UPLC法測定血栓通注射液中人參皂苷類成分的含量

高艷梅 谷俊峰 祿美云

【摘 要】 目的：研究超高效液相色譜法（簡稱UPLC法）在中成藥人參皂苷類成分含量測定中的應(yīng)用效果。方法：以血栓通注射液為檢測樣品，分別采用高效液相色譜法（簡稱HPLC法）和UPLC法對其中的皂苷類成分進(jìn)行測定，對比兩種測定方法下的測定結(jié)果，比較兩種檢測方法所用時(shí)間。結(jié)果：兩種檢測方法下，人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rd以及三七皂苷R1等5種皂苷成分平均含量的測定值以及RSD值一致，提示兩種檢測方法在血栓通注射液人參皂苷類成分含量測定中，均具有良好的應(yīng)用效果；對比測定所需時(shí)間，UPLC法檢測平均用時(shí)（15.12±0.75）min，顯著短于HPLC法的（47.15±0.73）min，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論： 應(yīng)用HPLC法和UPLC法，均能準(zhǔn)確有效地測定中成藥中人參皂苷類成分含量，而UPLC超高效液相色譜法測定更為高效，實(shí)踐應(yīng)用中，可根據(jù)實(shí)際需要選定檢測方法。

【關(guān)鍵詞】 UPLC法；HPLC法；人參皂苷成分；含量測定

【中圖分類號(hào)】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517（2018）07-0017-02

UPLC法，是在HPLC法上進(jìn)一步開發(fā)得來的，較之傳統(tǒng)的HPLC法，UPLC法的主要突破表現(xiàn)在色譜分離上，色譜的解析度更高。高速度、高分離度和高靈敏度，是UPLC法的突出優(yōu)勢[1]。UPLC法目前還處于新興階段，實(shí)踐應(yīng)用主要集中于生化領(lǐng)域，而在天然產(chǎn)物的成分和精度分析上的應(yīng)用，也在逐漸興起。而對中成藥進(jìn)行成分分析，是確定藥品安全性，指導(dǎo)臨床科學(xué)用藥的重要環(huán)節(jié)，所以，應(yīng)用UPLC法進(jìn)行中成藥中有關(guān)成分含量的測定，應(yīng)用也逐漸廣泛[2]。本研究分析兩種方法在中成藥的人參皂苷類成分含量測定中的應(yīng)用效果。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 樣品 血栓通注射液（廣西梧州制藥（集團(tuán)）股份有限公司，批準(zhǔn)文號(hào)：國藥準(zhǔn)字Z45021769）為分析樣品，樣品來自本藥檢所留樣，為同一批次藥物；對照品來自中國食品藥品檢定研究院。

1.1.2 儀器 島津LC-20AT型號(hào)的高效液相色譜儀（SHIMADZU）；ACQuty Arc（2998PDA）型號(hào)的超高效液相色譜儀（Waters）；DV215CD型十萬分之一電子天平（OHAUS）；BS110S型萬分之一電子天平（北京賽多利斯天平有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 樣品溶液制備 準(zhǔn)確稱取樣品（0.50±001）g，加入50mL濃度為70%的甲醇溶液，嚴(yán)密稱重后，超聲提取30min（頻率設(shè)置為33kHz，功率設(shè)定為250W），再次嚴(yán)密稱重，用等濃度甲醇溶液補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻、濾過，經(jīng)0.22μm的有機(jī)濾膜濾過后，取續(xù)濾液即得，進(jìn)行液相分析。

1.2.2 對照品溶液制備 用70%的甲醇溶液，將人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rd以及三七皂苷R1對照品配制成各含1mg·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)貯備液，在4℃條件下保存待用，進(jìn)行液相分析。

1.2.3 參數(shù)和色譜條件 兩種檢測方法的流動(dòng)相條件相同，柱溫、檢測波長以及進(jìn)樣量相同，操作差異主要表現(xiàn)在流速和梯度洗脫程序上，具體為：①UPLC法：以乙腈（A）與濃度為0.05%的磷酸（B）為流動(dòng)相，進(jìn)行梯度洗脫；將柱溫控制在30℃，流速為1.0 mL/min，檢測波長設(shè)定為203nm，每次進(jìn)樣的樣品體積為2μL ；②HPLC法：流動(dòng)相條件與UPLC法相同。進(jìn)行梯度洗脫。將柱溫控制在30℃，流速為0.4mL/min，檢測波長設(shè)定為203nm，每次進(jìn)樣的樣品體積為2μL。兩種方法下的梯度洗脫程序見表1。兩種方法下，均重復(fù)測量3次，取平均值。

1.3 觀察指標(biāo) 觀察并對比兩種方法下，血栓通注射液樣品中人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rd以及三七皂苷R1等五種皂苷類成分的平均含量測定值，比較兩種測定方法所需時(shí)間。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS20.0軟件處理測量數(shù)據(jù)，相關(guān)測量資料中的計(jì)量資料用（x±s）表示，比較各類皂苷類成分的含量以及兩種方法所用時(shí)間的差異，應(yīng)用t檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種檢測方法下人參總皂苷類成分含量測定結(jié)果 本組研究針對同一批血栓通注射液樣本進(jìn)行人參皂苷類成分含量的測定，結(jié)果顯示，在UPLC法和HPLC法檢測下，受檢樣品的人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rd以及三七皂苷R1這5種人參皂苷成分的含量和RSD值的測定結(jié)果無偏差，全部一致。詳見表2。

2.2 兩種檢測方法所用時(shí)間比較結(jié)果 兩種檢測方法在一起流速參數(shù)設(shè)置以及色譜條件上有所差異，UPLC法檢測下，其梯度洗脫程序得到優(yōu)化，因此，檢測的色譜分離度更高，其檢測的速率也得以顯著提升，UPLC法下，平均用時(shí)（15.12±0.75）min，顯著短于HPLC法下的（47.15±0.73）min，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

3 討論

3.1 UPLC法的優(yōu)勢 HPLC法是最早出現(xiàn)于20世紀(jì)60年代末的分離分析技術(shù)，在多年間，不斷發(fā)展，受益于科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，色譜得到不斷完善，其分離速率、分離效率以及檢驗(yàn)的靈敏度均逐年提升，已廣泛被應(yīng)用于多個(gè)學(xué)科領(lǐng)域。而在突破了色譜這一瓶頸限制后，在此基礎(chǔ)上開發(fā)成功的UPLC法呈現(xiàn)出更多優(yōu)勢，尤其在檢測速率上，得到顯著提升，且能夠保證檢測結(jié)果的精確，在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的藥品分析和質(zhì)量測定中的應(yīng)用，尤其受到重視，其中比較重要的應(yīng)用方向即對藥物成分的含量測定[3]。

3.2 UPLC法進(jìn)行成分測定的現(xiàn)實(shí)意義 應(yīng)用UPLC法對合成類藥物及相關(guān)制劑進(jìn)行成分含量的測定，能夠不受藥物本身帶有的雜質(zhì)、相關(guān)添加劑或者共存藥物的影響，測定結(jié)果更為精確，能夠?yàn)榕R床用藥提供更為準(zhǔn)確的指導(dǎo)，保證用藥劑量的科學(xué)性，提升用藥安全。吳立蓉等[4]曾經(jīng)應(yīng)用UPLC法對復(fù)方丹參片中皂苷類的含量進(jìn)行測定，并與HPLC法測定結(jié)果進(jìn)行對比，證實(shí)UPLC法測定的速率更快。