?；撬釋?duì)早期斷奶仔豬生長(zhǎng)性能和腸道健康的影響

馬婭君 張小龍 陳慶菊 盧昌文 唐志如

(西南大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，生物飼料與分子營(yíng)養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室，重慶400715)

仔豬生產(chǎn)是豬生產(chǎn)中最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)，是影響?zhàn)B豬生產(chǎn)效益的重要因素。近年來(lái)，隨著仔豬早期斷奶技術(shù)的推廣應(yīng)用，對(duì)仔豬飼養(yǎng)管理的要求也越來(lái)越高。由于仔豬的許多機(jī)能尚不成熟，早期斷奶仔豬的生長(zhǎng)性能受到限制，常常會(huì)表現(xiàn)出一系列的不良現(xiàn)象，如厭食或拒食、消化機(jī)能紊亂、腹瀉水腫、飼料利用率低和生長(zhǎng)遲滯等，導(dǎo)致“仔豬早期斷奶綜合征”，嚴(yán)重影響?zhàn)B豬產(chǎn)業(yè)[1]。谷氨酰胺(glutamine，Gln)作為斷奶仔豬的一種條件性氨基酸，能有效緩解早期斷奶仔豬的斷奶應(yīng)激，但因其價(jià)格昂貴，添加量多，實(shí)際生產(chǎn)中將大量增加成本[2]。?；撬?taurine，Tau)作為一種含量豐富的游離氨基酸(FAA)，具有抗氧化、調(diào)節(jié)脂類代謝、保護(hù)細(xì)胞、提高機(jī)體免疫和促進(jìn)腸道發(fā)育等功能，因其價(jià)格低廉，添加量少，在貓和家禽飼糧中已有應(yīng)用[3]。因此，本試驗(yàn)在斷奶仔豬飼糧中添加Tau和Gln，研究Tau對(duì)早期斷奶仔豬生長(zhǎng)性能和腸道健康的影響及其機(jī)制，對(duì)比Tau和Gln的添加效果，從而為進(jìn)一步將Tau應(yīng)用于早期斷奶仔豬生產(chǎn)實(shí)踐中提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

Tau和Gln購(gòu)自上海源聚生物科技有限公司，Tau(A3820)為藥用級(jí)，純度為99.0%；Gln(A0090)純度>98.5%。血清鈣(Ca)、磷(P)、總蛋白(total protein，TP)、白蛋白(albumin，ALB)、總膽固醇(total cholesterol，TC)、甘油三酯(triglycerides，TG)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)、一氧化氮(nitric oxide，NO)、過氧化氫酶(catalase，CAT)、堿性磷酸酶(alkaline phosphatase，AKP)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferase，AST)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(alanine aminotransferase，ALT)、一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)、抗超氧陰離子(anti superoxide anion，ASA)、乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase，LDH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase，GSH-Px)和總抗氧化能力(total antioxidant capacity，T-AOC)測(cè)定試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所；反轉(zhuǎn)錄試劑盒購(gòu)自生工生物工程股份有限公司；Trizol、熒光定量PCR試劑盒和SYBR Green Ⅰ均購(gòu)自Invitrogen(美國(guó))公司。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與基礎(chǔ)飼糧

試驗(yàn)于西南大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院動(dòng)物飼養(yǎng)基地進(jìn)行。采用單因素完全隨機(jī)設(shè)計(jì)，選擇(17±2)日齡斷奶、平均體重為(5.17±0.04) kg的健康榮昌內(nèi)三元“(長(zhǎng)×大)×榮昌”早期斷奶仔豬30頭，隨機(jī)分為3個(gè)組，每組10個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)1頭豬。對(duì)照組(CON組)飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗(yàn)組分別在基礎(chǔ)飼糧中添加0.1% Tau(T組)和1.0% Gln(G組)。CON和T組分別添加1.218 8%和1.147 6%丙氨酸以維持氮平衡。基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。試驗(yàn)期17 d，其中預(yù)試期3 d。

試驗(yàn)在全封閉豬舍進(jìn)行，試驗(yàn)前對(duì)豬舍進(jìn)行消毒，采用單欄飼喂，飼喂干粉料，每天喂料3次，自由采食和飲水。其他飼養(yǎng)管理措施、驅(qū)蟲及免疫接種按豬場(chǎng)常規(guī)程序進(jìn)行。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))

1)維生素預(yù)混料為每千克飼糧提供 Vitamin premix provided the following per kg of the diet：VA 2 017 IU，VD 208 IU，VE 14 IU，VK 0.49 mg，泛酸 pantothenic acid 10.1 mg，核黃酸 riboflavin 3.4 mg，葉酸 folic acid 0.29 mg，尼克酸 nicotinic acid 29.1 mg，硫胺素 thiamine 1.1 mg，VB65.7 mg，生物素 biotin 0.06 mg，VB120.017 mg。

2)微量元素預(yù)混料為每千克飼糧提供 Trace mineral premix provided the following per kg of the diet：ZnSO4·7H2O 268 mg，F(xiàn)eSO4·7H2O 323.33 mg，MnSO4·H2O 11.54 mg，CuSO4·5H2O 22.86 mg，KI 14.21 mg，Na2SeO328.37 mg。

3)消化能為計(jì)算值，其余為實(shí)測(cè)值。DE was a calculated value, while the others were measured values.

1.3 樣品采集

試驗(yàn)期間記錄耗料量和腹瀉情況；分別于試驗(yàn)第1和15天06:00喂料前空腹稱重，計(jì)算平均日增重(ADG)、平均日釆食量(ADFI)、料重比(F/G)及腹瀉率(diarrhea rate)。試驗(yàn)第15天早晨，從每組隨機(jī)抽取5頭豬，前腔靜脈采血10 mL，靜置1 h后于3 000 r/min、4 ℃離心8 min，移取血清，置于-20 ℃保存，用于血清指標(biāo)和氨基酸含量測(cè)定。采血后，屠宰取空腸中段約1 cm的腸壁2段，用0.9% NaCl溶液將其沖洗干凈，貼于濾紙上展平修剪，放入10%福爾馬林溶液中固定，石蠟包埋，連續(xù)切片，測(cè)定小腸絨毛高度和隱窩深度；用載玻片輕輕刮取空腸和回腸黏膜，置于液氮中冷凍，-80 ℃保存，用于相關(guān)基因相對(duì)表達(dá)量的測(cè)定。

1.4 測(cè)定指標(biāo)與方法

1.4.1 生長(zhǎng)性能和腹瀉率

根據(jù)以下公式計(jì)算生長(zhǎng)性能和腹瀉率：

平均日增重(g/d)=全期增重(g)/試驗(yàn)天數(shù)(d)；平均日采食量(g/d)=全期采食量(g)/試驗(yàn)天數(shù)(d)；料重比=飼料消耗(g)/增重(g)；腹瀉率(%)=100×腹瀉頭次數(shù)/

(仔豬頭數(shù)×試驗(yàn)天數(shù))。

1.4.2 血清指標(biāo)

按照試劑盒說明書測(cè)定血清生化、脂類和抗氧化指標(biāo)。血清氨基酸樣品用4%磺基水楊酸稀釋2倍，于16 000 r/min離心2 min，用0.22 μm濾膜過濾，采用日立L-8800型全自動(dòng)氨基酸分析儀測(cè)定血清氨基酸含量。每個(gè)樣品分析周期53 min，分析時(shí)有2個(gè)柱：分離柱(4.6 mm×60 mm)，洗脫液流速0.4 mL/min，柱溫70 ℃，柱壓10.627 MPa；反應(yīng)柱，茚三酮及茚三酮緩沖液流速0.35 mL/min，柱溫135 ℃，柱壓0.982 MPa。

1.4.3 腸道黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)

腸道黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)參照Wang等[4]方法進(jìn)行測(cè)定，簡(jiǎn)要程序如下：從固定液中取出樣品，乙醇脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，制作5 mm厚切片，蘇木精-伊紅(HE)染色后顯微鏡下觀察。利用OPTPro圖像處理軟件進(jìn)行絨毛高度和絨毛寬度等空腸黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)指標(biāo)的測(cè)定，雙盲法讀片，每張切片取5個(gè)視野進(jìn)行觀察。

1.4.4 腸道黏膜β-連環(huán)蛋白(β-catenin)和胰島再生源蛋白-3γ(Reg-3γ)mRNA相對(duì)表達(dá)量

用Total RNA Extractor(購(gòu)自上海生物工程有限公司)提取空腸和回腸黏膜總RNA，OD260 nm/OD280 nm在1.8～2.0的樣品進(jìn)行下一步試驗(yàn)，用M-MLV First Strand cDNA Synthesis Kit(購(gòu)自上海生物工程有限公司)進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄得到cDNA。

根據(jù)GenBank中豬的甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)、β-catenin和Reg-3γ基因序列，取保守區(qū)域設(shè)計(jì)引物，引物由生工生物工程股份有限公司合成，引物序列見表2。熒光定量PCR反應(yīng)體系：總體積為25 μL，其中Hotstart Fluo-PCR mix 12 μL，上、下游引物各1 μL(25 μmol/L)，cDNA 1 μL，ddH2O 10 μL。熒光定量PCR反應(yīng)條件：94 ℃預(yù)變性4 min，94 ℃變性30 s，63 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，共35個(gè)循環(huán)。每個(gè)樣品設(shè)3個(gè)重復(fù)。采用比較Ct法進(jìn)行相對(duì)定量表達(dá)差異的計(jì)算方法，目的基因的表達(dá)量為2-△△Ct，△△Ct=(Ct目的基因-Ct內(nèi)參基因)試驗(yàn)組-(Ct目的基因-Ct內(nèi)參基因)對(duì)照組，2-△△Ct表示的是試驗(yàn)組目的基因的表達(dá)量相對(duì)于對(duì)照組的變化倍數(shù)。

表2 引物序列

1.5 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Excel 2003和SAS 9.0軟件進(jìn)行整理和單因素方差分析(one-way ANOVA)，差異顯著者采用LSD法進(jìn)行多重比較。P<0.05為差異顯著。

2 結(jié) 果

2.1 生長(zhǎng)性能和腹瀉率

由表3可知，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)第1～7天，T和G組早期斷奶仔豬的腹瀉率分別降低26.08%和39.14%；試驗(yàn)第8～14天，腹瀉率分別降低29.65%和51.84%，G組效果優(yōu)于T組。

由表4可知，各組早期斷奶仔豬的初重?zé)o顯著差異(P>0.05)；T和G組的平均日增重和平均日采食量顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，G組的平均日增重和平均日采食量比T組分別提高4.11%和3.38%，但差異不顯著(P>0.05)；與對(duì)照組相比，T和G組的料重比均降低13.00%，但差異不顯著(P>0.05)。

表3 Tau對(duì)早期斷奶仔豬腹瀉率的影響

表4 Tau對(duì)早期斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響

同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)相同或無(wú)字母表示差異不顯著(P>0.05)，不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。下表同。

In the same row, values with the some or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05), while with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05). The same as below.

2.2 血清生化指標(biāo)

由表5可知，各組早期斷奶仔豬的血清ALB含量、AST和AKP活性差異顯著(P<0.05)；其中，T組的血清ALB含量顯著高于對(duì)照組和G組(P<0.05)；與對(duì)照組相比，T和G組的血清AST活性分別降低7.51%和11.17%，差異顯著(P<0.05)，G組顯著低于T組(P<0.05)；T和G組的血清AKP活性顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，T和G組之間無(wú)顯著差異(P>0.05)。T組的血清Ca含量分別比對(duì)照組和G組提高24.89%和14.12%，但差異不顯著(P>0.05)。與對(duì)照組相比，T和G組的血清P含量分別降低17.85%和12.50%，但差異不顯著(P>0.05)。

2.3 血清脂類指標(biāo)

由圖1可知，各組早期斷奶仔豬的血清TC含量無(wú)顯著差異(P>0.05)；與對(duì)照組相比，T和G組的血清TG含量顯著降低(P<0.05)，T和G組之間無(wú)顯著差異(P>0.05)。

2.4 血清抗氧化指標(biāo)

由表6可知，T組早期斷奶仔豬的血清SOD活性顯著高于對(duì)照組和G組(P<0.05)，G組和對(duì)照組之間無(wú)顯著差異(P>0.05)；T和G組的血清CAT活性顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，G組效果最好；與對(duì)照組相比，T和G組的血清T-AOC分別提高7.37%和8.27%，NO含量分別降低8.60%和8.52%，MDA含量分別降低3.23%和5.53%，但差異均不顯著(P>0.05)。

表5 Tau對(duì)早期斷奶仔豬血清生化指標(biāo)的影響

數(shù)據(jù)柱標(biāo)注不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。圖3同。

Value columns with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05). The same as Fig.3.

圖1Tau對(duì)早期斷奶仔豬血清脂類指標(biāo)的影響

Fig.1 Effects of taurine on serum lipid indexes of early-weaned piglets

2.5 血清氨基酸含量

由表7可知，與對(duì)照組相比，除色氨酸(Try)、組氨酸(His)、異亮氨酸(Ile)、苯丙氨酸(Phe)、纈氨酸(Val)和谷氨酸(Glu)外，T和G組早期斷奶仔豬的血清必需氨基酸(EAA)含量均呈升高趨勢(shì)，血清非必需氨基酸(NEAA)含量均呈降低趨勢(shì)。各組的血清賴氨酸(Lys)、蛋氨酸(Met)、精氨酸(Arg)、半胱氨酸(Cys)、亮氨酸(Leu)、蘇氨酸(Thr)、丙氨酸(Ala)、天冬氨酸(Asp)、甘氨酸(Gly)、脯氨酸(Pro)和酪氨酸(Tyr)含量差異顯著(P<0.05)。飼糧中添加Tau對(duì)血清Lys、Met和Arg含量的提高效果顯著優(yōu)于Gln。

2.6 腸道黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)

由表8可知，T和G組早期斷奶仔豬的空腸絨毛高度和絨毛高度/隱窩深度顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，T和G組之間差異不顯著(P>0.05)；與對(duì)照組相比，T和G組的空腸隱窩深度顯著降低(P<0.05)，T和G組之間差異不顯著(P>0.05)。各組的回腸絨毛高度差異不顯著(P>0.05)，但與對(duì)照組相比，T和G組分別提高6.19%和6.58%。

由圖2可知，早期斷奶導(dǎo)致仔豬空腸和回腸絨毛明顯變短，生理排列出現(xiàn)紊亂，絨毛頂端出現(xiàn)嚴(yán)重?cái)嗔?，大片缺失，?shù)量明顯減少，部分細(xì)胞甚至壞死脫落形成糜爛，淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)增加。與對(duì)照組相比，T和G組早期斷奶仔豬的空腸和回腸絨毛排列整齊密集，輪廓清晰，斷裂片段明顯減少。

2.7 腸道黏膜β-catenin和Reg-3γ mRNA相對(duì)表達(dá)量

由圖3可知，各組早期斷奶仔豬空腸和回腸黏膜的β-catenin mRNA相對(duì)表達(dá)量差異顯著(P<0.05)；T和G組空腸和回腸黏膜的β-catenin mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，G組最低。各組空腸和回腸黏膜的Reg-3γmRNA相對(duì)表達(dá)量差異不顯著(P>0.05)。

3 討 論

3.1 Tau對(duì)早期斷奶仔豬生長(zhǎng)性能和腹瀉率的影響

Liu等[5]報(bào)道斷奶仔豬飼糧中添加Tau能提高其生長(zhǎng)速度和飼料轉(zhuǎn)化率。黃仁術(shù)等[6]報(bào)道飼糧中添加0.1% Tau后，斷奶仔豬第1周的生長(zhǎng)性能顯著提高，其中平均日增重提高6.63%，料重比降低1.10%，經(jīng)濟(jì)效益增加6.14%。Zhang等[7]在斷奶仔豬飼糧中添加1% Tau后發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，斷奶后第10天試驗(yàn)組的料重比降低12.05%，采食量和日增重差異不顯著，但有提高趨勢(shì)；斷奶后第20天試驗(yàn)組的日增重提高27.75%。李成寶等[8]報(bào)道飼糧中添加1% Gln有降低斷奶仔豬腹瀉率的趨勢(shì)。劉悅[9]發(fā)現(xiàn)在斷奶仔豬飼糧中添加低劑量的Tau能顯著降低斷奶仔豬的腹瀉頻率。本試驗(yàn)研究結(jié)果與上述試驗(yàn)結(jié)果相似，Tau提高斷

奶仔豬生長(zhǎng)性能及降低腹瀉率的原因可能是：Tau能夠降低仔豬因斷奶應(yīng)激引起的胃腸道損傷，增強(qiáng)斷奶仔豬自身的免疫功能和抵抗能力；Tau以?；悄懰岬男问酱龠M(jìn)體內(nèi)脂類代謝，且能夠緩解體內(nèi)因斷奶應(yīng)激引起的氧化應(yīng)激，清除體內(nèi)過氧化物；Tau促進(jìn)機(jī)體內(nèi)鐵(Fe)、銅(Cu)和鋅(Zn)等微量元素的吸收，直接或間接促進(jìn)機(jī)體發(fā)育。

表6 Tau對(duì)早期斷奶仔豬血清抗氧化指標(biāo)的影響

表7 Tau對(duì)早期斷奶仔豬血清氨基酸含量的影響

表8 Tau對(duì)早期斷奶仔豬腸道黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

圖2 早期斷奶仔豬空腸和回腸黏膜形態(tài)

圖3 Tau對(duì)早期斷奶仔豬腸道黏膜基因mRNA相對(duì)表達(dá)量的影響

3.2 Tau對(duì)早期斷奶仔豬血清指標(biāo)的影響

本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼糧中添加Tau提高了早期斷奶仔豬的血清Ca含量，Ca含量升高可能與血清ALB含量的升高有關(guān)，因?yàn)镃a能夠與血清ALB結(jié)合，機(jī)體在應(yīng)激狀態(tài)下胞內(nèi)Ca含量升高時(shí)，血清ALB作為Ca載體，與Ca結(jié)合并將其運(yùn)出胞外，維持細(xì)胞Ca平衡[10]。本試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加Tau能夠顯著降低血清AST活性。其機(jī)制可能是Tau能提高機(jī)體的抗氧化功能，降低細(xì)胞膜脂類反應(yīng)水平，從而保護(hù)細(xì)胞膜的完整性，減少AST從組織細(xì)胞逸出。動(dòng)物血清中的AKP由骨髓和肝臟產(chǎn)生，其含量的變化可以反映出動(dòng)物機(jī)體骨髓和肝臟的生理功能狀況，同時(shí)也是衡量動(dòng)物機(jī)體健康的重要指標(biāo)之一。本試驗(yàn)結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，T和G組的血清AKP活性顯著升高，且與血清P含量大致呈負(fù)相關(guān)，與劉洋景[11]報(bào)道相一致。這說明Tau能在一定程度上平衡斷奶仔豬的骨骼營(yíng)養(yǎng)，抑制成骨細(xì)胞活性，獲得適宜的骨骼礦化，促進(jìn)骨骼生長(zhǎng)。陳靜等[12]報(bào)道，隨著動(dòng)物年齡的增加，血清AKP活性降低，原因可能是AKP是成骨細(xì)胞的產(chǎn)物，當(dāng)成骨細(xì)胞變?yōu)楣羌?xì)胞時(shí)，其活性就會(huì)下降。

本試驗(yàn)通過對(duì)TC和TG的分析來(lái)研究早期斷奶仔豬體內(nèi)的脂類代謝情況，得出各組的血清TC含量差異不顯著，T和G組的血清TG含量顯著低于對(duì)照組，說明早期斷奶仔豬飼糧中添加0.1% Tau可以在一定程度上調(diào)節(jié)脂類代謝，且效果與添加1.0% Gln相當(dāng)。Tau調(diào)節(jié)脂類代謝的原因可能是：Tau可促進(jìn)膽酸合成過程中的限速酶7α-羥化酶的合成，通過刺激膽酸合成加速體內(nèi)TC和TG的清除；Tau通過上調(diào)低密度脂蛋白膽固醇受體(low density lipoprotein-cholesterol receptor，LDLR)表達(dá)或提高與LDLR結(jié)合能力的方式降低TG含量。曾得壽等[13]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加Tau能顯著提高21日齡肉仔雞胰臟和小腸內(nèi)容物的脂肪酶活性。高春生等[14]報(bào)道Tau能夠通過提高脂肪酶的活性影響魚體的脂類代謝。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，雖然各組早期斷奶仔豬的血清GSH-Px活性差異不顯著，但飼糧中添加0.1% Tau顯著提高血清SOD和CAT活性，MDA含量呈下降趨勢(shì)。Winiarska等[15]研究表明，Tau可提高兔血清及肝臟中SOD和GSH-Px活性，提高機(jī)體的抗氧化能力，降低血清MDA含量。王芙蓉等[16]報(bào)道，Tau可降低產(chǎn)蛋鵪鶉血清MDA含量，說明Tau具有減少過氧化脂質(zhì)(LPO)、提高機(jī)體抗氧化能力的作用。郝中禹等[17]綜述，Tau能降低細(xì)胞內(nèi)MDA和活性氧含量，提高SOD和GSH-Px活性，與本試驗(yàn)研究結(jié)果相似。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼糧中添加Tau能夠降低早期斷奶仔豬的血清NO含量，Tau降低血清NO含量可能與Tau抑制NOS基因表達(dá)有關(guān)。Roy等[18]報(bào)道，Tau可通過DNA的轉(zhuǎn)錄因子切斷NOS基因表達(dá)，降低NO含量，進(jìn)而抑制應(yīng)激誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)，最終保護(hù)細(xì)胞。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，Tau能夠提高血清EAA中Lys、Met、Arg、Cys和Leu含量，其中Tau對(duì)血清Lys、Met和Arg含量的提高效果顯著優(yōu)于Gln。血清Leu和Lys含量的增加可能與血清ALB含量的增加有關(guān)，因?yàn)锳LB是肝臟中合成的一種重要蛋白質(zhì)，是動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)狀況的重要指標(biāo)，主要由Leu和Lys等氨基酸構(gòu)成，ALB含量的增加常伴隨著Leu和Lys含量的增加[19]。本試驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)Tau可使早期斷奶仔豬的血清ALB含量增加。鄭萍等[20]報(bào)道，氧化應(yīng)激狀態(tài)下，組織代謝需要更多的氨基酸，增強(qiáng)組織對(duì)血漿EAA的吸收，斷奶仔豬血清Met、Arg和Cys含量顯著降低。本試驗(yàn)中，早期斷奶仔豬的血清Met、Arg和Cys含量增加可能是因?yàn)門au降低了仔豬機(jī)體的氧化應(yīng)激，降低了組織對(duì)血清EAA的吸收，從而增加了血清Met、Arg和Cys含量。本試驗(yàn)結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加Tau顯著降低早期斷奶仔豬血清NEAA中Ala、Gly和Pro含量。Ala和Gly含量降低的原因可能是仔豬在斷奶應(yīng)激狀態(tài)下組織代謝需要更多的氨基酸，增強(qiáng)了組織對(duì)血清EAA的吸收，而Tau與Ala和Gly的代謝無(wú)關(guān)[21]。而Pro作為Arg的代謝產(chǎn)物，其在血清中的含量受Arg合成量的影響，Arg含量顯著升高，導(dǎo)致Arg的代謝產(chǎn)物含量降低，Pro含量隨之降低[22]。

3.3 Tau對(duì)早期斷奶仔豬腸道黏膜形態(tài)的影響

本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加0.1% Tau或1.0% Gln均可顯著提高空腸絨毛高度和絨毛高度/隱窩深度，顯著降低空腸隱窩深度，添加0.1% Tau和1.0% Gln差異不顯著，回腸絨毛高度呈升高趨勢(shì)，T組的小腸黏膜腸上皮結(jié)構(gòu)完整性明顯高于對(duì)照組，表明Tau能夠緩解仔豬因早期斷奶導(dǎo)致的腸道應(yīng)激。王建軍[23]報(bào)道，Tau能夠明顯緩解炎癥引起的小鼠小腸黏膜上皮細(xì)胞絨毛脫落和壞死，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減少，血漿和腸組織中NO和MDA含量降低，SOD活性升高。推測(cè)Tau可能通過降低腸道氧化應(yīng)激保護(hù)腸黏膜，斷奶仔豬腹瀉率降低可能與此存在關(guān)聯(lián)。此外，Tau緩解仔豬腸道斷奶應(yīng)激還可能通過抑制腸道內(nèi)毒素移位，促進(jìn)腸道相關(guān)基因的表達(dá)，從而保護(hù)腸道的完整性[24]。

3.4 Tau對(duì)早期斷奶仔豬腸道黏膜相關(guān)基因表達(dá)的影響

本試驗(yàn)結(jié)果顯示，飼糧中添加Tau和Gln能夠顯著降低早期斷奶仔豬空腸和回腸黏膜的β-catenin mRNA相對(duì)表達(dá)量。Tau降低β-catenin mRNA相對(duì)表達(dá)量可能與Tau能夠提高機(jī)體的抗氧化性有關(guān)[25]。研究表明，Tau能夠提高大鼠血清和組織中SOD、CAT和GSH-Px等抗氧化物的活性，抗氧化物可清除過氧化氫(hydrogen peroxide，H2O2)[26]。田黎明[27]研究發(fā)現(xiàn)，β-catenin mRNA相對(duì)表達(dá)量在H2O2誘導(dǎo)的人成纖維細(xì)胞的氧化模型中顯著提高，抑制Wnt/β-catenin信號(hào)通路能夠降低機(jī)體氧化應(yīng)激反應(yīng)。推測(cè)Tau可能通過降低腸道H2O2含量，從而影響Wnt/β-catenin信號(hào)通路的激活，β-catenin從復(fù)合物中釋放量降低，β-catenin mRNA相對(duì)表達(dá)量也隨之降低。Tau還能降低免疫抑制因子腫瘤壞死因子-α(TNF-α)含量[17]，補(bǔ)充Tau可使血液中TNF-α含量降低[28]。范正偉[29]研究發(fā)現(xiàn)，TNF-α通過與細(xì)胞膜上的受體結(jié)合，進(jìn)入細(xì)胞基質(zhì)，維持β-catenin不被降解而進(jìn)入細(xì)胞核，從而激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路。推測(cè)Tau可能通過降低腸道的TNF-α含量，從而減少對(duì)Wnt/β-catenin信號(hào)通路的激活，β-catenin mRNA相對(duì)表達(dá)量降低。

4 結(jié) 論

① 飼糧中添加0.1% Tau或1.0% Gln均可顯著提高早期斷奶仔豬的平均日增重、平均日采食量、空腸絨毛高度和絨毛高度/隱窩深度，顯著降低料重比。

② 飼糧中添加0.1% Tau或1.0% Gln可提高早期斷奶仔豬的血清Ca、EAA含量及AKP、SOD和CAT活性，顯著降低血清TG含量和小腸黏膜β-catenin mRNA相對(duì)表達(dá)量。

③ 飼糧中添加0.1% Tau或1.0% Gln能提高早期斷奶仔豬的生長(zhǎng)性能，促進(jìn)腸道發(fā)育，1.0% Gln的效果略優(yōu)于0.1% Tau。