嵌合抗原受體修飾T細(xì)胞（CAR-T細(xì)胞）制劑制備質(zhì)量管理規(guī)范

中國(guó)醫(yī)藥生物技術(shù)協(xié)會(huì)

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編者按

免疫細(xì)胞治療是近年來腫瘤治療的重點(diǎn)發(fā)展領(lǐng)域，其在臨床研究中顯示出良好的應(yīng)用前景，給腫瘤患者帶來了新的希望，成為學(xué)術(shù)界和產(chǎn)業(yè)界共同關(guān)注的焦點(diǎn)。其中嵌合抗原受體 T 細(xì)胞免疫療法（CAR-T 療法）因其在血液系統(tǒng)腫瘤的治療中展現(xiàn)出顯著效果而成為臨床研究的熱點(diǎn)。在免疫細(xì)胞治療研究的管理方面，中國(guó)醫(yī)藥生物技術(shù)協(xié)會(huì)于 2016 年制定頒布了《免疫細(xì)胞制劑制備質(zhì)量管理自律規(guī)范》，為免疫細(xì)胞臨床研究的規(guī)范化開展奠定了基礎(chǔ)。然而，CAR-T 細(xì)胞作為一類特殊的免疫細(xì)胞，其制備和質(zhì)量控制具有一定的特殊性，需遵循相關(guān)原則以保證 CAR-T 制劑的安全性和生物學(xué)效應(yīng)。

目前各機(jī)構(gòu)在 CAR-T 細(xì)胞制劑制備方面仍存在較大的差距，2017 年國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局發(fā)布了《細(xì)胞治療產(chǎn)品研究與評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則》，2018 年中國(guó)食品藥品檢定研究院發(fā)布了《CAR-T 細(xì)胞治療產(chǎn)品質(zhì)量控制檢測(cè)研究及非臨床研究考慮要點(diǎn)》，為 CAR-T 細(xì)胞制劑的制備提供了一定的技術(shù)指導(dǎo)。遵循《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》（GMP）是 CAR-T 細(xì)胞制劑制備的原則要求，如何幫助機(jī)構(gòu)正確理解 GMP 的基本原則，并將其應(yīng)用于 CAR-T 細(xì)胞制劑制備之中，進(jìn)一步加強(qiáng) CAR-T 細(xì)胞治療的質(zhì)量管理，規(guī)范細(xì)胞制備過程并保證 CAR-T 細(xì)胞制品在臨床研究和應(yīng)用時(shí)的質(zhì)量，是當(dāng)前需要解決的重要問題。

自 2016 年 12 月開始，中國(guó)醫(yī)藥生物技術(shù)協(xié)會(huì)組織業(yè)內(nèi)骨干醫(yī)療單位及專家參照 GMP、《免疫細(xì)胞制劑制備質(zhì)量管理自律規(guī)范》、《細(xì)胞治療產(chǎn)品研究與評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則》和《CAR-T 細(xì)胞治療產(chǎn)品質(zhì)量控制檢測(cè)研究及非臨床研究考慮要點(diǎn)》等相關(guān)規(guī)定和指導(dǎo)原則，以及國(guó)外相關(guān)組織的同類指南，啟動(dòng)了《嵌合抗原受體修飾 T 細(xì)胞（CAR-T 細(xì)胞）制劑制備質(zhì)量管理規(guī)范》（以下簡(jiǎn)稱《CAR-T 規(guī)范》）的起草工作，歷時(shí)一年零九個(gè)月，期間幾易其稿，組織大小研討會(huì)十余次，經(jīng)反復(fù)修改后形成了目前的《CAR-T 規(guī)范》。本規(guī)范提出了制備機(jī)構(gòu)開展 CAR-T 細(xì)胞制劑制備應(yīng)該遵守的基本要求，以及制劑制備各個(gè)環(huán)節(jié)的質(zhì)量要求，旨在幫助制備機(jī)構(gòu)能夠持續(xù)穩(wěn)定地制備出符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的CAR-T 細(xì)胞制劑，同時(shí)，該規(guī)范的實(shí)施情況也可作為機(jī)構(gòu)開展 CAR-T 細(xì)胞制劑制備能力評(píng)價(jià)的依據(jù)。

該規(guī)范由中國(guó)醫(yī)藥生物技術(shù)協(xié)會(huì)醫(yī)藥生物技術(shù)臨床應(yīng)用專業(yè)委員會(huì)牽頭起草。在規(guī)范起草過程中，天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院、北京博仁醫(yī)院、安徽未名細(xì)胞治療有限公司等單位積極參加編寫并提供了大力支持，中國(guó)食品藥品檢定研究院孟淑芳研究員給予了悉心指導(dǎo)，在此一并致謝，同時(shí)感謝在規(guī)范起草過程中參與討論并給予意見的醫(yī)療單位、企業(yè)以及專家們。

中國(guó)醫(yī)藥生物技術(shù)協(xié)會(huì)

嵌合抗原受體修飾T細(xì)胞（CAR-T細(xì)胞）制劑制備質(zhì)量管理規(guī)范

中國(guó)醫(yī)藥生物技術(shù)協(xié)會(huì)

目 次

前言……………………………………………………………………………………………………………… 388

引言……………………………………………………………………………………………………………… 388

1 范圍………………………………………………………………………………………………………… 389

2 規(guī)范性引用文件…………………………………………………………………………………………… 389

3 術(shù)語和定義………………………………………………………………………………………………… 389

4 基本原則…………………………………………………………………………………………………… 390

4.1 總體要求……………………………………………………………………………………………… 390

4.2 人員…………………………………………………………………………………………………… 390

4.3 物料…………………………………………………………………………………………………… 390

4.4 設(shè)施和設(shè)備…………………………………………………………………………………………… 391

5 載體制備…………………………………………………………………………………………………… 391

5.1 質(zhì)粒制備……………………………………………………………………………………………… 391

5.2 非病毒載體制備……………………………………………………………………………………… 391

5.3 病毒載體制備………………………………………………………………………………………… 391

6 CAR-T 細(xì)胞制備及質(zhì)量控制…………………………………………………………………………… 392

6.1 T 細(xì)胞的采集和分離………………………………………………………………………………… 392

6.2 CAR-T 細(xì)胞制備…………………………………………………………………………………… 392

6.3 CAR-T 細(xì)胞制劑的質(zhì)量控制……………………………………………………………………… 393

6.4 CAR-T 細(xì)胞凍存、運(yùn)輸與復(fù)蘇…………………………………………………………………… 393

6.5 CAR-T 細(xì)胞制劑的放行…………………………………………………………………………… 393

7 追溯……………………………………………………………………………………………………… 394

8 保密……………………………………………………………………………………………………… 394

參考文獻(xiàn)……………………………………………………………………………………………………… 394

前 言

本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T 1.1—2009《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1 部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫》給出的規(guī)則起草。

請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別這些專利的責(zé)任。

本標(biāo)準(zhǔn)由中國(guó)醫(yī)藥生物技術(shù)協(xié)會(huì)制定，由中國(guó)醫(yī)藥生物技術(shù)協(xié)會(huì)實(shí)施。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：中國(guó)醫(yī)藥生物技術(shù)協(xié)會(huì)醫(yī)藥生物技術(shù)臨床應(yīng)用專業(yè)委員會(huì)、天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院、北京博仁醫(yī)院、安徽未名細(xì)胞治療有限公司。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：任秀寶、孫倩、童春容、劉振云、孫艷、王偉、郝希山。

本標(biāo)準(zhǔn)為首次發(fā)布。

引 言

近年來，免疫治療經(jīng)歷了一系列突飛猛進(jìn)的發(fā)展，以特異性過繼免疫細(xì)胞療法及免疫檢查點(diǎn)抗體療法為代表的新型免疫治療技術(shù)因其在臨床研究中取得的顯著療效而成為學(xué)術(shù)界和產(chǎn)業(yè)界共同關(guān)注的焦點(diǎn)。其中，嵌合抗原受體 T 細(xì)胞免疫療法（chimeric antigen receptor T-cell immunotherapy，CAR-T 療法）因其在白血病、淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤等病種的治療中展現(xiàn)出顯著的治療效果而成為國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。隨著我國(guó)對(duì) CAR-T 技術(shù)的研究不斷深入，國(guó)內(nèi)企業(yè)的積極布局和產(chǎn)業(yè)鏈的延伸，我國(guó)的CAR-T細(xì)胞治療技術(shù)也在緊隨國(guó)際趨勢(shì)的發(fā)展。

遵循《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》（GMP）是 CAR-T 細(xì)胞制劑制備的原則要求。此前，中國(guó)醫(yī)藥生物技術(shù)協(xié)會(huì)已經(jīng)制定了《免疫細(xì)胞制劑制備質(zhì)量管理自律規(guī)范》，幫助機(jī)構(gòu)在免疫細(xì)胞制劑制備過程中避免污染、交叉污染、混淆及差錯(cuò)，最大限度地保證免疫細(xì)胞制劑的安全性、生物學(xué)效應(yīng)。但 CAR-T 細(xì)胞作為一類特殊的免疫細(xì)胞，其制備和質(zhì)量控制具有特殊性。為了適應(yīng)我國(guó) CAR-T 細(xì)胞治療產(chǎn)業(yè)的需要，加強(qiáng) CAR-T 細(xì)胞治療的質(zhì)量管理，規(guī)范細(xì)胞制備過程，保證 CAR-T 細(xì)胞制劑在臨床研究和應(yīng)用時(shí)的質(zhì)量，促進(jìn)國(guó)內(nèi)外同行間的交流，中國(guó)醫(yī)藥生物技術(shù)協(xié)會(huì)在已有《免疫細(xì)胞制劑制備質(zhì)量管理自律規(guī)范》的基礎(chǔ)上，根據(jù) CAR-T 細(xì)胞的特殊性，制定《CAR-T 細(xì)胞制劑制備質(zhì)量管理規(guī)范》。CAR-T 細(xì)胞制劑制備過程中涉及到的人員、設(shè)備、樣品儲(chǔ)存與運(yùn)輸、標(biāo)識(shí)與追溯系統(tǒng)等其他要求，應(yīng)參照中國(guó)醫(yī)藥生物技術(shù)協(xié)會(huì)制定的《免疫細(xì)胞制劑制備質(zhì)量管理自律規(guī)范》執(zhí)行。

1 范圍

1.1 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了CAR-T 細(xì)胞制劑制備機(jī)構(gòu)在制備過程中包括從載體制備、細(xì)胞采集以及細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)/轉(zhuǎn)染、擴(kuò)增、收集、凍存等過程中須遵循的基本要求和原則，保證CAR-T 細(xì)胞制劑的安全性和生物學(xué)效應(yīng)。

1.2 本標(biāo)準(zhǔn)適用于CAR-T 細(xì)胞制劑制備的所有階段。

2 規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

《中華人民共和國(guó)藥典》（三部）

《免疫細(xì)胞制劑制備質(zhì)量管理自律規(guī)范》（中生協(xié)字〔2016〕035 號(hào)）

3 術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

3.1

嵌合抗原受體 T 細(xì)胞（CAR-T 細(xì)胞） chimeric antigen receptor T cell, CAR-T cell

經(jīng)過基因工程修飾的，可表達(dá)被導(dǎo)入的含有抗原識(shí)別片段、T 細(xì)胞受體活化分子、共刺激信號(hào)等信號(hào)分子的CAR 基因的T 細(xì)胞。

3.2

外周血單個(gè)核細(xì)胞 peripheral blood mononuclear cell, PBMC

血液中具有單個(gè)核的細(xì)胞，主要包括淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞和少量其他細(xì)胞類型。

3.3

質(zhì)粒 plasmid

一類存在于細(xì)菌和真菌細(xì)胞中獨(dú)立于染色體DNA 而自主復(fù)制的共價(jià)、閉合、環(huán)狀DNA 分子，通常攜帶一定數(shù)量的基因，是基因工程最常見的運(yùn)載體。

3.4

目的基因 target gene

人工構(gòu)建的具有明確功能的基因或基因片段。

3.5

載體 vector

在基因工程重組DNA 技術(shù)中將DNA 片段（目的基因）轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞中進(jìn)行復(fù)制和表達(dá)的工具。

注：常用的載體包括質(zhì)粒、病毒等。

3.6

轉(zhuǎn)導(dǎo) transduction

借助病毒等方法將外源性遺傳物質(zhì)（DNA 或RNA）導(dǎo)入細(xì)胞進(jìn)行表達(dá)的過程。

3.7

轉(zhuǎn)染 transfection

通過非病毒載體（如質(zhì)粒）將外源遺傳物質(zhì)（DNA 或RNA）植入細(xì)胞的過程。

3.8

凍存液 cryoprotectant

能保護(hù)細(xì)胞在冷凍和復(fù)蘇過程不受損害的溶液或試劑。

3.9

標(biāo)識(shí) label

粘貼或附著在對(duì)象上的用于區(qū)分不同對(duì)象的標(biāo)記、注釋或條碼。

3.10

細(xì)胞批次 cell batch

取自個(gè)體的細(xì)胞經(jīng)單次細(xì)胞制備工藝過程制成的一批細(xì)胞制劑。

4 基本原則

4.1 總體要求

CAR-T 細(xì)胞制劑的制備包括質(zhì)粒的制備、病毒的制備、樣本的采集、接收、處理、細(xì)胞刺激、轉(zhuǎn)導(dǎo)/轉(zhuǎn)染、擴(kuò)增、收獲、質(zhì)量檢測(cè)、凍存和運(yùn)輸?shù)热^程。制備機(jī)構(gòu)應(yīng)建立健全CAR-T 細(xì)胞制劑制備的質(zhì)量管理體系，結(jié)合CAR-T 細(xì)胞制劑制備的特殊工藝，對(duì)各個(gè)操作環(huán)節(jié)以及環(huán)境和人員等嚴(yán)格要求并實(shí)施，最終產(chǎn)品應(yīng)符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

4.2 人員

4.2.1 制備機(jī)構(gòu)應(yīng)配備與其規(guī)模相適應(yīng)的CAR-T 細(xì)胞制劑制備人員和質(zhì)量檢測(cè)人員，操作人員應(yīng)具備基本的專業(yè)知識(shí)，并接受特定的專業(yè)技術(shù)培訓(xùn)后方可上崗。病毒和細(xì)胞制備技術(shù)人員身體健康無傳染性疾病，能熟練掌握無菌操作技能，并具備病毒制備或人免疫細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)，其職稱、學(xué)歷、經(jīng)歷、資格證書、繼續(xù)教育與健康記錄，應(yīng)建檔保存。

4.2.2 建立人員衛(wèi)生操作規(guī)程和自我防護(hù)規(guī)程，最大限度地降低人員對(duì)細(xì)胞制備造成污染以及操作人員自我感染的風(fēng)險(xiǎn)。操作規(guī)程應(yīng)包括與健康、衛(wèi)生習(xí)慣及人員著裝相關(guān)的內(nèi)容，以及操作過程中避免交叉污染和污物正確處理方法等內(nèi)容。

4.3.2 維修人員或其他非專業(yè)人員進(jìn)入制備區(qū)和質(zhì)控區(qū)應(yīng)經(jīng)過培訓(xùn)和批準(zhǔn)。

4.3 物料

4.3.1 CAR-T 細(xì)胞制劑制備所用的物料是指制備中所使用的試劑耗材、生物活性因子以及與細(xì)胞制劑直接接觸的包裝材料及外包裝材料等。

4.3.2 CAR-T 細(xì)胞制劑制備所用的樣本及物料應(yīng)符合相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。進(jìn)口物料應(yīng)符合國(guó)家相關(guān)的進(jìn)口管理規(guī)定。細(xì)胞制劑制備中使用的物料管理應(yīng)參照《中華人民共和國(guó)藥典》中的《生物制品生產(chǎn)用原材料及輔料質(zhì)量控制規(guī)程》實(shí)行管理。物料供應(yīng)商應(yīng)有相應(yīng)的資質(zhì)，并提供證明文件。

4.3.3 培養(yǎng)過程中對(duì)培養(yǎng)基、活性因子等外源蛋白的要求如下：

a) 所有使用的培養(yǎng)基、活性因子等外源蛋白應(yīng)有明確的來源及批號(hào)，應(yīng)有質(zhì)量檢定合格報(bào)告；

b) CAR-T 細(xì)胞體外擴(kuò)增培養(yǎng)應(yīng)盡量避免動(dòng)物或人源物質(zhì)如血清等制品的使用，若必須使用，需要開展相關(guān)研究，證明使用的必要性和合理性；嚴(yán)禁使用疫病流行區(qū)來源和未經(jīng)過安全性驗(yàn)證的動(dòng)物血清等制品。

4.3.4 轉(zhuǎn)導(dǎo)/轉(zhuǎn)染過程中所使用的培養(yǎng)皿或培養(yǎng)袋等耗材和細(xì)胞因子等均需符合相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

4.3.5 制備機(jī)構(gòu)應(yīng)建立物料檢驗(yàn)和放行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)生物活性試劑，制備機(jī)構(gòu)應(yīng)有相應(yīng)措施確定有效期和保存條件，并在有效期內(nèi)使用。

4.3.6 制備機(jī)構(gòu)自制的試劑（如血漿、抗原等），應(yīng)建立質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、編號(hào)及批號(hào)的編制操作規(guī)程，并經(jīng)檢驗(yàn)合格后使用，每種物料均應(yīng)編制唯一的編號(hào)，并有制備記錄。

4.4 設(shè)施和設(shè)備

4.4.1 CAR-T 細(xì)胞制劑制備場(chǎng)所按照不同工藝應(yīng)至少包括質(zhì)粒制備區(qū)、病毒制備區(qū)、細(xì)胞制備區(qū)，質(zhì)控區(qū)（支原體測(cè)定、內(nèi)毒素測(cè)定、流式細(xì)胞儀檢測(cè)和分子生物學(xué)等相關(guān)檢測(cè)）和儲(chǔ)存區(qū)（病毒儲(chǔ)存區(qū)、細(xì)胞儲(chǔ)存區(qū)），各個(gè)區(qū)域應(yīng)相對(duì)獨(dú)立。病毒制備區(qū)、病毒儲(chǔ)存區(qū)應(yīng)具有獨(dú)立的空調(diào)系統(tǒng)。制備機(jī)構(gòu)可根據(jù)實(shí)際情況合理分配和增加所需區(qū)域（留樣室、辦公室、資料檔案室、物料儲(chǔ)存室、氣體儲(chǔ)存室等）。

4.4.2 制備機(jī)構(gòu)應(yīng)根據(jù)工藝要求，對(duì)各功能區(qū)合理設(shè)計(jì)、布局和使用，應(yīng)設(shè)立潔凈區(qū)，潔凈區(qū)的設(shè)計(jì)、建設(shè)、管理、進(jìn)出、使用、清潔、消毒、環(huán)境檢測(cè)等參見藥品GMP 規(guī)范無菌藥品附錄。

4.4.3 載體的制備應(yīng)在C 級(jí)背景下A 級(jí)潔凈度級(jí)別的環(huán)境中進(jìn)行，載體在非密閉條件下的除菌過濾和灌裝應(yīng)在B 級(jí)背景下A 級(jí)潔凈度級(jí)別的環(huán)境中進(jìn)行；CAR-T 細(xì)胞制劑制備過程中與細(xì)胞有關(guān)的操作，如細(xì)胞分離、轉(zhuǎn)導(dǎo)/轉(zhuǎn)染、擴(kuò)增、收獲等應(yīng)在非密閉條件下的操作應(yīng)在B 級(jí)背景下A 潔凈度級(jí)別的環(huán)境中進(jìn)行。

4.4.4 制備機(jī)構(gòu)應(yīng)設(shè)置用于制備感染性樣本的獨(dú)立物理空間，設(shè)立獨(dú)立的空調(diào)系統(tǒng)。使用后的器具和相關(guān)物品應(yīng)經(jīng)過滅活處理后再移出該區(qū)域。感染性樣本與非感染性樣本的處理及制備不得使用同一設(shè)備。

5 載體制備

5.1 質(zhì)粒制備

5.1.1 質(zhì)粒應(yīng)序列信息明確，并經(jīng)過鑒定和確認(rèn)。質(zhì)粒菌種應(yīng)采取種子庫系統(tǒng)，并按照《中國(guó)藥典》相關(guān)要求完成菌種庫的檢定。菌種建庫過程應(yīng)符合藥品GMP 規(guī)范，同時(shí)應(yīng)有明確來源和批次信息，并有詳細(xì)記錄。

5.1.2 質(zhì)粒的質(zhì)量應(yīng)經(jīng)過檢測(cè)，包括但不限于：

a) 純度：超螺旋型的含量，細(xì)菌基因組DNA、RNA和蛋白殘留量；

b) 無菌試驗(yàn)；

c) 內(nèi)毒素試驗(yàn)；

d) 酶切鑒定；

e) 基因測(cè)序；

f) 如工藝中使用有潛在危險(xiǎn)性的物質(zhì)，則需做物質(zhì)殘余量的測(cè)定。

5.2 非病毒載體制備

非病毒載體（包括但不限于DNA、RNA、蛋白質(zhì)）應(yīng)有明確的來源、結(jié)構(gòu)和遺傳特性，制備過程應(yīng)符合藥品GMP 標(biāo)準(zhǔn)，達(dá)到相應(yīng)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的要求。不得含有支原體、細(xì)菌及病毒等其他任何外源因子，內(nèi)毒素應(yīng)控制在限定范圍內(nèi)；根據(jù)所選擇載體類型不同，參見《細(xì)胞治療產(chǎn)品研究與評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則》（試行）、《人基因治療研究和制劑質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則》、《人用重組DNA 制品質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則》、《人用單克隆抗體質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則》等。

5.3 病毒載體制備

5.3.1 病毒包裝細(xì)胞系應(yīng)采取種子庫系統(tǒng)，建立主細(xì)胞庫和工作細(xì)胞庫，并按照《中國(guó)藥典》相關(guān)要求完成細(xì)胞庫的檢定。細(xì)胞建庫過程應(yīng)符合藥品GMP 規(guī)范，有明確來源和批次信息，并有詳細(xì)記錄。

5.3.2 病毒包裝所用細(xì)胞系的細(xì)胞培養(yǎng)液應(yīng)成分明確并具有溯源性，使用人或動(dòng)物源性成分，如血清、胰蛋白酶或其他生物學(xué)活性物質(zhì)，應(yīng)具有這些成分的來源、批號(hào)、質(zhì)量控制、檢測(cè)結(jié)果和質(zhì)量保證的相關(guān)信息，應(yīng)不得含有任何病毒等外源因子。

5.3.3 每一批用于轉(zhuǎn)導(dǎo)/轉(zhuǎn)染的病毒應(yīng)經(jīng)過檢測(cè)，包括但不限于：

a) 鑒別試驗(yàn)；

b) 復(fù)制型病毒（RCR/RCL）檢測(cè)（生產(chǎn)時(shí)的批次和凍存復(fù)蘇時(shí)的批次）；

c) 無菌試驗(yàn)；

d) 內(nèi)毒素檢測(cè)；

e) 支原體檢測(cè)；

f) 殘留量測(cè)定：應(yīng)根據(jù)生產(chǎn)工藝及成品的添加成分，對(duì)有潛在危險(xiǎn)性的成分進(jìn)行殘留量檢測(cè)；

g) 病毒滴度測(cè)定；

h) 效力試驗(yàn)：插入基因的表達(dá)水平測(cè)定及生物學(xué)活性測(cè)定。

5.3.4 應(yīng)避免病毒載體反復(fù)凍融，病毒應(yīng)儲(chǔ)存于合適的環(huán)境中并進(jìn)行穩(wěn)定性研究，確定使用期限并在有效期限內(nèi)使用。每批病毒應(yīng)編制唯一的批號(hào)，并建立病毒的出入登記記錄制度。

6 CAR-T 細(xì)胞制備及質(zhì)量控制

6.1 T 細(xì)胞的采集和分離

6.1.1 制備機(jī)構(gòu)應(yīng)建立供者采集標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行細(xì)胞采集應(yīng)具備相應(yīng)的資質(zhì)，應(yīng)使用全自動(dòng)血細(xì)胞分離機(jī)，按單核細(xì)胞分離程序，采集外周單個(gè)核細(xì)胞富集血，在技術(shù)上無法實(shí)現(xiàn)采集外周血單個(gè)核細(xì)胞富集血的情況下，可考慮靜脈血采集方案。根據(jù)制備要求對(duì)采集的外周血進(jìn)行單個(gè)核細(xì)胞的分離及T 細(xì)胞的分選，并對(duì)所分選出的T 細(xì)胞進(jìn)行活化。

6.1.2 采集管路應(yīng)使用一次性消耗品，血細(xì)胞分離機(jī)應(yīng)定期進(jìn)行清潔和檢測(cè)。

6.1.3 在符合潔凈級(jí)別要求的操作間分離PBMC，根據(jù)工藝要求再進(jìn)一步確定是否分選特定細(xì)胞亞群進(jìn)行轉(zhuǎn)導(dǎo)/轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)導(dǎo)/轉(zhuǎn)染前進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)及細(xì)胞存活率測(cè)定。

6.1.4 傳染性病毒檢測(cè)陽性患者的T 細(xì)胞應(yīng)在感染性樣本制備區(qū)進(jìn)行細(xì)胞分離、培養(yǎng)、收集，完成制備過程。操作完畢應(yīng)徹底清場(chǎng)、并應(yīng)驗(yàn)證確認(rèn)無該次操作殘留感染風(fēng)險(xiǎn)物后方可進(jìn)行后續(xù)供者的樣品制備。

6.2 CAR-T 細(xì)胞制備

6.2.1 樣本送達(dá)時(shí)應(yīng)附細(xì)胞制備申請(qǐng)單，內(nèi)容包括但不限于：

a) 患者姓名縮寫、篩選號(hào)或入組編號(hào)或其他唯一識(shí)別碼；

b) 患者臨床診斷，腫瘤特異性靶點(diǎn)信息；

c) 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的結(jié)果：血常規(guī)及分類、HIV、HCV、HBV、EBV、CMV、HTLV、梅毒、肝腎功能、凝血檢測(cè)；如果是異體治療回輸，應(yīng)做ABO 血型、Rh 血型配型以及HLA 配型檢測(cè)；

d) 治療方案：細(xì)胞的種類、治療次數(shù)、回輸方式等；

e) 知情同意書。

6.2.2 CAR-T 細(xì)胞制劑制備應(yīng)按照經(jīng)過驗(yàn)證后批準(zhǔn)的操作規(guī)程的要求進(jìn)行，并有相關(guān)記錄。

6.2.3 在感染性樣本操作區(qū)內(nèi)，操作人員應(yīng)穿戴該區(qū)域?qū)Ｓ玫姆雷o(hù)服。

6.2.4 在細(xì)胞培養(yǎng)耗材及培養(yǎng)箱上進(jìn)行標(biāo)識(shí)，并采取措施避免交叉污染。

6.2.5 操作前應(yīng)檢查所領(lǐng)用的包裝材料正確無誤，核對(duì)包裝產(chǎn)品和所用包裝材料的名稱、規(guī)格、數(shù)量、質(zhì)量狀態(tài)，且與操作規(guī)程相符。

6.2.6 活化T 細(xì)胞所采用的包被抗體或磁珠抗體應(yīng)符合相關(guān)質(zhì)量要求。

6.2.7 細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)/轉(zhuǎn)染主要包括非病毒轉(zhuǎn)染和病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)兩種方式，應(yīng)確認(rèn)基因?qū)胂到y(tǒng)并對(duì)其進(jìn)行驗(yàn)證，建立關(guān)鍵步驟控制點(diǎn)。

6.2.8 細(xì)胞擴(kuò)增過程中每更換一次培養(yǎng)體系應(yīng)準(zhǔn)確計(jì)數(shù)，應(yīng)根據(jù)質(zhì)量要求對(duì)細(xì)胞濃度及培養(yǎng)時(shí)間進(jìn)行調(diào)整。

6.2.9 CAR-T 制劑的收獲分為新鮮劑型和凍存劑型，凍存宜采用全封閉凍存袋的方式，在氣相液氮儲(chǔ)存環(huán)境下儲(chǔ)存。

6.2.10 每批次細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)束后，應(yīng)進(jìn)行清場(chǎng)，制備場(chǎng)所和設(shè)備應(yīng)沒有與本次制備有關(guān)的物料、產(chǎn)品、記錄等遺留。

6.2.11 應(yīng)建立CAR-T 細(xì)胞制劑批號(hào)編制規(guī)程。每批細(xì)胞制劑應(yīng)編制唯一的批號(hào)，并建立出入登記記錄制度。

6.2.12 應(yīng)避免出現(xiàn)任何偏離工藝規(guī)程或操作規(guī)程的偏差，如出現(xiàn)偏差，應(yīng)按照偏差處理操作規(guī)程執(zhí)行。

6.2.13 制備機(jī)構(gòu)應(yīng)建立CAR-T 細(xì)胞制劑留樣操作規(guī)程，留樣應(yīng)至少保存至使用結(jié)束后三個(gè)月。

6.3 CAR-T 細(xì)胞制劑的質(zhì)量控制

6.3.1 制備機(jī)構(gòu)應(yīng)具有CAR-T 細(xì)胞制劑的檢測(cè)能力，并配備相關(guān)專業(yè)技術(shù)人員和設(shè)備，建立制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，確立制劑質(zhì)量檢驗(yàn)操作規(guī)程，所有檢測(cè)方法應(yīng)經(jīng)過驗(yàn)證。

6.3.2 CAR-T 細(xì)胞制劑的質(zhì)量要求：

a) 應(yīng)進(jìn)行無菌試驗(yàn)和支原體檢測(cè)；

b) 應(yīng)進(jìn)行內(nèi)毒素檢測(cè)；

c) 應(yīng)對(duì)細(xì)胞存活率和回輸數(shù)量進(jìn)行檢測(cè)；

d) 應(yīng)對(duì)終產(chǎn)品中CAR-T 細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)/轉(zhuǎn)染率、免疫表型進(jìn)行檢測(cè)；

e) 應(yīng)檢測(cè)CAR-T 細(xì)胞制劑對(duì)特異性腫瘤細(xì)胞的殺傷作用；

f) 病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)/轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞應(yīng)進(jìn)行RCR/RCL 檢測(cè)；

g) 應(yīng)進(jìn)行CAR-T 細(xì)胞的基因拷貝數(shù)檢查（VCN）；

h) 對(duì)于培養(yǎng)后不經(jīng)凍存，直接回輸?shù)腃AR-T 制劑，應(yīng)加強(qiáng)培養(yǎng)的全過程質(zhì)量控制，設(shè)置合理的取樣點(diǎn)，并采用合理的快速檢測(cè)方法進(jìn)行質(zhì)量控制；

i) 如果細(xì)胞培養(yǎng)基內(nèi)添加成分可能會(huì)對(duì)細(xì)胞制劑質(zhì)量或安全性產(chǎn)生影響，應(yīng)對(duì)培養(yǎng)基及其他添加成分殘余量進(jìn)行檢測(cè)，如細(xì)胞因子等；

j) 使用磁珠抗體刺激T 細(xì)胞的，應(yīng)檢測(cè)制劑中的殘余磁珠量。

6.3.3 制備機(jī)構(gòu)應(yīng)在CAR-T 細(xì)胞制劑制備過程中開展質(zhì)量檢測(cè)，制劑的檢驗(yàn)應(yīng)由制備機(jī)構(gòu)負(fù)責(zé)人指定有資質(zhì)的人員進(jìn)行。制備機(jī)構(gòu)可以委托有資質(zhì)的第三方開展相關(guān)質(zhì)量檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果應(yīng)有質(zhì)量負(fù)責(zé)人或質(zhì)量受權(quán)人簽字審核。

6.4 CAR-T 細(xì)胞凍存、運(yùn)輸與復(fù)蘇

6.4.1 制備機(jī)構(gòu)應(yīng)建立CAR-T 細(xì)胞的凍存和復(fù)蘇操作規(guī)程，在規(guī)定的溫度范圍內(nèi)儲(chǔ)存細(xì)胞。應(yīng)對(duì)凍存工藝（包括凍存液和凍存容器等）和復(fù)蘇工藝進(jìn)行驗(yàn)證，驗(yàn)證項(xiàng)目宜包括生物學(xué)效力、細(xì)胞純度、細(xì)胞特性、活細(xì)胞數(shù)及比率、功能細(xì)胞數(shù)和安全性相關(guān)的內(nèi)容等。

6.4.2 應(yīng)建立CAR-T 細(xì)胞制劑運(yùn)輸?shù)臉?biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程、運(yùn)輸方式等應(yīng)經(jīng)過驗(yàn)證。

6.5 CAR-T 細(xì)胞制劑的放行

6.5.1 制備機(jī)構(gòu)應(yīng)建立CAR-T 細(xì)胞制劑放行的操作規(guī)程，符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的CAR-T 細(xì)胞制劑由質(zhì)量管理負(fù)責(zé)人或質(zhì)量受權(quán)人批準(zhǔn)后方可放行。

6.5.2 CAR-T 細(xì)胞制劑經(jīng)放行后方可進(jìn)行回輸。

6.5.3 每批次的CAR-T 細(xì)胞制劑放行檢測(cè)項(xiàng)目應(yīng)至少包括：無菌檢測(cè)、支原體檢測(cè)、內(nèi)毒素檢測(cè)、細(xì)胞存活率、細(xì)胞數(shù)量、非T 細(xì)胞表型、效應(yīng)細(xì)胞比率、CAR 轉(zhuǎn)導(dǎo)/轉(zhuǎn)染效率、CAR 基因拷貝數(shù)、復(fù)制型

病毒以及可能的毒性物質(zhì)殘留等。

6.5.4 如CAR-T 細(xì)胞制劑質(zhì)制備后需立即進(jìn)行回輸，可采用經(jīng)過驗(yàn)證的快速檢測(cè)方法。但應(yīng)建立規(guī)程，規(guī)定采用快速檢測(cè)方法放行后，使用現(xiàn)行通用檢測(cè)方法檢驗(yàn)出現(xiàn)不合格結(jié)果時(shí)采取的措施。

7 追溯

7.1 應(yīng)建立完整的細(xì)胞制備記錄系統(tǒng)、標(biāo)識(shí)標(biāo)簽系統(tǒng)和免疫細(xì)胞制劑編碼系統(tǒng)，以便于CAR-T 細(xì)胞制劑的辨識(shí)并防止制劑混雜。記錄和標(biāo)識(shí)應(yīng)遵循相關(guān)法律和規(guī)范的要求。

7.2 細(xì)胞制備記錄包括每天的細(xì)胞狀況、細(xì)胞數(shù)量、轉(zhuǎn)導(dǎo)/轉(zhuǎn)染條件、細(xì)胞因子濃度等具體信息。標(biāo)識(shí)系統(tǒng)應(yīng)記錄患者信息、細(xì)胞制劑名稱、批號(hào)、收獲日期及時(shí)間、規(guī)格（細(xì)胞數(shù)量/體積）、儲(chǔ)存條件、效期等。

7.3 每個(gè)患者的信息和操作全過程應(yīng)雙人復(fù)核。

7.4 每份CAR-T 細(xì)胞制劑應(yīng)編制唯一的編碼。編碼應(yīng)能追溯到患者信息以及該細(xì)胞制劑操作和最終處理的所有記錄。應(yīng)建立相關(guān)程序保證新舊編碼能夠關(guān)聯(lián)。

7.5 轉(zhuǎn)移和運(yùn)輸記錄應(yīng)能追溯CAR-T 細(xì)胞制劑從一個(gè)機(jī)構(gòu)到另一個(gè)機(jī)構(gòu)的流轉(zhuǎn)過程。轉(zhuǎn)移和運(yùn)輸記錄應(yīng)包括：CAR-T 細(xì)胞制劑發(fā)放和接收的日期和時(shí)間、運(yùn)輸過程中的任何延誤或其他突發(fā)狀況引起的問題及相應(yīng)的處置記錄。

7.6 制備機(jī)構(gòu)應(yīng)建立不良反應(yīng)報(bào)告和收集制度，在對(duì)不良反應(yīng)進(jìn)行分析時(shí)，應(yīng)能追溯到所使用CAR-T 細(xì)胞制劑制備的相關(guān)記錄。

8 保密

37應(yīng)采取措施，防止病人的隱私信息被泄露。

[1] 中華人民共和國(guó)國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì). 藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范(2010年修訂)(衛(wèi)生部令第79號(hào)). 2011-01-17.

[2] 國(guó)家食品藥品監(jiān)管管理總局. 細(xì)胞治療產(chǎn)品研究與評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則(試行). 2017-12-18.

[3] 中國(guó)食品藥品檢定研究院. CAR-T細(xì)胞治療產(chǎn)品質(zhì)量控制檢測(cè)研究及非臨床研究考慮要點(diǎn). 中國(guó)藥事, 2018, 32(6):829-852.

10.3969/j.issn.1673-713X.2018.05.001