紅樹(shù)桐花樹(shù)胚軸化學(xué)成分研究＊

易湘茜，徐 普，鄧家剛，高程海，3＊＊

（1.廣西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院 南寧 530020；2.廣西中醫(yī)藥大學(xué)廣西中藥藥效研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 南寧 530020；3.廣西中醫(yī)藥大學(xué)廣西中醫(yī)藥科學(xué)實(shí)驗(yàn)中心 南寧 530020）

桐花樹(shù)（Aegiceras corniculatum）為常見(jiàn)的優(yōu)勢(shì)紅樹(shù)植物，是紫金牛科（Myrsinaceae）蠟燭果屬（Aegiceras）植物，在我國(guó)主要分布于廣西、廣東、福建及南海諸島。桐花樹(shù)的樹(shù)皮有毒魚(yú)的作用[1]。民間也有關(guān)于桐花樹(shù)入藥的記載，其樹(shù)皮和樹(shù)葉熬汁飲用可用于治療哮喘、糖尿病及風(fēng)濕等疾病[2]。經(jīng)現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，桐花樹(shù)各部分提取物還對(duì)植物病原真菌具有很好的抑制性作用[3]。在代謝產(chǎn)物活性研究領(lǐng)域，已有文獻(xiàn)表明桐花樹(shù)各部位與內(nèi)生菌發(fā)酵提取物具有抗腫瘤、抗衰老等多種活性。目前，桐花樹(shù)的皮莖葉等部位中共分離鑒定包含萜類(lèi)、醌類(lèi)、甾醇類(lèi)、有機(jī)酸、黃酮類(lèi)等化合物的59個(gè)化合物[4]。桐花樹(shù)胚軸呈細(xì)長(zhǎng)的半月型，不成熟時(shí)為綠色，成熟后逐漸變?yōu)榧t褐色，該部位為桐花樹(shù)可再生部位，每年生長(zhǎng)到一定時(shí)間就會(huì)自然脫落，萌發(fā)成紅樹(shù)樹(shù)苗，對(duì)其研究不會(huì)影響桐花樹(shù)的生長(zhǎng)。因此，為了深入闡明桐花樹(shù)胚軸的物質(zhì)基礎(chǔ)，本研究組對(duì)桐花樹(shù)胚軸的化學(xué)成分進(jìn)行研究，共分離鑒定了14個(gè)化合物，除化合物9外，其他化合物均為首次在桐花樹(shù)中分離鑒定得到的。

1 儀器與材料

1.1 儀器與試劑

Waters e2695高效液相色譜儀（美國(guó)Waters公司）；分析高效液相色譜柱（XB-C18 4.6×250 mm，5 μm）（月旭科技有限公司）；半制備型高效液相色譜柱（XBC18 10×150 mm，5 μm）（月旭科技有限公司）；Bruker DRX-600 MHz核磁共振儀（德國(guó)Bruker公司）；三用紫外儀（上海嘉鵬科技有限公司）；層析缸（杭州曠維實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；層析用葡聚糖凝膠（Sephadex LH-20）（GE生物科技有限公司）；高效液相色譜用試劑為色譜純，其他為分析純。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)用桐花樹(shù)胚軸樣品于2016年8月采自廣西北侖河口國(guó)家自然保護(hù)區(qū)，經(jīng)廣西紅樹(shù)林研究中心王新副研究員鑒別確定為為紅樹(shù)科（Rhizophoraceae）蠟燭果屬（Aegiceras Gaertn）桐花樹(shù)（Aegiceras corniculatum)。該標(biāo)本現(xiàn)在保藏于廣西中醫(yī)藥大學(xué)海洋藥物研究所，編號(hào)為：2016-GXIMD-007。

2 提取分離

取新鮮的桐花樹(shù)胚軸的樣品（濕重約25.5 kg），將其切碎后浸泡在95%的工業(yè)酒精中，于室溫（約27℃）下浸泡提取三次，每次浸泡時(shí)間為一周。完成后，減壓濃縮（0.01MPa，45℃）浸泡液，將三次的提取物合并，得到浸膏狀總提取物（重1 220.7 g）。依次使用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，減壓回收溶劑，分別得到石油醚萃取相（42.1 g）、乙酸乙酯萃取相（79.7 g）和正丁醇萃取相（84.1 g）。

乙酸乙酯萃取相（79.7 g）經(jīng)正相硅膠柱層析，CHCl3-Me2CO，CHCl3-MeOH溶劑系統(tǒng)梯度洗脫得到12個(gè)分離部位Fr.E1-12。Fr.E3經(jīng)凝膠柱層析和半制備型高效液相色譜純化，得到化合物1（3.4 mg）、2（6.7 mg）和3（1.9 mg）；Fr.E5經(jīng)半制備型高效液相色譜純化得到組分化合物4（4.9 mg）；Fr.E6經(jīng)凝膠柱層析和半制備型高效液相色譜純化，得到化合物5（5.2 mg）、6（5.0 mg）、7（2.9 mg）和8（3.1 mg）；Fr.E8經(jīng)凝膠柱層析和半制備型高效液相色譜純化，得到化合物9（25.2mg）；Fr.E9經(jīng)凝膠柱層析和半制備型高效液相色譜純化，得到化合物10（5.0 mg）、11（11.3 mg）；Fr.E11經(jīng)凝膠柱層析和半制備型高效液相色譜純化，得到化合物12（4.6 mg）。

正丁醇萃取物（84.12 g），經(jīng)正相硅膠柱層析，CHCl3-MeOH溶劑系統(tǒng)梯度洗脫得到9個(gè)分離部位Fr.N1-9。Fr.N4經(jīng)凝膠柱層析和半制備型高效液相色譜純化，得到化合物13（2.1 mg）；Fr.N7經(jīng)凝膠柱層析和半制備型高效液相色譜純化，得到化合物14（9.7 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定（圖1）

化合物1：黃色粉末，溶于氯仿；ESI-MS m/z 379[M+Na]+；1H-NMR（600 MHz，CDCl3）δ：6.60（2H，s，H-3，5），5.98（1H，m，H-8），5.11（2H，m，H-9），3.36（2H，d，J=7.0 Hz，H-7），3.87（-OCH3），4.80（1H，d，J=8.0 Hz，H-1'），3.83（1H，dd，J=12.0，2.5 Hz，H-6'a），3.71（1H，dd，J=12.0，6.0 Hz，H-6'b），3.48（1H，m，H-3'），3.45（2H，m，H-2'，4'），3.21（1H，m，H-5'）。13C-NMR（150 MHz，CDCl3）δ：153.6（C-2，6），137.9（C-8），137.5（C-1），133.5（C-4），115.2（C-9），106.3（C-3，C-5），40.5（C-7），56.2（-OCH3），104.5（C-1'），77.6（C-3'），76.9（C-5'），74.9（C-2'），70.2（C-4'），61.7（C-6'），以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]對(duì)照一致，故確定該結(jié)構(gòu)為4-烯丙基-2,6-二甲氧基苯基-葡萄糖苷。

化合物2：白色粉末，溶于甲醇；1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：2.33（1H，dd，J=11.6 Hz，H-2，6），2.57（1H，m，H-3），3.28（1H，dd，J=6.8 Hz，H-4），4.85（1H，dd，J=2.8 Hz，H-5），6.29（1H，d，J=15.9 Hz，H-2'），6.47（2H，dd，J=5.4 Hz，H-3'），7.05（2H，d，J=2.0 Hz，H-5'），6.92（2H，dd，J=7.1 Hz，H-9'），6.77（1H，dd，J=8.2 Hz，H-8'），3.78（3H，s，-OCH3）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：75.5（C-1），44.2（C-2），61.7（C-3），77.6（C-4），69.7（C-5），36.8（C-6），175.3（C-7），168.6（C-1'），115.1（C-2'），147.3（C-3'），127.4（C-4'），115.2（C-5'），146.7（C-6'），149.6（C-7'），116.3（C-8'），121.5（C-9'）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]對(duì)照一致，故確定該結(jié)構(gòu)為3,4-二咖啡酸?？崴?。

化合物3：白色粉末，溶于甲醇；1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：2.20（1H，dd，J=3.8 Hz，H-2)，7.56（1H，d，J=5.9 Hz，H-3），5.36（1H，m，H-4），5.6（1H，m，H-5)，2.4 1（1H，dd，J=3.6 Hz，H-6），6.28（1H，d，J=19.7 Hz，H-2'），7.05（1H，d，J=1.7 Hz，H-5'），6.76（1H，d，J＝8.0 Hz，H-8'），6.95（1H，dd，J=2.6 Hz，H-9'），3.75（3H，s，HOMe）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：74.78（C-1)，38.65（C-2），68.99（C-3），73.27（C-4），71.07（C-5），37.52（C-6），157.58（C-7），166.45（C-1'），114.54（C-2'），146.89（C-3'），128.09（C-4'），114.37（C-5'），147.42（C-6'），147.97（C-7'），112.78（C-8'），122.64（C-9'）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]對(duì)照一致，故確定該結(jié)構(gòu)為3,4,5-三咖啡酸?？崴?。

化合物4：黃色粉末，溶于丙酮；1H-NMR（600 MHz，Acetone-d6）δ：7.75（1H，d，J=1.8 Hz），7.63（1H，dd，J=9.0，2.0 Hz），6.92（1H，d，J＝9.0 Hz），6.45（s），6.20（s），5.31（1H，d，J＝7.5 Hz），3.90（1H，m），3.80（1H，m），3.56（1H，m），3.52（2H，m），3.45（1H，m）；13C-NMR（150 MHz，Acetone-d6）δ：178.2（C-4），166.4（C-7），161.8（C-5），158.8（C-9），156.4（C-2），146.5（C-4'），145.9（C-3'），135.1（C-3），122.9（C-1'），121.6（C-6'），116.5（C-5'），116.0（C-2'），106.6（C-10），104.8（C-1''），99.9（C-6），94.5（C-8），78.9（C-2''），77.5（C-5''），73.9（C-3''），70.5（C-4''），61.9（C-6''）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]對(duì)照一致，故確定該結(jié)構(gòu)為3',4',5,7-四羥基黃酮-3-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物5：白色顆粒粉末，溶于甲醇；ESI-MS m/z 288.1[M]；1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：5.08(1H，d，J=11.6 Hz，H-2)，5.98（1H，d，J=2.3 Hz，H-6)，6.03（1H，d，J=2.3 Hz，H-8)，7.45（2H，d，J=2.0，Hz，H-2')，6.92(2H，d，J=8.5 Hz，H-3'，5')，4.78(1H，s，3-OH)，11.74（1H，s，5-OH)，8.80（1H，s，7-OH)，9.84（1H，s，4'-OH）；13CNMR（150 MHz，CD3OD）δ：83.3（C-2)，71.8（C-3），196.6（C-4），163.5（C-5），99.8（C-6），167.2（C-7），94.6（C-8），110.57（C-4α），162.7（C-8α），128.1（C-1'），146.8（C-2'，6'），120.4（C-3'），157.4（C-4′），114.2（C-5'）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]對(duì)照一致，故確定該結(jié)構(gòu)為3,5,7-三羥基-2-(4'-羥苯基)-4-酮。

化合物6：白色結(jié)晶，溶于甲醇；ESI-MS m/z 288.0[M]；1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：5.45（1H，d，J=10.3 Hz，H-2），3.83（1H，d，J=4.7 Hz，H-3），5.59（1H，d，J=1.7 Hz，H-6），6.36（1H，d，J=2.7 Hz，H-8），6.76（2H，d，J=1.9 Hz，H-2'），6.63（2H，d，J=5.8Hz，H-3'，6'），12.14（1H，s，5-OH），10.13（1H，s，7-OH），9.78（2H，s，3'，4'-OH）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：82.7（C-2），43.0（C-3），197.0（C-4），163.4（C-5），91.5（C-6），164.5（C-7），95.0（C-8），102.8（C-4α），166.4（C-8α），120.1（C-1'），116.1（C-2'，6'）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]對(duì)照一致，故確定該結(jié)構(gòu)為2-（3',4'-二羥苯基）-5,7-二羥基-4-酮。

化合物7：黃色粉末，溶于甲醇；ESI-MS m/z 367[M+K]+；1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：6.75（1H，br，H-4），6.58（1H，br，H-6），5.21（2H，s，H-3），5.10（1H，d，J=7.5 Hz，H-1'），3.91（1H，dd，J=12.5，2.0 Hz，H-6'ɑ），3.66（1H，dd，J=12.5，6.0 Hz，H-6'β），3.60-3.40（4H，m，H-2'，3'，4'，5'）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：167.4（CO），164.4（C-3），157.5（C-5），151.9（C-7），104.5（C-8），102.2（C-4），102.1（C-6），99.4（C-1'），77.2（C-5'），76.8（C-3'），73.2（C-2'），69.5（C-4'），68.1（C-3），60.5（C-6'）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]對(duì)照一致，故確定該結(jié)構(gòu)為5,7-二羥基-異苯唑呋喃-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物8：白色粉末，溶于甲醇；ESI-MS m/z 272.0[M]；1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：5.15（1H，d，J=8.8 Hz，H-2），3.31（1H，d，J=6.0 Hz，H-3），5.75（1H，d，J=2.0 Hz，H-6），6.60（1H，d，J=1.9 Hz，H-8），7.17（2H，d，J=1.3 Hz，H-2'，6'），6.17（2H，d，J=8.3 Hz，H-3'，5'），12.60（1H，s，5-OH），10.33（1H，s，7-OH），9.04（2H，s，4'-OH）；13CNMR（150 MHz，CD3OD）δ：82.5（C-2），43.1（C-3），196.2（C-4），163.1（C-5），93.3（C-6），164.5（C-7），94.8（C-8），102.2（C-4α），166.8（C-8α），130.1（C-1'），127.9（C-2'，6'）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]對(duì)照一致，故確定該結(jié)構(gòu)為5,7-二羥基-2-（4'-羥苯基）-4-酮。

化合物9：淡黃色粉末，溶于甲醇；ESI-MS m/z 302.40[M]；1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：5.49（1H，d，J=1.8 Hz，H-6)，6.20（1H，d，J=3.1 Hz，H-8），6.25（1H，d，J=1.7 Hz，H-2'，6'），6.28（1H，d，J=6.5 Hz，H-5'），7.40（1H，d，J=3.8 Hz，H-6'），16.47（1H，s，5-OH），10.92（1H，s，7-OH），9.84（1H，s，3'，4'-OH）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：149.6（C-2），135.6（C-3），167.2（C-4），168.1（C-5），93.9（C-6），164.5（C-7），94.0（C-8），105.5（C-4α)，158.5（C-8α），122.2（C-1'），113.6（C-2'），112.8（C-6'）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]對(duì)照一致，故確定該結(jié)構(gòu)為2-（3',4'-二羥苯基）-3,5,7-三羥基-4-酮。

化合物10：白色粉末，溶于甲醇；ESI-MS m/z 318.4[M]；1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：6.38（1H，d，J=7.3 Hz，H-6），6.67（1H，d，J=3.1 Hz，H-7），6.80（2H，d，J=4.3 Hz，H-2'，6'），10.86（1H，s，3-OH)），16.74（1H，s，5-OH），9.81（1H，s，8-OH），9.84（2H，d，J=5.2 Hz，3'，5'-OH），7.83（1H，s，4'-OH）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δC：149.7（C-2），135.7（C-3），167.5（C-4），152.5（C-5），114.3（C-6），127.7（C-7），136.5（C-8），112.7（C-4α），153.2（C-8α），122.9（C-1'），109.0（C-2'，6'），148.9（C-3'，5'），132.6（C-4'）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]對(duì)照一致，故確定該結(jié)構(gòu)為3,5,8-三羥基-2-（3',4',5'-三苯羥基）-4-酮。

化合物11：淡綠色粉末，溶于甲醇；ESI-MS m/z 304.2[M]；1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：6.33（1H，d，J=5.3 Hz，H-6），6.55（1H，d，J=3.7 Hz，H-7），6.37（1H，d，J=3.5 Hz，H-2'），6.78（1H，d，J=5.8 Hz，H-3'），6.44（1H，d，J=4.7 Hz，H-4'），10.64（1H，s，3-OH），16.41（1H，s，5-OH），9.37（1H，s，8-OH），9.44（1H，d，J=5.2 Hz，5'-OH），13.74（1H，s，6'-OH）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：146.6（C-2），136.8（C-3），164.8（C-4），157.2（C-5），118.6（C-6），129.8（C-7），135.4（C-8），116.9（C-4α），151.7（C-8α），113.9（C-1'），117.9（C-2'），122.7（C-3'），115.6（C-4'），157.0（C-5'），149.8（C-6'）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]對(duì)照一致，故確定該結(jié)構(gòu)為2-（2',3'-二羥苯基）-3,5,8-三羥基-4-酮。

圖1 桐花樹(shù)中分離到的14個(gè)化合物結(jié)構(gòu)式

化合物12：淡黃色結(jié)晶，溶于甲醇；ESI-MS m/z 330.1[M]；1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：7.60（1H，d，J=3.4 Hz，H-2），2.61（1H，d，J=3.7 Hz，H-4），4.87（1H，d，J=5.1 Hz，H-1')，4.80（1H，d，J=4.1 Hz，H-2'），3.07（1H，d，J=2.8 Hz，H-3'），9.86（1H，s，3-OH），7.73（1H，s，5-OH），4.15（1H，s，2'-OH），4.15（1H，d，4'-OH），3.06（1H，s，5'-OH）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：141.5（C-1），158.2（C-2），121.0（C-3），115.5（C-4），148.6（C-5），116.6（C-6），80.5（C-1'），70.4（C-2'），77.7（C-3'），71.6（C-4'），88.5（C-5'）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]對(duì)照一致，故確定該結(jié)構(gòu)為3,5-二羥基-4-甲基-2-（3',4',5'-三羥基-6'-（羥甲基）-四氫-2H-吡喃-2-基）-苯甲酸。

化合物13：白色粉末，溶于吡啶；分子式C31H50O3；1H-NMR（500 MHz，C5D5N）δ：5.33（1H，s，H-6），5.22（1H，dd，J=15.0，9.0 Hz，H-22），5.06（1H，dd，J=15.0，9.0 Hz，H-23），5.04（1H，d，J=7.5 Hz，H-1'）；13C-NMR（125 MHz，C5D5N）δ：141.0（C-5），138.9（C-22），129.5（C-23），121.9（C-6），102.6（C-1'），78.6（C-3），56.9（C-14），56.3（C-17），51.5（C-24），50.4（C-9），42.5（C-13），40.7（C-20），40.0（C-12），39.4（C-4），37.5（C-1），36.9（C-10），32.2（C-7），32.1（C-8，25），30.3（C-2），28.5（C-16），25.8（C-28），24.5（C-15），21.5（C-27）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[17]對(duì)照一致，故確定該結(jié)構(gòu)為豆甾醇3-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物14：淺黃色油狀液體，溶于氯仿；分子式C11H14O3；1H-NMR（500 MHz，CDCl3）δ：6.82（1H，d，J=8.0 Hz，H-5'），6.70（1H，d，J=1.5 Hz，H-2'），6.66（1H，dd，J=8.0，1.5 Hz，H-6'），3.86（3H，s，OCH3），2.82（2H，t，J=7.5 Hz，H-3），2.72（2H，t，J=7.5 Hz，H-4），2.14（3H，s，H-1）；13C-NMR（125 MHz，CDCl3）δ：208.2（C-2），146.4（C-3'），143.9（C-4'），132.9（C-1'），120.8（C-5'），114.5（C-6'），111.1（C-2'），55.9（C-OCH3），45.5（C-4），30.1（C-3），29.7（C-1）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[18]對(duì)照一致，故確定該結(jié)構(gòu)為4-（4'-羥基-3'-甲氧基苯基）-2-丁酮。

4 討論

桐花樹(shù)生長(zhǎng)在熱帶亞熱帶的沿海地區(qū)，桐花樹(shù)生長(zhǎng)地區(qū)的特殊性決定了桐花樹(shù)與其他木本植物相比，其化學(xué)成分和生物理化活性方面都有較大的差別。桐花樹(shù)化學(xué)成分的研究已經(jīng)從20世紀(jì)50-60年代持續(xù)至今，從桐花樹(shù)的樹(shù)皮、莖或根中已發(fā)現(xiàn)化合物105個(gè)，包括25個(gè)新化合物，顯示出鎮(zhèn)痛、驅(qū)蟲(chóng)及抗菌等功能，但目前對(duì)桐花樹(shù)胚軸的化學(xué)成分研究未見(jiàn)報(bào)道。隨著國(guó)家對(duì)生態(tài)環(huán)境保護(hù)力度加強(qiáng)，破壞性研究桐花樹(shù)等紅樹(shù)植物的代謝產(chǎn)物研究成為歷史。因此，論文通過(guò)多種色譜分離方法和現(xiàn)代波譜技術(shù)對(duì)桐花樹(shù)的可再生部位胚軸的化學(xué)成分進(jìn)行了較為全面的研究，共分離得到14個(gè)化合物。除化合物9外，其他化合物均為首次在桐花樹(shù)中分離鑒定得到的，表明研究紅樹(shù)的可再生部位是可行的，能夠成為紅樹(shù)中次生代謝產(chǎn)物研究的新研究方向。因此，本項(xiàng)研究為闡明桐花樹(shù)胚軸的物質(zhì)基礎(chǔ)提供了數(shù)據(jù)支持，為桐花樹(shù)胚軸的應(yīng)用提供了科學(xué)依據(jù)?，F(xiàn)如今，對(duì)桐花樹(shù)的各領(lǐng)域和各層次研究方興未艾，對(duì)桐花樹(shù)的物種保護(hù)和對(duì)桐花樹(shù)所含藥用化學(xué)成分等潛在資源正當(dāng)?shù)拈_(kāi)發(fā)利用具有非常重要的價(jià)值。