哈族食管鱗癌中PLCE1基因啟動(dòng)子甲基化水平的實(shí)驗(yàn)研究

王彬，彭昊，陳云昭

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哈族食管鱗癌中PLCE1基因啟動(dòng)子甲基化水平的實(shí)驗(yàn)研究

王彬，彭昊，陳云昭

832000 新疆，石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院病理科新疆地方與民族高發(fā)病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室

探討 PLCE1基因啟動(dòng)子甲基化與食管鱗癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。

分別用免疫組化（IHC）和甲基化特異 PCR（MSP）方法檢測(cè) 51 例新疆哈薩克族食管鱗癌及相應(yīng)癌旁正常組織中 PLCE1 蛋白表達(dá)水平及其啟動(dòng)子甲基化水平，分析其與病理資料相關(guān)性；分別用 Western blot 及 MSP 檢測(cè)食管鱗癌細(xì)胞在 5-aza-dC 作用前后 PLCE1 蛋白表達(dá)及啟動(dòng)子甲基化變化情況。

新疆哈薩克族食管鱗癌組織中 PLCE1 蛋白表達(dá)高于癌旁正常組織，而其基因甲基化水平則較低（< 0.001），且蛋白高表達(dá)的癌組織中其甲基化水平低于蛋白低表達(dá)的癌組織（= 0.028），PLCE1 甲基化水平與其蛋白表達(dá)水平具有明顯的相關(guān)性（2= 4.791，= 0.028），并與患者的淋巴結(jié)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移（2= 7.242，= 0.027）和 TNM 分期（2= 7.883，= 0.019）明顯相關(guān)；在食管鱗癌細(xì)胞系中 PLCE1 甲基化程度同樣與蛋白表達(dá)水平成反比，5-aza-dC 處理可抑制 TE-1 和 Kyse150 的 PLCE1 甲基化，提高其蛋白表達(dá)。

食管鱗癌組織中 PLCE1 甲基化低與其蛋白表達(dá)高、淋巴結(jié)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及 TNM 分期相關(guān)，5-aza-dC 處理可抑制 PLCE1 甲基化程度，增高其蛋白表達(dá)。

甲基化； 食管鱗癌； 磷脂酶Cε1； 甲基化特異 PCR

食管癌在我國(guó)的發(fā)病率及病死率都高居前列[1]，且有明顯的地域分布，在冀、豫、蘇、晉、陜、閩等省的食管鱗癌發(fā)病率最高[2]。磷脂酶 Cε1（phospholipase C epsilon-1，PLCE1）是最近發(fā)現(xiàn)的 PLC 最復(fù)雜的同工酶，它獨(dú)有的 RA 結(jié)構(gòu)域，可以結(jié)合Ras 和 Rap1。Ras 介導(dǎo)的 PLCE1 活化并誘導(dǎo)酶轉(zhuǎn)運(yùn)到質(zhì)膜，而 Rap1 誘導(dǎo)的 PLCE1 活化使酶在核周區(qū)域聚集[3]。此外，PLCε的 CDC25 結(jié)構(gòu)域有鳥嘌呤核苷酸交換因子（GEF）屬性，參與 RAS/MAPK 和細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（ERK）的激活。因此，PLCE1 通過(guò)參與調(diào)節(jié)一系列細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)傳導(dǎo)通路，而調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長(zhǎng)和凋亡，促進(jìn)細(xì)胞增殖、分化，甚至惡變。近年來(lái)，很多報(bào)道采用全基因組關(guān)聯(lián)分析（GWAS）技術(shù)對(duì)食管鱗癌患者和正常對(duì)照人群進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn) PLCE1 是中國(guó)食管鱗癌重要的易感基因[4-5]。研究發(fā)現(xiàn) PLCE1 在新疆哈薩克族食管鱗癌中高表達(dá)，且與腫瘤的轉(zhuǎn)移與侵襲密切相關(guān)[6]。作為最常見的表觀遺傳改變，食管鱗癌組織中 PLCE1 蛋白表達(dá)增高，其原因是否與基因甲基化異常相關(guān)鮮有研究。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病歷資料 本實(shí)驗(yàn)收集伊犁哈薩克自治州友誼醫(yī)院等醫(yī)院病理科 2000 – 2013 年間石蠟包埋的術(shù)前未經(jīng)任何治療的新疆哈薩克族食管鱗癌患者癌組織及相應(yīng)癌旁正常組織各 51 例，同時(shí)收集患者臨床病理資料。

1.1.2 材料與試劑 人食管鱗癌細(xì)胞株 Eca109、EC9706、TE-1、Kyse150 均購(gòu)自上海復(fù)祥生物科技有限公司；山羊抗人 PLCE1（sc-28404）抗體購(gòu)自 Santa Cruz 公司；小鼠抗人 β-actin（TA-09）抗體購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司；QIAamp DNA FFPE Tissue Kit、EpiTect Fast DNA Bisulfite Kit 購(gòu)自德國(guó) Qiagen 公司；甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑 5-aza-dC 購(gòu)自美國(guó) Sigma 公司。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)及實(shí)驗(yàn)分組 食管癌細(xì)胞 Eca109、EC9706、TE-1、Kyse150 用含 10% 胎牛血清及青、鏈霉素（均為 100 U/ml）的 DMEM 培養(yǎng)基重懸，以 1 × 104個(gè)/ml 的濃度接種 24 孔板，置于 37 ℃、5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育。5-aza-dC 處理組：細(xì)胞培養(yǎng) 24 h 后用含 5-aza-dC（1.0 × 10-3mol/L）的培養(yǎng)基換液；對(duì)照組：細(xì)胞同期培養(yǎng)，只換液，不加入 5-aza-dC。

1.2.2 免疫組織化學(xué)觀察 選擇患者病理組織蠟塊，制作切片，按梯度濃度用二甲苯對(duì)切片脫蠟，用乙醇進(jìn)行水化，用 EDTA 進(jìn)行抗原修復(fù)，用 H2O2孵育，切片用牛血清封閉后添加一抗在 4 ℃冰箱孵育過(guò)夜，PBS 洗 3 次，再添加二抗 37 ℃溫箱孵育 30 min，PBS 洗 3 次，DAB 顯色，清水沖洗后蘇木素復(fù)染、鹽酸分化、自來(lái)水藍(lán)化、乙醇脫水、二甲苯中透明切片、中性樹膠封片。免疫組化評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：0 ~ 1 分為陰性，2 ~ 4 分為低表達(dá)組，5 ~ 12 分為高表達(dá)組。

1.2.3 甲基化特異性 PCR 提取組織及細(xì)胞 DNA，對(duì) DNA 進(jìn)行亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化并提純，引物序列見表 1，配制體系后進(jìn)行擴(kuò)增，反應(yīng)條件為94 ℃變性 3 min；94 ℃ 30 s、50 ℃ 30 s、72 ℃30 s，重復(fù) 35 個(gè)循環(huán)；72 ℃延伸 5 min，4 ℃時(shí)結(jié)束。2% 瓊脂糖凝膠電泳分離 PCR 產(chǎn)物后拍照。結(jié)果判定以 DNA MarkerI 為指示并參考甲基化和非甲基化陽(yáng)性對(duì)照條帶。

表 1 引物名稱與序列

1.2.4 Western blot 提取細(xì)胞蛋白后，按不同分子量大小配制不同濃度的 SDS-PAGE 凝膠，按分子量大小選擇電泳及轉(zhuǎn)膜的條件，胎牛血清封閉2 h，一抗 4 ℃孵育過(guò)夜，洗膜，二抗室溫孵育2 h，洗膜，曝光，成像。以β-actin 為內(nèi)參。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用 SPSS17.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，用 Mann-whitney U 檢驗(yàn)評(píng)價(jià)免疫組化評(píng)分在癌和正常組織中的差異，采用2檢驗(yàn)和 Fisher’s 確切概率法分析 PLCE1 啟動(dòng)子區(qū)甲基化表達(dá)水平與臨床病理資料之間的關(guān)系。< 0.05 時(shí)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 食管鱗癌及癌旁正常組織中 PLCE1 蛋白的表達(dá)

在 51 例新疆哈薩克族食管鱗癌樣本中，有 34 例（34/51，66.67%）PLCE1 蛋白呈高表達(dá)，而癌旁正常組織中只有 4 例（4/51，7.84%）呈高表達(dá)（圖 1）。癌組織中的 PLCE1 蛋白表達(dá)明顯高于癌旁正常組織（7.27 ± 2.89 vs. 3.12 ± 2.35，< 0.001）。

2.2 食管鱗癌與相應(yīng)癌旁正常組織中 PLCE1 基因啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)

MSP 結(jié)果（圖 2）顯示，食管鱗癌組織中完全甲基化、部分甲基化、非甲基化分別有 11、17、23 例，而在癌旁正常組織中分別為 28、19 和4 例。癌組織中 PLCE1 甲基化程度遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于癌旁正常組織（2= 20.892，< 0.001）。

2.3 食管鱗癌中 PLCE1 基因啟動(dòng)子甲基化與蛋白表達(dá)的關(guān)系

在 28 例 PLCE1 基因啟動(dòng)子出現(xiàn)甲基化現(xiàn)象的食管鱗癌組織中，有 13 例的 PLCE1 蛋白呈現(xiàn)低表達(dá)，15 例高表達(dá)；而在 23 例未出現(xiàn)甲基化現(xiàn)象的食管鱗癌組織中，僅有 4 例 PLCE1 蛋白呈現(xiàn)低表達(dá)，其余 19 例均為高表達(dá)。兩者之間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（2= 4.791，= 0.028）（表 2）。

圖 1 A、B 為食管鱗癌組織 PLCE1 表達(dá)，C、D 為正常食管組織 PLCE1 表達(dá)（A、C：×100 倍；B、D：× 400 倍）

Figure 1 Pictures A and B are cancer tissue, C and D are normal tissue (A, C: ×100 magnification; B, D: × 400 magnification)

Ca：癌組織；N：正常組織；M：甲基化引物擴(kuò)增產(chǎn)物；U：非甲基化引物擴(kuò)增產(chǎn)物

Figure 2 Expression of methylation of PLCE1 promoter in ESCC cancer tissue and normal tissue

表 2 食管鱗癌中 PLCE1 基因啟動(dòng)子甲基化與蛋白表達(dá)的關(guān)系

表 3 不同病理特征的食管鱗癌組織中 PLCE1 基因啟動(dòng)子甲基化的比較

2.4 不同病理特征的食管鱗癌組織中 PLCE1 基因啟動(dòng)子的甲基化狀態(tài)

分析 PLCE1 啟動(dòng)子甲基化情況與病理參數(shù)的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，食管鱗癌組織中 PLCE1 甲基化程度越低，其發(fā)生淋巴結(jié)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的可能性就越大（2= 7.248，= 0.027），且其 TNM 分期越高（2= 7.883，= 0.019）（表 3）。

2.5 甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑 5-aza-dC 對(duì)食管鱗癌細(xì)胞 PLCE1 啟動(dòng)子甲基化的影響

在 Eca109 和 EC9706 兩株 PLCE1 啟動(dòng)子低甲基化細(xì)胞株中，5-aza-dC 處理未見明顯影響PLCE1 的低甲基化狀態(tài)；而在 TE-1 和 Kyse150 兩株 PLCE1 啟動(dòng)子高甲基化細(xì)胞株中，5-aza-dC 處理后，PLCE1 非甲基化條帶在粗細(xì)和亮度上明顯超過(guò)甲基化條帶，可見 5-aza-dC 有效地抑制了 TE-1 和 Kyse150 的 PLCE1 甲基化程度（圖 3）。

2.6 甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑 5-aza-dC 對(duì)食管鱗癌細(xì)胞 PLCE1 蛋白表達(dá)的影響

PLCE1 蛋白在 Eca109、EC9706 中表達(dá)較高，而在 TE-1、Kyse150 中表達(dá)量很低，用甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑 5-aza-dC 處理后，Eca109、EC9706 的 PLCE1 蛋白表達(dá)并無(wú)明顯變化，而 TE-1 和Kyse150 中的 PLCE1 蛋白表達(dá)增高（圖 4），這與其基因啟動(dòng)子甲基化水平變化相對(duì)應(yīng)：Eca109 和 EC9706 細(xì)胞系在經(jīng)過(guò) 5-aza-dC 處理后，PLCE1 基因啟動(dòng)子甲基化水平幾乎未發(fā)生改變，因此其蛋白表達(dá)也幾乎無(wú)變化；TE-1 和 Kyse150 在經(jīng)過(guò) 5-aza-dC 處理后，PLCE1 基因啟動(dòng)子甲基化水平由部分甲基化變化為接近非甲基化，其蛋白表達(dá)也顯示提高。

可見 5-aza-dC 抑制了 PLCE1 甲基化程度后，其蛋白表達(dá)升高，即 PLCE1 的 DNA 甲基化反向影響著其蛋白表達(dá)。

3 討論

食管鱗癌的發(fā)生，是環(huán)境因素與遺傳因素長(zhǎng)久以來(lái)相互作用的結(jié)果。眾所周知，吸煙和大量酒精的攝入是食管鱗癌發(fā)生的危險(xiǎn)因素[7]。不同地區(qū)的一些特殊生活習(xí)慣也與食管鱗癌的發(fā)生有著不可推卸的關(guān)系。例如在東南亞，嚼檳榔增加了患食管鱗癌的可能性[8]。新疆哈薩克族人的一些生活習(xí)慣，例如喜食熏馬腸、各種奶制品、喝熱奶茶以及新鮮水果蔬菜攝入較少，使得哈族人群成為了食管鱗癌的一個(gè)高發(fā)人群。此外，遺傳因素對(duì)于食管鱗癌的發(fā)生也是必不可少的一個(gè)重要因素。

我們前期研究發(fā)現(xiàn)，新疆哈薩克族食管鱗癌組織中 PLCE1 蛋白表達(dá)遠(yuǎn)高于癌旁正常組織[6]，而且，PLCE1 蛋白表達(dá)的增加伴隨著癌變的進(jìn)展，在正常上皮組織、低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變組織、高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變組織及食管鱗癌組織中，PLCE1 蛋白表達(dá)量依次增高。本次實(shí)驗(yàn)檢測(cè)的 51 例食管鱗癌病例再次印證了之前的發(fā)現(xiàn)，癌組織中有 34 例 PLCE1 蛋白呈現(xiàn)高表達(dá)而在癌旁正常組織中只有 4 例（7.27 ± 2.89 vs. 3.12 ± 2.35，= 0.000）。

表觀遺傳學(xué)是基于當(dāng)基因的核苷酸序列未改變時(shí)，基因表達(dá)卻呈現(xiàn)可遺傳的變化，即基因型未改變而表型發(fā)生變化，且這種變化在發(fā)育和細(xì)胞增殖中能穩(wěn)定傳代[9-11]。其中 DNA 甲基化是最早發(fā)現(xiàn)也是目前最為常見的表觀修飾途徑[12]?，F(xiàn)如今人們已認(rèn)識(shí)到，DNA 甲基化能引起染色質(zhì)結(jié)構(gòu)、DNA 構(gòu)象、DNA 穩(wěn)定性及 DNA 與蛋白質(zhì)相互作用方式的改變，從而控制基因表達(dá)[13]。DNA 的異常甲基化與食管癌發(fā)生息息相關(guān)。一些分子的 DNA 甲基化率在正常食管上皮、Barrett’s 食管、Barrett’s 食管伴隨不典型增生、食管腺癌和食管鱗癌中是逐漸增加的[14]。

越來(lái)越多研究表明，PLCE1 與腫瘤發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切，有證據(jù)顯示 PLCE1 的單核苷酸多態(tài)性rs2274223 SNP 與胃癌發(fā)生相關(guān)[15-16]，在食管癌中 PLCE1 的表達(dá)還受到 micro-RNA 調(diào)控[17]，在結(jié)腸癌中，PLCE1 啟動(dòng)子高甲基化導(dǎo)致其蛋白低表達(dá)[18]，但并無(wú) PLCE1 在食管癌中的甲基化研究。本研究中我們首次發(fā)現(xiàn)，新疆哈薩克族食管鱗癌的癌旁正常組織的 PLCE1 基因啟動(dòng)子甲基化水平明顯高于癌組織（2= 20.892，= 0.000），這與蛋白表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)（2= 4.791，= 0.028），說(shuō)明在新疆哈薩克族食管鱗癌中，PLCE1 基因啟動(dòng)子的甲基化水平降低，是促使其蛋白表達(dá)增高的原因之一。進(jìn)一步探究它與臨床病理資料及預(yù)后的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)其與病人的性別、年齡及腫瘤大小沒(méi)有相關(guān)性，但是 PLCE1 甲基化水平越低，越容易發(fā)生淋巴結(jié)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移（2= 7.248，= 0.027），且 TNM 分期越高（2= 7.883，= 0.019）。

M：甲基化引物擴(kuò)增產(chǎn)物；U：非甲基化引物擴(kuò)增產(chǎn)物

Figure 3 Effect of 5-aza-dC on the methylation status of PLCE1 in ESCC cells

圖 4 5-aza-dC 對(duì)食管鱗癌細(xì)胞 PLCE1 蛋白表達(dá)的影響

Figure 4 Effect of 5-aza-dC on the protein status of PLCE1 in ESCC cells

通過(guò)檢測(cè) 4 株食管鱗癌細(xì)胞系中 PLCE1 的蛋白表達(dá)和基因啟動(dòng)子甲基化水平，我們發(fā)現(xiàn)2 株 PLCE1 蛋白表達(dá)高的細(xì)胞系 Eca109 和 EC9706 其啟動(dòng)子區(qū)甲基化水平要低于蛋白表達(dá)低的細(xì)胞系 TE-1 和 Kyse150，這印證了組織中 PLCE1 的蛋白表達(dá)與基因甲基化狀態(tài)的關(guān)系，提示食管鱗癌中 PLCE1 表達(dá)增高可能與其啟動(dòng)子區(qū)甲基化水平降低有關(guān)。隨后，當(dāng)我們用甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑 5-aza-dC 作用于這 4 株細(xì)胞系后，PLCE1 基因啟動(dòng)子處于未甲基化狀態(tài)的 2 株細(xì)胞 Eca109、EC9706 的 PLCE1 甲基化水平和蛋白表達(dá)水平幾乎未發(fā)生改變，而 TE-1 和 Kyse150 的 PLCE1 甲基化水平被減弱，其蛋白表達(dá)水平大大提高，進(jìn)一步提示了食管鱗癌中 PLCE1 表達(dá)增高與其啟動(dòng)子區(qū)甲基化水平降低有關(guān)，且甲基轉(zhuǎn)移酶在這一過(guò)程中起著促進(jìn)作用。

本研究闡明，在新疆哈薩克族食管鱗癌中 PLCE1 啟動(dòng)子低甲基化導(dǎo)致其蛋白高表達(dá)，且與腫瘤的淋巴結(jié)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及 TNM 分期相關(guān)，為干預(yù)食管鱗癌的發(fā)生發(fā)展提供了一個(gè)潛在的作用靶點(diǎn)，并為闡明 PLCE1 在食管鱗癌發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。

[1] Chen WQ, Zheng RS, Zeng HM, et al. Incidence and mortality of malignant tumors in China, 2011. China Cancer, 2015, 24(1):1-10. (in Chinese)

陳萬(wàn)青, 鄭榮壽, 曾紅梅, 等. 2011年中國(guó)惡性腫瘤發(fā)病和死亡分析. 中國(guó)腫瘤, 2015, 24(1):1-10.

[2] Wang M, Hao CQ, Zhao DL, et al. Distribution of esophageal squamous cell cancer and precursor lesions in high-risk areas, Linzhou in Henan province and Feicheng in Shandong province of China, 2005-2009. Chin J Prev Med, 2015, 49(8):677-682. (in Chinese)

王孟, 郝長(zhǎng)青, 趙德利, 等. 2005-2009年中國(guó)食管癌高發(fā)區(qū)河南省林州市、山東省肥城市食管癌及其癌前病變?nèi)巳悍植佳芯? 中華預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志, 2015, 49(8):677-682.

[3] Song C, Satoh T, Edamatsu H, et al. Differential roles of Ras and Rap1 in growth factor-dependent activation of phospholipase C epsilon. Oncogene, 2002, 21(53):8105-8113.

[4] Wang LD, Zhou FY, Li XM, et al. Genome-wide association study of esophageal squamous cell carcinoma in Chinese subjects identifies susceptibility loci at PLCE1 and C20orf54. Nat Genet, 2010, 42(9): 759-763.

[5] Wu C, Hu Z, He Z, et al. Genome-wide association study identifies three new susceptibility loci for esophageal squamous-cell carcinoma in Chinese populations. Nat Genet, 2011, 43(7):679-684.

[6] Chen YZ, Cui XB, Hu JM, et al. Overexpression of PLCE1 in Kazakh esophageal squamous cell carcinoma: implications in cancer metastasis and aggressiveness. APMIS, 2013, 121(10):908-918.

[7] Chung CS, Lee YC, Wang CP, et al. Secondary prevention of esophageal squamous cell carcinoma in areas where smoking, alcohol, and betel quid chewing are prevalent. J Formos Med Assoc, 2010, 109(6):408-421.

[8] Akhtar S. Areca nut chewing and esophageal squamous-cell carcinoma risk in Asians: a meta-analysis of case-control studies. Cancer Causes Control, 2013, 24(2):257-265.

[9] Esteller M. The necessity of a human epigenome project. Carcinogenesis, 2006, 27(6):1121-1125.

[10] Mulero-Navarro S, Esteller M. Epigenetic biomarkers for human cancer: the time is now. Crit Rev Oncol Hematol, 2008, 68(1):1-11.

[11] Kelly AD, Issa JJ. The promise of epigenetic therapy: reprogramming the cancer epigenome. Curr Opin Genet Dev, 2017, 42:68-77.

[12] Paska AV, Hudler P. Aberrant methylation patterns in cancer: a clinical view. Biochem Med (Zagreb), 2015, 25(2):161-176.

[13] Hoffman RM. Is DNA methylation the new guardian of the genome? Mol Cytogenet, 2017, 10:11.

[14] Kaz AM, Grady WM. Epigenetic biomarkers in esophageal cancer. Cancer Lett, 2014, 342(2):193-199.

[15] Wadhwa R, Song S, Lee JS, et al. Gastric cancer-molecular and clinical dimensions. Nat Rev Clin Oncol, 2013, 10(11):643-655.

[16] Mocellin S, Verdi D, Pooley KA, et al. Genetic variation and gastric cancer risk: a field synopsis and meta-analysis. Gut, 2015, 64(8):1209- 1219.

[17] Cui XB, Li S, Li TT, et al. Targeting oncogenic PLCE1 by miR-145 impairs tumor proliferation and metastasis of esophageal squamous cell carcinoma. Oncotarget, 2016, 7(2):1777-1795.

[18] Wang XL. Screening and identification of candidate tumor suppressor gene PLCE1 in colorectal cancer. Shanghai: Shanghai Jiao Tong University, 2009. (in Chinese)

王曉亮. 結(jié)直腸癌候選抑癌基因PLCE1的篩選及鑒定研究. 上海: 上海交通大學(xué), 2009.

Analysis of the status of PLCE1 promoter methylation in Kazakh esophageal squamous cell carcinoma

WANG Bin, PENG Hao, CHEN Yun-zhao

Department of Pathology, School of Medicine, Shihezi University, Xinjiang 832000, China

To explore the methylation status of PLCE1 promoter in ESCC.

51 cases of ESCC from Kazakh nationality were collected and examined by IHC and MSP. Western blot was used to detect the cellular protein.

The expression of PLCE1 protein in ESCC from Kazakh nationality tissue was higher and the methylation status was lower (< 0.001) than those in the normal tissues around. In the cancer tissues with high PLCE1 protein expression, the methylation level was lower than those with the low PLCE1 group (= 0.028). PLCE1 methylation was associated with lymph nodes metastasis (2= 7.242,= 0.027) and TNM stage (2= 7.883,= 0.019). The status of PLCE1 promoter methylation and protein expression were similarly inverse in sophageal squamous cell lines. Inhibition of PLCE1 methylation in TE-1 and Kyse150 cell lines by 5-aza-dC increased the protein expression of PLCE1.

The methylation status of PLCE1 promoter in ESCC is assiocated with the PLEC1 protein expression and lymph nodes metastasis and TNM stage.

Methylation; Esophageal squamous cell carcinoma; Phospholipase C epsilon 1; Methylated specific PCR

WANG Bin, Email: 814235427@qq.com

王彬，Email：814235427@qq.com

2018-07-23