幅度占最大收縮幅度的百分比,建立濃度-效應(yīng)曲線。

    2.5不同K+通道阻斷劑、PKC阻滯劑/激動(dòng)劑和ROCK阻滯劑/激動(dòng)劑對(duì)硝苯地平舒張血管作用的影響 血管環(huán)穩(wěn)定后,分別使用不同的工具藥孵育30 min,用NE和KCl預(yù)收縮血管,張力平衡后,加入累積濃度的硝苯地平,對(duì)照組為不加工具藥直接加入累積濃度的硝苯地平,記錄相應(yīng)血管環(huán)張力并計(jì)算變化值。

    2.6硝苯地平對(duì)CaCl2量效曲線的影響[5]血管環(huán)穩(wěn)定后,用無鈣含EGTA的PSS沖洗20 min,后將浴液更換為無鈣不含EGTA的生理鹽溶液,10 min后,更換為含KCl(60 mmol/L)無鈣的生理鹽溶液5 mL,預(yù)孵10 min,加入累積濃度(0.1 mmol/L、0.3 mmol/L、1 mmol/L、3 mmol/L和10 mmol/L)的CaC12,觀察血管環(huán)張力變化。給藥組在加CaC12前10 min加入不同濃度(10-9mol/L、5×10-8mol/L、10-6mol/L)的硝苯地平,空白對(duì)照組同時(shí)加入溶劑。以空白對(duì)照組累計(jì)加入CaCl2(10 mmol/L)后引起的收縮張力最大值為100%,建立濃度-效應(yīng)曲線。

    2.7硝苯地平對(duì)內(nèi)鈣釋放引起血管收縮的影響 血管環(huán)穩(wěn)定后,用無鈣含EGTA的生理鹽溶液沖洗,20 min后,將浴液更換為無鈣不含EGTA的生理鹽溶液,10 min后,實(shí)驗(yàn)組分別加入硝苯地平(10-9mol/L、5×10-8mol/L、10-6mol/L)孵育20 min后,加入NE,空白對(duì)照組同時(shí)加入等量溶劑,觀察血管的收縮情況。

    3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

    采用 SPSS 20.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示。采用GraphPad Prism 6 作濃度-舒張效應(yīng)曲線,多組間比較釆用one-way ANOVA,以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    結(jié) 果

    1 硝苯地平對(duì)基礎(chǔ)狀態(tài)血管環(huán)張力的影響

    累積濃度硝苯地平對(duì)基礎(chǔ)狀態(tài)血管環(huán)張力無明顯影響,實(shí)驗(yàn)組與溶劑組對(duì)比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性,見圖1。

    Figure 1.The effect of nifedipine on basic tension of aortic rings. Mean±SD.n=6.

    圖1硝苯地平對(duì)基礎(chǔ)狀態(tài)主動(dòng)脈張力的影響

    2 硝苯地平對(duì)NE/KCl預(yù)收縮血管環(huán)張力的影響

    在NE(10-6mol/L)/KCl(60 mmol/L)誘導(dǎo)的血管環(huán)收縮反應(yīng)中,累積濃度硝苯地平對(duì)內(nèi)皮完整組與去內(nèi)皮組的主動(dòng)脈血管環(huán)均有濃度依賴性舒張作用。內(nèi)皮完整組最高累積濃度硝苯地平對(duì)血管環(huán)舒張百分比可達(dá)(96.47±6.00)% 和(97.84±2.78)%,去內(nèi)皮組中的舒張百分比為(94.87±4.28)%和(98.44±1.06)%,兩組數(shù)據(jù)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性,見圖2。

    Figure 2.The relaxation effect of nifedipine on endothelium-intact (E+) and endothelium-denuded (E-) aortic rings precontracted with 10-6mol/L NE (A) or 60 mmol/L KCl (B). Mean±SD.n=6.**P<0.01vsvehicle group.

    圖2硝苯地平對(duì)NE和KCl預(yù)收縮血管環(huán)張力的影響

    3 K+通道阻斷劑對(duì)硝苯地平舒張血管作用的影響

    預(yù)孵Kir通道阻斷劑BaCl2(10-4mol/L)、KCa通道阻滯劑TEA(10-3mol/L)、KATP通道阻斷劑Gli(10-5mol/L)和KV通道阻斷劑4-AP(10-3mol/L),在NE(10-6mol/L)誘導(dǎo)的血管環(huán)收縮反應(yīng)中,最高累積濃度硝苯地平對(duì)血管環(huán)舒張百分比分別為(93.19±1.88)%、(97.05±1.86)%、(95.84±2.68)%和(94.77±2.39)%,與未加阻斷劑的硝苯地平組比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性;在KCl(60 mmol/L)誘導(dǎo)的血管環(huán)收縮反應(yīng)中,最高累積濃度硝苯地平的最大舒張率分別為(95.04±3.79)%、(98.29±2.32)%、(98.29±2.32)%和(98.74±0.76)%,與未加阻斷劑的硝苯地平組比較,差異亦均無統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性,見圖3。

    Figure 3.The effects of pretreatment with BaCl2(10-4mol/L), TEA (10-3mol/L), Gli (10-5mol/L) and 4-AP (10-3mol/L) on the vasodilation effect of nifedipine in endothelium-intact aortic rings contracted by 10-6mol/L NE (A) or 60 mmol/L KCl (B). Mean±SD.n=6.

    圖3鉀通道阻斷劑對(duì)硝苯地平舒張血管作用的影響

    4 PKC對(duì)硝苯地平舒張血管作用的影響

    在NE(10-6mol/L)/KCl(60 mmol/L)誘導(dǎo)的血管環(huán)收縮反應(yīng)中,使用PKC抑制劑STA(10-8mol/L)后,最高累積濃度硝苯地平作用增強(qiáng)對(duì)血管環(huán)舒張百分比可達(dá)(101.99±0.81)%和(112.04±4.05)%,而PKC激動(dòng)劑PMA(10-7mol/L)則能減弱硝苯地平對(duì)血管的舒張作用,最高累積濃度硝苯地平對(duì)血管環(huán)舒張百分比降低為(61.38±8.15)%和(84.92±2.65)%,與硝苯地平組比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),見圖4。

    Figure 4.The effects of pretreatment with STA (10-8mol/L) and PMA (10-7mol/L) on the vasodilation effect of nifedipine in endothelium-intact aortic rings contracted by 10-6mol/L NE (A) or 60 mmol/L KCl (B). Mean±SD.n=6.*P<0.05,**P<0.01vsnifedipine group.

    圖4PKC對(duì)硝苯地平舒張血管作用的影響

    5 ROCK對(duì)硝苯地平舒張血管作用的影響

    在NE(10-6mol/L)/ KCl(60 mmol/L)誘導(dǎo)的血管環(huán)收縮反應(yīng)中,ROCK抑制劑fasudil(10-6mol/L)能增強(qiáng)硝苯地平對(duì)血管的舒張作用,使用后最高累積濃度硝苯地平對(duì)血管環(huán)舒張百分比可達(dá)(103.67±2.36)%和(100.22±4.12)%,其激動(dòng)劑Ang-II(10-9mol/L)則能降低硝苯地平對(duì)血管的舒張作用,其最大舒張率分別為(63.34±4.35)%和(70.61±3.17)%,與硝苯地平組比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),見圖5。

    6 硝苯地平對(duì)CaCl2量效曲線的影響

    在含KCl(60 mmol/L)的無鈣生理鹽溶液中累計(jì)加入CaCl2,得到CaCl2的量效曲線。實(shí)驗(yàn)組預(yù)先用硝苯地平(10-9mol/L、5×10-8mol/L和10-6mol/L)分別預(yù)孵可濃度依賴性地減弱CaCl2對(duì)血管環(huán)的收縮效應(yīng),與對(duì)照組比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),見圖6。

    Figure 5.The effects of pretreatment with fasudil (10-6mol/L) and Ang-II (10-9mol/L) on the vasodilation effect of nifedipine in endothelium-intact aortic rings contracted by 10-6mol/L NE (A) or 60 mmol/L KCl (B). Mean±SD.n=6.*P<0.05,**P<0.01vsnifedipine group.

    圖5ROCK對(duì)硝苯地平舒張血管作用的影響

    Figure 6.Inhibitory effect of nifedipine (10-9mol/L, 5×10-8mol/L and 10-6mol/L) on the contraction curves dependent on extracellular Ca2+addition (0.1~10 mmol/L) in endothelium-denuded, KCl-stimulated aortic ring preparations incubated in the Ca2+-free medium. Mean±SD.n=6.**P<0.01vscontrol group.

    圖6硝苯地平對(duì)CaCl2量效曲線的影響

    7 硝苯地平對(duì)內(nèi)鈣釋放引起血管收縮的影響

    在無鈣生理鹽溶液中,用硝苯地平(10-9mol/L、5×10-8mol/L和10-6mol/L)預(yù)處理不能減弱NE對(duì)血管的收縮作用,與對(duì)照組比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性,見圖7。

    討 論

    PKC和ROCK作為細(xì)胞內(nèi)重要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子,與許多心血管疾病的發(fā)生及發(fā)展密切相關(guān),如高血壓、動(dòng)脈粥樣硬化、心力衰竭、肺動(dòng)脈高壓等[6-7]。目前認(rèn)為這2種激酶在心血管系統(tǒng)的多種作用,是治療心血管管疾病的新靶點(diǎn)。硝苯地平可用于多種疾病,如高血壓、心絞痛、心肌梗塞、充血性心力衰竭等心血管疾病,也可用于呼吸系統(tǒng)、消化系統(tǒng)和泌尿系統(tǒng)疾病[1,8]。本實(shí)驗(yàn)旨在研究PKC及ROCK作為心血管疾病的治療靶點(diǎn),其活性是否會(huì)影響硝苯地平對(duì)血管的舒張作用。

    Figure 7.The effects of nifedipine (10-9mol/L, 5×10-8mol/L and 10-6mol/L) on contraction via NE (10-6mol/L) in Ca2+-free solution. Mean±SD.n=6.

    圖7硝苯地平對(duì)內(nèi)鈣釋放的影響

    研究發(fā)現(xiàn),PKC與ROCK共存于同一細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路,且在ROCK上游發(fā)揮作用[9]。ROCK的經(jīng)典底物是肌球蛋白輕鏈20(myosin light chain 20,MLC20)和肌球蛋白輕鏈磷酸酶(myosin light chain phosphatase,MLCP),它們是參與細(xì)胞舒縮運(yùn)動(dòng)的重要蛋白分子。在血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)中,ROCK能夠直接激活MLC20,也能抑制MLCP的活性,間接增加MLC20磷酸化水平,進(jìn)而使VSMCs收縮[10]。本研究結(jié)果顯示,ROCK抑制劑fasudil(10-6mol/L)及PKC抑制劑STA(10-8mol/L)可以明顯增大硝苯地平的舒血管作用,表明ROCK和PKC可能協(xié)同介導(dǎo)血管收縮作用;而預(yù)孵ROCK激動(dòng)劑Ang-II(10-9mol/L)及PKC激動(dòng)劑PMA(10-7mol/L)能夠使硝苯地平的舒血管作用減弱,表明硝苯地平的舒張血管作用可能與抑制PKC-ROCK信號(hào)通路有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn),平滑肌所特有的分子量17 kD的PKC增強(qiáng)蛋白磷酸酶1抑制物(PKC-potentiated protein phosphatase 1 inhibitor of 17 kD,CPI-17)也是ROCK的重要底物之一,活化狀態(tài)的ROCK能磷酸化CPI-17,后者與MLCP結(jié)合,掩蓋MLCP的靶亞基1從而抑制MLCP的活性,促進(jìn)平滑肌細(xì)胞的收縮,這種收縮與Ca2+濃度無關(guān),為鈣非依賴性調(diào)節(jié),即Ca2+敏化過程[11]。由PKC介導(dǎo)的Ca2+增敏機(jī)制也不依賴于Ca2+的內(nèi)流[12]。PKC主要通過直接激活MLCK及ROCK參與血管的收縮反應(yīng),CPI-17作為鈣離子敏感性的潛在介質(zhì),亦能被PKC磷酸化,進(jìn)而抑制MLCP的活性,間接增加MLC20的磷酸化水平,進(jìn)而促進(jìn)血管收縮。也就是說CPI-17作為ROCK和PKC的共同底物參與激動(dòng)劑誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞收縮,與鈣敏感性有關(guān)[13]。ROCK激動(dòng)劑Ang-II(10-9mol/L)及PKC激動(dòng)劑PMA(10-7mol/L)能夠使硝苯地平的舒血管作用減弱,可能干擾了ROCK及PKC介導(dǎo)的收縮蛋白對(duì)Ca2+增敏的過程。

    血管的舒張不僅與PKC、ROCK等信號(hào)密切相關(guān),也與血管內(nèi)皮細(xì)胞、血管平滑肌上的鉀通道、鈣通道等密切相關(guān),為排除相關(guān)因素的影響,我們進(jìn)一步研究了硝苯地平對(duì)內(nèi)皮、離子通道的作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn),硝苯地平對(duì)基礎(chǔ)狀態(tài)下血管環(huán)的靜息張力無明顯作用,對(duì)KCl及NE預(yù)收縮內(nèi)皮完整和去內(nèi)皮血管環(huán)具有明顯的舒張作用,且呈濃度依賴性,內(nèi)皮完整組與去內(nèi)皮組比較無明顯差異。因此,硝苯地平對(duì)血管的舒張作用可能與血管內(nèi)皮細(xì)胞無關(guān),而是直接作用于血管平滑肌。

    血管平滑肌的舒縮活動(dòng)跟其上的鉀通道活性密切相關(guān),鉀通道活性的改變可引起血管平滑肌細(xì)胞膜電位的去極化或超極化,從而改變VSMCs的膜電位及興奮性[14-15]。為排除鉀通道在硝苯地平舒血管中的作用,我們使用了Kir阻斷劑(BaCl2,10-4mol/L)、 KCa阻斷劑(TEA,10-3mol/L)、 KATP阻斷劑(Gli,10-5mol/L)和KV阻斷劑(4-AP,10-3mol/L),結(jié)果發(fā)現(xiàn)均不能抑制硝苯地平的舒張血管作用,提示硝苯地平的舒血管作用可能與4種鉀通道無關(guān)。

    血管平滑肌上的電壓依賴性鈣通道和受體操縱性鈣通道,可分別被高鉀和NE激活。在無鈣環(huán)境中,用高濃度的KCl使血管去極化,硝苯地平能夠濃度依賴性地抑制該情況下由CaCl2引起的血管收縮。由此表明,硝苯地平可以抑制Ca2+通過電壓依賴鈣通道內(nèi)流,從而使細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度降低,進(jìn)而引起血管舒張。在無鈣的生理鹽溶液中,用硝苯地平預(yù)處理不能減弱NE對(duì)血管的收縮作用,而在有鈣的環(huán)境下硝苯地平能夠明顯抑制NE刺激主動(dòng)脈環(huán)引起的收縮,表明硝苯地平可拮抗外鈣內(nèi)流,介導(dǎo)其對(duì)血管的舒張作用,其舒張血管的作用與內(nèi)鈣釋放無關(guān)。

    猜你喜歡
    阻斷劑激動(dòng)劑硝苯地平
    適配體在免疫性疾病靶向治療中的應(yīng)用
    妊高癥患者治療中硫酸鎂聯(lián)合硝苯地平的應(yīng)用研究
    硝苯地平聯(lián)合硫酸鎂治療妊高征的臨床效果
    綠蘿花中抗2型糖尿病PPARs激動(dòng)劑的篩選
    中成藥(2018年10期)2018-10-26 03:41:22
    GPR35受體香豆素類激動(dòng)劑三維定量構(gòu)效關(guān)系研究
    環(huán)境中的β-阻斷劑及其在污水處理中的工藝研究
    探討硫酸鎂聯(lián)合硝苯地平治療妊高癥的臨床療效
    AMPK激動(dòng)劑AICAR通過阻滯細(xì)胞周期于G0/G1期抑制肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖
    硫酸鎂聯(lián)合硝苯地平治療妊高癥40例臨床療效觀察
    微絲解聚劑及微管阻斷劑對(duì)蘚羽藻細(xì)胞重建過程的影響
    自线自在国产av| 动漫黄色视频在线观看| 91在线观看av| 高潮久久久久久久久久久不卡| 亚洲国产中文字幕在线视频| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 成年人黄色毛片网站| 香蕉丝袜av| 啦啦啦 在线观看视频| 男人舔女人的私密视频| 日韩中文字幕欧美一区二区| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 欧美乱色亚洲激情| 91九色精品人成在线观看| 国产高清videossex| 丰满迷人的少妇在线观看| cao死你这个sao货| 国产av精品麻豆| 国产亚洲欧美在线一区二区| 国产精品av久久久久免费| 国产亚洲欧美在线一区二区| 久久精品影院6| 欧美午夜高清在线| 亚洲片人在线观看| 无遮挡黄片免费观看| 日本五十路高清| 激情视频va一区二区三区| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 亚洲五月色婷婷综合| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 中文字幕av电影在线播放| 日韩大尺度精品在线看网址 | 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 亚洲成人免费av在线播放| 日本免费一区二区三区高清不卡 | 9色porny在线观看| 日韩欧美在线二视频| 女人被狂操c到高潮| 99热国产这里只有精品6| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 18美女黄网站色大片免费观看| 国产成人精品久久二区二区91| 免费观看人在逋| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 亚洲中文av在线| 日韩欧美三级三区| 无遮挡黄片免费观看| 神马国产精品三级电影在线观看 | 757午夜福利合集在线观看| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 精品卡一卡二卡四卡免费| 人妻久久中文字幕网| 国产区一区二久久| 日本一区二区免费在线视频| 日韩有码中文字幕| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 99在线视频只有这里精品首页| 久久精品成人免费网站| 日韩欧美免费精品| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | а√天堂www在线а√下载| 黄色视频,在线免费观看| 亚洲性夜色夜夜综合| 久久久国产精品麻豆| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 欧美黑人精品巨大| 男人舔女人下体高潮全视频| 国产真人三级小视频在线观看| 国产在线观看jvid| 久久国产乱子伦精品免费另类| 97碰自拍视频| 男人舔女人的私密视频| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 亚洲一区二区三区色噜噜 | 欧美日韩亚洲高清精品| 身体一侧抽搐| 国产99白浆流出| 波多野结衣av一区二区av| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 亚洲国产精品999在线| 亚洲国产精品sss在线观看 | 午夜福利,免费看| av视频免费观看在线观看| 一区二区日韩欧美中文字幕| 亚洲片人在线观看| 99re在线观看精品视频| 久久亚洲精品不卡| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 久久久国产欧美日韩av| 久久精品国产清高在天天线| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 国产精品国产av在线观看| 亚洲av五月六月丁香网| 亚洲一区高清亚洲精品| av在线天堂中文字幕 | 精品国产美女av久久久久小说| 国产主播在线观看一区二区| 亚洲国产精品sss在线观看 | 色在线成人网| 色在线成人网| 国产真人三级小视频在线观看| 国产主播在线观看一区二区| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 久久精品国产清高在天天线| 午夜免费观看网址| a级片在线免费高清观看视频| 欧美黄色片欧美黄色片| 国产精品二区激情视频| 啦啦啦 在线观看视频| 村上凉子中文字幕在线| 精品久久久久久,| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 欧美日本中文国产一区发布| 亚洲精品粉嫩美女一区| 黄色视频不卡| 国产成人精品在线电影| 99国产综合亚洲精品| 久久99一区二区三区| 69av精品久久久久久| 国产精品 国内视频| 久久久久九九精品影院| 午夜免费激情av| 久久久国产成人免费| 免费在线观看黄色视频的| 免费在线观看黄色视频的| 成人国语在线视频| 亚洲国产中文字幕在线视频| 天堂影院成人在线观看| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 午夜日韩欧美国产| 精品久久久精品久久久| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 在线观看免费视频日本深夜| 黄色 视频免费看| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 久久国产乱子伦精品免费另类| 亚洲三区欧美一区| 夜夜看夜夜爽夜夜摸 | 在线观看66精品国产| 久久精品91蜜桃| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 嫩草影视91久久| 波多野结衣av一区二区av| 国产xxxxx性猛交| 日韩欧美一区视频在线观看| 免费av毛片视频| 在线免费观看的www视频| 女性生殖器流出的白浆| 欧美午夜高清在线| 9热在线视频观看99| 香蕉国产在线看| 无人区码免费观看不卡| 亚洲欧美精品综合久久99| 正在播放国产对白刺激| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 色尼玛亚洲综合影院| 啦啦啦在线免费观看视频4| 热re99久久国产66热| 中文字幕精品免费在线观看视频| 亚洲一区中文字幕在线| 天堂俺去俺来也www色官网| 久久婷婷成人综合色麻豆| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 超碰97精品在线观看| 男人舔女人下体高潮全视频| 免费在线观看完整版高清| 色综合站精品国产| 51午夜福利影视在线观看| 午夜福利在线观看吧| 男人操女人黄网站| 亚洲欧美激情综合另类| 精品久久久久久成人av| 久久午夜综合久久蜜桃| xxxhd国产人妻xxx| 高清欧美精品videossex| 久久国产精品影院| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 国产成人系列免费观看| 黄片小视频在线播放| 精品久久久久久久毛片微露脸| 最近最新中文字幕大全免费视频| 亚洲精华国产精华精| 久99久视频精品免费| 国产亚洲欧美98| 91麻豆av在线| 国产av一区在线观看免费| 久99久视频精品免费| 国产亚洲欧美在线一区二区| 亚洲av美国av| 亚洲久久久国产精品| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 99热只有精品国产| 久久久久久大精品| 亚洲七黄色美女视频| 男人的好看免费观看在线视频 | 18美女黄网站色大片免费观看| 制服诱惑二区| 日本vs欧美在线观看视频| 久久久久国产一级毛片高清牌| 在线播放国产精品三级| 亚洲 欧美一区二区三区| 91在线观看av| 一边摸一边做爽爽视频免费| 久久欧美精品欧美久久欧美| 亚洲片人在线观看| 女性生殖器流出的白浆| 中文字幕人妻丝袜制服| 狠狠狠狠99中文字幕| 超色免费av| 制服诱惑二区| 欧美黄色淫秽网站| svipshipincom国产片| 搡老乐熟女国产| 国产在线精品亚洲第一网站| 午夜日韩欧美国产| 亚洲五月色婷婷综合| 亚洲精品一区av在线观看| 国产精品久久久av美女十八| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 久久香蕉国产精品| 麻豆av在线久日| 亚洲人成电影免费在线| 电影成人av| 在线观看日韩欧美| 高清av免费在线| 亚洲色图综合在线观看| 欧美乱码精品一区二区三区| 亚洲色图av天堂| 97碰自拍视频| 精品国产美女av久久久久小说| 午夜福利在线免费观看网站| 中国美女看黄片| 亚洲欧美激情综合另类| 久久影院123| 一本大道久久a久久精品| 在线观看www视频免费| 亚洲少妇的诱惑av| a级片在线免费高清观看视频| 日韩欧美免费精品| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 无人区码免费观看不卡| 高清在线国产一区| 亚洲av片天天在线观看| 亚洲专区国产一区二区| 欧美精品亚洲一区二区| 一区二区日韩欧美中文字幕| 成人免费观看视频高清| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 国产成人精品久久二区二区91| 国产熟女午夜一区二区三区| 国产亚洲欧美精品永久| 国产成人欧美在线观看| 人人澡人人妻人| 午夜激情av网站| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 亚洲成人国产一区在线观看| 国产伦人伦偷精品视频| 亚洲一区二区三区欧美精品| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 成人亚洲精品av一区二区 | 不卡av一区二区三区| 女同久久另类99精品国产91| 精品国产美女av久久久久小说| 亚洲九九香蕉| 成年人黄色毛片网站| 婷婷丁香在线五月| 色播在线永久视频| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 午夜精品国产一区二区电影| av欧美777| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 一区二区三区国产精品乱码| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 国产不卡一卡二| 老汉色av国产亚洲站长工具| 亚洲黑人精品在线| 国产成人av教育| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 91大片在线观看| 国产熟女xx| 亚洲熟女毛片儿| 最好的美女福利视频网| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 国产成人影院久久av| 欧美黄色淫秽网站| 麻豆一二三区av精品| 欧美成人午夜精品| 亚洲美女黄片视频| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 亚洲国产欧美一区二区综合| 很黄的视频免费| 人人澡人人妻人| 一边摸一边做爽爽视频免费| 免费少妇av软件| 国产亚洲欧美在线一区二区| 两性夫妻黄色片| 精品久久久精品久久久| 一a级毛片在线观看| 免费看十八禁软件| 老司机午夜福利在线观看视频| 黄色毛片三级朝国网站| 夜夜看夜夜爽夜夜摸 | 国产在线观看jvid| 国产一区二区激情短视频| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 欧美最黄视频在线播放免费 | 国产成人精品久久二区二区免费| 亚洲欧美激情在线| 免费看a级黄色片| 搡老岳熟女国产| 一级片免费观看大全| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 脱女人内裤的视频| 丝袜美足系列| 国产99白浆流出| 亚洲第一青青草原| 天堂中文最新版在线下载| 久久久久精品国产欧美久久久| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 久久久久久大精品| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 亚洲精品在线美女| 久久久精品欧美日韩精品| 成熟少妇高潮喷水视频| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 露出奶头的视频| 美女扒开内裤让男人捅视频| 妹子高潮喷水视频| 国产伦人伦偷精品视频| 国产精品一区二区免费欧美| av中文乱码字幕在线| 午夜福利在线观看吧| 一区二区三区国产精品乱码| 另类亚洲欧美激情| 午夜老司机福利片| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 国产精品二区激情视频| 中文字幕色久视频| 不卡一级毛片| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 亚洲精品一区av在线观看| 久久久久国内视频| 男男h啪啪无遮挡| 成人特级黄色片久久久久久久| 日韩欧美一区视频在线观看| cao死你这个sao货| 亚洲欧美精品综合久久99| 老司机深夜福利视频在线观看| 日韩欧美国产一区二区入口| 黄色视频不卡| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 一级毛片女人18水好多| 久久香蕉精品热| 亚洲成人国产一区在线观看| 亚洲人成电影观看| 久久久久国产一级毛片高清牌| 色婷婷久久久亚洲欧美| 亚洲伊人色综图| 俄罗斯特黄特色一大片| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 热re99久久国产66热| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 成人免费观看视频高清| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 精品高清国产在线一区| 亚洲专区中文字幕在线| 国产精品九九99| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 操美女的视频在线观看| 精品高清国产在线一区| 久久精品国产清高在天天线| www.www免费av| 男女高潮啪啪啪动态图| 欧美日韩精品网址| 国产av一区二区精品久久| 啪啪无遮挡十八禁网站| 美女扒开内裤让男人捅视频| 欧美日韩av久久| 丰满的人妻完整版| 亚洲五月天丁香| 免费av中文字幕在线| 欧美成人午夜精品| 免费在线观看完整版高清| 中文欧美无线码| 欧美大码av| 在线观看66精品国产| 国产av一区二区精品久久| 免费不卡黄色视频| 亚洲一区二区三区不卡视频| 国产亚洲精品第一综合不卡| 久久中文字幕一级| 十分钟在线观看高清视频www| 精品久久久精品久久久| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 一夜夜www| 国产激情久久老熟女| 亚洲一区中文字幕在线| 美女大奶头视频| 国产av又大| 日日夜夜操网爽| 久久欧美精品欧美久久欧美| 国产精品av久久久久免费| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 久久 成人 亚洲| 日本五十路高清| 国产精品av久久久久免费| 国产亚洲欧美精品永久| 亚洲专区国产一区二区| 男女床上黄色一级片免费看| 99香蕉大伊视频| 韩国av一区二区三区四区| 国产xxxxx性猛交| 交换朋友夫妻互换小说| 日韩欧美在线二视频| 动漫黄色视频在线观看| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 无遮挡黄片免费观看| 国产成人精品久久二区二区91| 国产av一区在线观看免费| 国产99白浆流出| 亚洲精品粉嫩美女一区| 精品日产1卡2卡| 国产精品一区二区精品视频观看| 国产欧美日韩一区二区三| 高清黄色对白视频在线免费看| 麻豆一二三区av精品| 久久人人精品亚洲av| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 母亲3免费完整高清在线观看| 成人18禁在线播放| 妹子高潮喷水视频| 一级片免费观看大全| 成人国语在线视频| 一二三四在线观看免费中文在| 久久中文看片网| 成人黄色视频免费在线看| tocl精华| 欧美中文综合在线视频| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 午夜福利,免费看| 欧美日韩一级在线毛片| 日日夜夜操网爽| av天堂在线播放| 中文字幕人妻丝袜制服| 日日爽夜夜爽网站| 国产av在哪里看| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 精品久久久精品久久久| av在线播放免费不卡| 在线观看午夜福利视频| 两个人看的免费小视频| 韩国精品一区二区三区| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| svipshipincom国产片| 热re99久久精品国产66热6| 午夜福利免费观看在线| 亚洲一区高清亚洲精品| 国产视频一区二区在线看| 久久久水蜜桃国产精品网| 中文字幕色久视频| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| av欧美777| 欧美乱妇无乱码| 精品卡一卡二卡四卡免费| 男女下面进入的视频免费午夜 | 黑丝袜美女国产一区| 一级片'在线观看视频| 亚洲欧美激情在线| 露出奶头的视频| 午夜久久久在线观看| 妹子高潮喷水视频| 免费高清在线观看日韩| 日本三级黄在线观看| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 国产在线观看jvid| 黄片大片在线免费观看| 日日爽夜夜爽网站| 无遮挡黄片免费观看| 夜夜爽天天搞| 咕卡用的链子| 亚洲视频免费观看视频| 在线观看免费午夜福利视频| 精品久久久精品久久久| 另类亚洲欧美激情| 国产国语露脸激情在线看| 国产免费男女视频| 1024香蕉在线观看| 99热国产这里只有精品6| 亚洲国产精品合色在线| 亚洲av成人av| e午夜精品久久久久久久| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 啦啦啦 在线观看视频| 性欧美人与动物交配| 精品国产亚洲在线| 99国产综合亚洲精品| 高清在线国产一区| 亚洲精品在线观看二区| 麻豆av在线久日| 久久精品国产综合久久久| 999久久久国产精品视频| 18禁美女被吸乳视频| 正在播放国产对白刺激| av免费在线观看网站| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 精品久久久久久久久久免费视频 | 一进一出抽搐gif免费好疼 | 国产成人啪精品午夜网站| 亚洲精品国产区一区二| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 国产成人av激情在线播放| 久久国产乱子伦精品免费另类| 久久性视频一级片| 99国产精品一区二区三区| 亚洲,欧美精品.| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 欧美精品啪啪一区二区三区| 两个人免费观看高清视频| 午夜久久久在线观看| 91字幕亚洲| 国产精品 国内视频| 色播在线永久视频| 国产91精品成人一区二区三区| 老司机午夜十八禁免费视频| 夜夜看夜夜爽夜夜摸 | 欧美黑人精品巨大| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 亚洲一区中文字幕在线| 亚洲av成人av| www.精华液| 神马国产精品三级电影在线观看 | 满18在线观看网站| 看免费av毛片| 两个人免费观看高清视频| av片东京热男人的天堂| 国产视频一区二区在线看| 91av网站免费观看| 黑人欧美特级aaaaaa片| 男女午夜视频在线观看| 免费看十八禁软件| 色播在线永久视频| 另类亚洲欧美激情| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 国产一区二区三区视频了| 一级,二级,三级黄色视频| av电影中文网址| 99久久人妻综合| 99riav亚洲国产免费| 精品卡一卡二卡四卡免费| 十八禁网站免费在线| 成人18禁在线播放| 成人国产一区最新在线观看| 国产成人精品久久二区二区91| 色播在线永久视频| 黄频高清免费视频| 黄色成人免费大全| 国产精品成人在线| 久久久久久久久中文| 欧美日本亚洲视频在线播放| av网站在线播放免费| 两个人免费观看高清视频| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 国产免费现黄频在线看| 老司机深夜福利视频在线观看| 久久精品91无色码中文字幕| 一区二区三区激情视频| 三级毛片av免费| av中文乱码字幕在线| 久久久国产一区二区| 1024香蕉在线观看| 国产1区2区3区精品| 91av网站免费观看| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 黄片大片在线免费观看| 大型黄色视频在线免费观看| 精品久久蜜臀av无| 黄色女人牲交| 91老司机精品| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 日韩av在线大香蕉| 日本黄色视频三级网站网址| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 级片在线观看| 国产精品九九99| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 99riav亚洲国产免费| 97碰自拍视频| 国产精品久久电影中文字幕| 99国产精品免费福利视频| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 老司机靠b影院| 女人精品久久久久毛片| 国产高清激情床上av| 窝窝影院91人妻| 满18在线观看网站| 身体一侧抽搐| 成人国语在线视频| 宅男免费午夜| netflix在线观看网站| 国产精品久久视频播放| 一进一出抽搐gif免费好疼 | 久久亚洲精品不卡| 欧美最黄视频在线播放免费 | 黑人猛操日本美女一级片| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 无限看片的www在线观看| 高清毛片免费观看视频网站 | 亚洲av第一区精品v没综合| 亚洲五月色婷婷综合| 三级毛片av免费|