多西他賽注射液在不同pH溶媒中的穩(wěn)定性研究

鄧玉曉，劉葵葵，趙思太，孫晉瑞

（山東省藥學(xué)科學(xué)院 山東省化學(xué)藥物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 濟(jì)南 250101）

多西他賽（docetaxel）又名泰索帝、多西紫杉醇，主要用于治療晚期乳腺癌、卵巢癌、非小細(xì)胞肺癌，對(duì)頭頸部癌、小細(xì)胞肺癌、胃癌、胰腺癌、黑色素瘤等也有一定療效[1]。多西他賽屬紫杉烷類(lèi)抗腫瘤藥，它通過(guò)加強(qiáng)微管蛋白聚合作用和抑制微管解聚作用，形成穩(wěn)定的非功能性微管束，破壞腫瘤細(xì)胞的有絲分裂，達(dá)到抗腫瘤作用[2-3]。多西他賽的細(xì)胞內(nèi)濃度是紫杉醇的4倍，且在細(xì)胞內(nèi)滯留時(shí)間更長(zhǎng)，因此具有更強(qiáng)的抗腫瘤活性[4]。

目前，國(guó)內(nèi)外多西他賽的說(shuō)明書(shū)均標(biāo)示配制好的多西他賽注射用溶液應(yīng)在室溫及正常光線(xiàn)下，于4 h內(nèi)使用。多西他賽在酸性或堿性條件下結(jié)構(gòu)會(huì)發(fā)生開(kāi)環(huán)或重排[5]，而傳統(tǒng)溶媒0.9 %氯化鈉注射液和5 %葡萄糖注射液的pH均小于5.5[6]，經(jīng)檢測(cè)，0.9 %氯化鈉注射液的pH為5.40左右，5 %葡萄糖注射液的pH為4.0左右，導(dǎo)致藥物溶液穩(wěn)定性差。鑒于溶媒的pH對(duì)多西他賽的溶解度和穩(wěn)定性的影響和對(duì)臨床用藥造成的不便，特設(shè)計(jì)本實(shí)驗(yàn)內(nèi)容，意在考察多西他賽注射液與不同pH的溶媒配伍后的穩(wěn)定性，為多西他賽注射液的溶媒要求及溶媒的選擇提供一些實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

LC-20AT高效液相色譜儀（日本島津公司）；SPD-M20A二極管陣列檢測(cè)器（日本島津公司）；PB-10精密酸度計(jì)（賽多利斯）。

1.2 藥品

多西他賽對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)100666-201202）；多西他賽注射液（齊魯制藥，批號(hào)6L0062C50，規(guī)格1 ml:40 mg）；0.9 %氯化鈉注射液（辰欣藥業(yè)，批號(hào)1612240564，規(guī)格500 ml:4.5 g）；5 %葡萄糖注射液（山東齊都藥業(yè)，批號(hào)2C1611102，規(guī)格500 ml:25 g）；濃鹽酸（國(guó)藥集團(tuán)，批號(hào)20160301，含量36.0 %～38.0 %）；碳酸氫鈉（國(guó)藥集團(tuán)，AR，批號(hào)20161215）；其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備[7-8]

2.1.1 不同pH 0.9 %氯化鈉溶液和5 %葡萄糖溶液的制備 分別取0.9 %氯化鈉注射液和5 %葡萄糖注射液各7份，每份50 ml，用3.6 %稀鹽酸，5 %碳酸氫鈉水溶液分別調(diào)節(jié)pH至2.50，4.00，5.40，6.50，7.50，9.00，10.00。

2.1.2 陰性對(duì)照溶液的制備 取多西他賽注射液專(zhuān)用溶劑分別經(jīng)不同pH的0.9 %氯化鈉溶液或5 %葡萄糖溶液稀釋?zhuān)鳛殛幮詫?duì)照溶液。

2.1.3 對(duì)照品溶液 精密稱(chēng)取多西他賽對(duì)照品6.0 mg，置入10 ml量瓶，用流動(dòng)相定容，得濃度為0.6 mg/ml的多西他賽對(duì)照品溶液。

2.1.4 供試品溶液 根據(jù)多西他賽注射液的說(shuō)明書(shū)要求和臨床用藥情況，設(shè)計(jì)溶液配制方法：精密稱(chēng)取多西他賽注射液60.0 mg，用多西他賽注射液專(zhuān)用溶媒溶解后，置入100 ml量瓶，用不同pH的0.9 %氯化鈉溶液或5 %葡萄糖溶液定容，得濃度為0.6 mg/ml的多西他賽供試品溶液

2.2 含量測(cè)定[9-10]

2.2.1 色譜條件及專(zhuān)屬性 色譜柱：Intersil ODS-3；流動(dòng)相：乙腈/水=3/2；流速：1.0 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：230 nm；柱溫：25 ℃；進(jìn)樣量：20 μl。

在上述色譜條件下，用多西他賽專(zhuān)用溶劑、對(duì)照品溶液和供試品溶液分別進(jìn)樣檢測(cè)，理論板數(shù)以多西他賽峰計(jì)算不低于3000，拖尾因子為1.03。色譜圖見(jiàn)圖1。由圖可見(jiàn)，多西他賽的保留時(shí)間為7.3 min，多西他賽專(zhuān)用溶劑不影響多西他賽的含量檢測(cè)。

圖1 陰性對(duì)照溶液、多西他賽對(duì)照品溶液、供試品溶液的HPLC譜圖

2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備 精密量取多西他賽對(duì)照品溶液1 ml，置入2 ml量瓶，用流動(dòng)相定容，配成濃度為300 μg/ml的對(duì)照品溶液，精密稱(chēng)取多西他賽對(duì)照品4.0 mg，置入10 ml量瓶，用流動(dòng)相定容，然后倍半稀釋?zhuān)涑蓾舛葹?00，200，100 μg/ml的對(duì)照品溶液，分別按2.2.1項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣并記錄色譜。以多西他賽對(duì)照品濃度C（μg/ml）對(duì)峰面積A作線(xiàn)性回歸?；貧w方程為A=16 566C-9 017（R2=0.9996，n=5），多西他賽在100～600 μg/ml的濃度范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好。

2.2.3 精密度試驗(yàn) 取多西他賽對(duì)照品溶液低（100 μg/ml）、中（300 μg/ml）、高（600 μg/ml）3個(gè)濃度質(zhì)量控制（QC）樣品，平行進(jìn)行5樣本分析，連續(xù)測(cè)定3 d，根據(jù)隨行的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程，計(jì)算QC樣品的測(cè)得濃度，計(jì)算日內(nèi)和日間精密度。日內(nèi)精密度RSD為0.74 %，日間精密度RSD為1.35 %。表明該方法的精密度良好。

2.2.4 回收率試驗(yàn) 取多西他賽供試品溶液分別倍半稀釋?zhuān)貌煌琾H的0.9 %氯化鈉溶液或5 %葡萄糖溶液的低（100 μg/ml）、中（300 μg/ml）、高（600 μg/ml）3個(gè)濃度QC樣品，平行進(jìn)行5樣本分析，測(cè)定藥物峰面積，代入隨行的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程中計(jì)算測(cè)得濃度，與實(shí)際濃度進(jìn)行比較求得回收率。結(jié)果表明，該方法的回收率在98.12 %～101.54 %內(nèi)，RSD小于2 %，表明該方法穩(wěn)定可靠，符合要求。

2.2.5 穩(wěn)定性考察 在室溫正常光線(xiàn)條件下，多西他賽注射液與不同pH的0.9 %氯化鈉溶液或5 %葡萄糖溶液配伍后，分別于 0，2，4，6，8，10，12 h取樣，按2.2項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣，分別精密量取供試品溶液與對(duì)照品溶液20 μl進(jìn)樣，記錄色譜圖峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算含量。以0 h時(shí)的多西他賽含量為100 %，計(jì)算多西他賽百分含量隨時(shí)間的變化。結(jié)果見(jiàn)表1，表2。

表1 多西他賽注射液與不同pH 0.9 %氯化鈉溶液配伍后的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果/%

表2 多西他賽注射液與不同pH 5 %葡萄糖溶液配伍后的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果/%

由表1、表2可見(jiàn)，pH為6.50和7.50時(shí)，多西他賽注射液與0.9 %氯化鈉溶液配伍后，放置12 h后其含量下降RSD值分別為2.50 %和2.56 %（RSD＞2 %）；與5 %葡萄糖溶液配伍后，放置12 h后其含量下降RSD值分別為2.50 %和2.55 %（RSD＞2%）。結(jié)果表明，室溫正常光線(xiàn)條件下，pH為6.50和7.50時(shí)，多西他賽含量在配制后12 h才有明顯下降。

pH為5.40和9.00時(shí)，多西他賽注射液與0.9 %氯化鈉溶液配伍后，放置8 h后其含量下降RSD值分別為2.32 %和2.45 %（RSD＞2 %）；與5 %葡萄糖溶液配伍后，放置8 h后其含量下降RSD值分別為2.34 %和2.46 %（RSD＞2 %）。結(jié)果表明，室溫正常光線(xiàn)條件下，pH為5.40和9.00時(shí)，多西他賽含量在配置后8 h有明顯下降。

在H為4.00和10.00時(shí)，多西他賽注射液與0.9 %氯化鈉溶液配伍后，放置6 h后其含量下降RSD值分別為2.52 %和2.41 %（RSD＞2 %）；與5 %葡萄糖溶液配伍后，放置6 h后其含量下降RSD值分別為2.50 %和2.40 %（RSD＞2 %）。結(jié)果表明，室溫正常光線(xiàn)條件下，pH為4.00和10.00時(shí)，多西他賽含量在配置后6 h即有明顯下降。

pH為2.50時(shí)，多西他賽注射液與0.9 %氯化鈉溶液配伍后，放置4 h后其含量下降RSD值為2.52 %（RSD＞2 %）；與5 %葡萄糖溶液配伍后，放置4 h后其含量下降RSD值為2.53 %（RSD＞2 %）。結(jié)果表明，室溫正常光線(xiàn)條件下，pH為2.50時(shí)，多西他賽含量在配置后4 h即有明顯下降。

3 討論

我們參考了相關(guān)文獻(xiàn)[7-10]，考察了不同比例乙腈-水，甲醇-水，甲醇-乙腈-水系統(tǒng)作為流動(dòng)相時(shí)色譜峰情況，結(jié)果顯示，采用乙腈-水（3:2）為流動(dòng)相，色譜峰對(duì)稱(chēng)性好，達(dá)峰時(shí)間適當(dāng)，條件穩(wěn)定，主峰完全分離；波長(zhǎng)選擇方面，多西他賽在190，230 nm處均有最大吸收，為避免溶劑的末端吸收，選擇230 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

綜上所述，由于多西他賽的結(jié)構(gòu)原因，溶媒的pH會(huì)對(duì)多西他賽的溶解度和穩(wěn)定性造成較大影響。臨床應(yīng)用過(guò)程中，選擇pH 為6.50～7.50的溶媒或?qū)ΜF(xiàn)有溶媒的pH進(jìn)行適當(dāng)?shù)恼{(diào)整使其pH位于6.50～7.50之間，更有利于多西他賽注射液配伍后的存放與使用。