三種幽門螺旋桿菌檢測方法對臨床消化道相關(guān)疾病的診斷價(jià)值評估

焦炳欣 郭杰 徐新民 何艷群 周淳 李坪 張桂芳

[摘要] 目的 評價(jià)三種幽門螺旋桿菌檢測方法對臨床消化道相關(guān)疾病的臨床應(yīng)用價(jià)值。 方法 對2017年1～12月于北京地壇醫(yī)院就診的177例患者，采用C-尿素呼氣試驗(yàn)（13C-UBT）法檢測幽門螺旋桿菌，同時(shí)抽取靜脈血采用快速膠體金法及免疫印跡法檢測幽門螺旋桿菌，以13C-UBT檢測方法作為金標(biāo)準(zhǔn)，對膠體金法和免疫印跡法的檢測結(jié)果進(jìn)行對比分析。 結(jié)果 177例就診患者13C-UBT檢測陽性106例，陰性71例。其中106例13C-UBT陽性患者中快速膠體金法檢測陽性100例，陰性6例。其敏感度為94.3%，特異性為83.1%；陽性預(yù)測值為89.3%，陰性預(yù)測值為90.8%。106例13C-UBT陽性患者中免疫印跡法檢測陽性102例，陰性4例。其敏感度為96.2%，特異性為84.5%；陽性預(yù)測值為90.3%，陰性預(yù)測值為93.8%。兩種方法差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。147例不同消化道疾病患者采用免疫印跡法檢測，其中Ⅰ型66例（44.9%）、Ⅱ型20例（13.61%），兩種分型差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2 = 34.778，P = 0.000）。胃十二指腸潰瘍、慢性胃炎患者幽門螺旋桿菌Ⅰ型、Ⅱ型比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）；反流性食管炎患者幽門螺旋桿菌Ⅰ型、Ⅱ型比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。 結(jié)論 快速膠體金檢測法與幽門螺旋桿菌現(xiàn)癥感染高度相關(guān)，適用于幽門螺旋桿菌感染的初篩，而免疫印跡法可以進(jìn)行毒力分型，更適用于臨床藥物治療的選擇。

[關(guān)鍵詞] 幽門螺旋桿菌；快速膠體金檢測法；免疫印跡法；Ⅰ型菌株；Ⅱ型菌株

[中圖分類號] R57 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-7210（2018）08（a）-0146-04

[Abstract] Objective To evaluate three diagnostic methods for detecting Helicobacter pylori （Hp） infection in clinical digestive tract related diseases. Methods A total of 177 cases treated in Beijing Ditan Hospital from January 2017 to December 2017 were collected， the Hp was detected via C-urea breath test （13C-UBT）， rapid colloidal gold and Western blot methods. 13C-UBT method was used as golden standard and rapid colloidal gold and Western blot methods were compared in the sensitivity and specificity. Results Of the 177 cases， 106 cases were positive in 13C-UBT test， 71 cases were negative. Among 106 cases of 13C-UBT positive patients， 100 cases were positive in colloidal gold assay method and 6 cases were negative. The sensitivity rate was 94.3% and the specificity rate was 83.1%； the positive predictive value was 89.3% and the negative predictive value was 90.8%. Among 106 cases of 13C-UBT positive patients， 102 cases were positive and 4 cases were negative by the method of Western blot method. The sensitivity rate was 96.2%， specificity rate was 84.5%； the positive predictive value was 90.3% and the negative predictive value was 93.8%. There was no significant difference between the two methods （P > 0.05）. There were 147 cases of different gastrointestinal diseases were detected by the method of Western blot， of which 66 cases were type Ⅰ， accounting for 44.9%； type Ⅱ 20 cases， accounting for 13.61%. There was a significant difference between the two subtypes （χ2 = 34.778， P = 0.000）. The subtypes distribution of Hp， type Ⅰ and Ⅱ had a significant difference between gastroduodenal ulcer and chronic gastritis （P < 0.05）， while the distribution in reflux esophagitis had no difference （P > 0.05）. Conclusion The rapid colloidal gold method is highly correlated with the infection of Hp and is suitable for the preliminary screening of Hp infection. However， the method of Western blot can be used for toxicity typing and is more suitable for the choice of clinical drug treatment.

[Key words] Helicobacter pylori； Rapid colloidal gold detection； Western blot； Type Ⅰ strain； Type Ⅱ strain

幽門螺旋桿菌（Hp）是一種革蘭陰性致病菌，寄生于人體胃中，是慢性胃炎、消化性潰瘍、胃黏膜淋巴組織相關(guān)性淋巴瘤以及胃癌相關(guān)的最重要病原體[1]。1994年世界衛(wèi)生組織將其列為Ⅰ類致癌因子。因此對Hp準(zhǔn)確快速有效的檢測方法對于臨床在消化道及相關(guān)疾病的診斷治療極其重要。本研究通過對Hp的C-尿素呼氣試驗(yàn)（13C-UBT）、HP快速膠體金檢測法及抗體分型免疫印跡檢測法三種方法進(jìn)行比較分析，探討不同檢測方法對臨床相關(guān)疾病診斷治療的價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2017年1～12月來北京地壇醫(yī)院接受Hp 13C-UBT檢測的177例就診患者，年齡18～68歲，平均（44.9±14.0）歲；男98例，女79例；其中Hp C-尿素呼氣試驗(yàn)陽性106例，陰性71例。

1.2 材料

13C-UBT采用13C尿素膠囊（北京勃然制藥有限公司）；Hp快速血清膠體金檢測試劑盒（膠體金法）（MP生物醫(yī)學(xué)亞太私人有限公司）；抗體分型免疫印跡試劑盒（深圳市伯勞特生物制品有限公司）。

1.3 方法

①13C-UBT：受檢者清晨空腹或餐后2 h，向一樣品管吹氣加蓋密封作為收集的0 min呼氣樣品，然后口服一粒13C尿素膠囊，靜坐30 min后開啟另一樣品管，向瓶內(nèi)平靜吹氣1～3 min，加蓋密封后為30 min呼氣樣品，分別于閃爍儀上作13C放射性測試。結(jié)果顯示13C-UBT≥4.0±0.4，判斷受檢者為Hp陽性。

②Hp快速膠體金檢測法：抽取受檢者靜脈血4 mL，分離血清，嚴(yán)格按說明書操作。其原理是間接固相免疫層析，當(dāng)測試樣本從樣本孔向上遷移時(shí)，固定在膜上的Hp抗原與測試樣本中抗體形成抗原-抗體復(fù)合物。接著抗原-抗體復(fù)合物與膠體金標(biāo)記的抗人IgG結(jié)合物結(jié)合而被檢出。質(zhì)控線含有蛋白A，它可以與人IgG結(jié)合，作為樣本正確加入的質(zhì)控指標(biāo)。

③抗體分型免疫印跡檢測法：抽取受檢者靜脈血4 mL，分離血清，嚴(yán)格按說明書操作。其原理是將提取的Hp全菌體抗原（含有CagA、VacA和尿素酶A、B亞單位等）用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，按分子量大小不同分開，再將其轉(zhuǎn)移至硝酸纖維膜上，如果被檢血清有相應(yīng)抗體，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附反應(yīng)，就會在抗原的相應(yīng)位置出現(xiàn)顯色區(qū)帶，與Hp抗體標(biāo)準(zhǔn)區(qū)帶比較，即可判斷Hp感染類型。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

接受Hp 13C-UBT檢測的177例就診患者同時(shí)采集靜脈血進(jìn)行膠體金法和免疫印跡法檢測，以13C-UBT檢測為金標(biāo)法分組統(tǒng)計(jì)膠體金法和免疫印跡法的敏感性、特異性、陽性預(yù)測值及陰性預(yù)測值，采用SPSS 17.0對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料采用百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 13C-UBT與膠體金法檢測結(jié)果比較

177例就診患者13C-UBT檢測陽性106例，陰性71例。其中，在106例13C-UBT陽性患者中，Hp快速膠體金檢測法檢測陽性100例；71例13C-UBT檢測陰性患者中HP快速膠體金檢測法檢測陽性12例。膠體金法敏感度為94.3%，特異性為83.1%，陽性預(yù)測值為89.3%，陰性預(yù)測值為90.8%（χ2 = 109.728，P = 0.000）。

1.2 13C-UBT與免疫印跡法檢測結(jié)果比較

177例就診患者13C-UBT檢測陽性106例，陰性71例，其中在106例13C-UBT陽性患者中，抗體分型免疫印跡檢測法檢測陽性102例；71例13C-UBT檢測陰性患者中，抗體分型免疫印跡檢測法檢測陽性11例?？贵w分型免疫印跡檢測法敏感度為96.2%，特異性為84.5%，陽性預(yù)測值為90.3%，陰性預(yù)測值為93.8%（χ2 = 120.057，P = 0.000）。見表1。

1.3 不同消化道疾病Hp感染的類型比較

177例就診患者中147例不同消化道疾病患者HpⅠ型66例（44.9%），HpⅡ型20例（13.61%）， HpⅠ型與Ⅱ型比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2 = 34.778，P = 0.000）。胃十二指腸潰瘍患者HpⅠ型與Ⅱ型比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2 = 6.718，P = 0.010）；慢性胃炎患者HpⅠ型與Ⅱ型比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2 = 35.056，P = 0.000）；反流性食管炎患者HpⅠ型與Ⅱ型比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2 = 0.313，P = 0.580）。見表2。

3討論

Hp自1983年由Warren及Marshall發(fā)現(xiàn)以來一直是國內(nèi)外學(xué)者研究熱點(diǎn)[2]。Hp感染是慢性胃炎、消化性潰瘍、胃癌等消化道疾病的重要病因，我國普通人群中的感染率已達(dá)50%以上[3]。目前世界成人Hp感染率高達(dá)50%～80%，Hp感染后若不進(jìn)行系統(tǒng)治療，可導(dǎo)致長期持續(xù)感染[4-5]。目前Hp常規(guī)檢測方法以13C-UBT呼氣實(shí)驗(yàn)、快速膠體金抗體檢測、免疫印跡分型檢測三種方法為主，其中以13C-UBT呼氣實(shí)驗(yàn)為金標(biāo)法。

13C-UBT是目前臨床上應(yīng)用最廣泛的非侵入性檢測方法之一，無任何副作用，適用于各種年齡和類型的受試者，具有高度的準(zhǔn)確性，其敏感性可達(dá)95%，特異性為95%～100%[6-7]。但13C-UBT呼氣檢測法價(jià)格昂貴，而且需要專門的技術(shù)人員操作。

快速膠體金檢測法是一種新型的血清學(xué)檢測方法，可以檢測人血清、血漿或全血中Hp IgG抗體，并且現(xiàn)癥感染蛋白抗體（CIM）是一種高度保守的Hp特異性蛋白，它的檢出表明受檢者現(xiàn)在正受Hp感染?？焖倌z體金檢測法已被證明是一種非?？煽康默F(xiàn)癥感染診斷方法[8-9]。

免疫印跡法可以同時(shí)檢測Hp的CagA、VacA、UreA及UreaB抗體，在判斷是否感染Hp的同時(shí)還能夠?qū)⑵溥M(jìn)行毒力分型。在Hp的致病因素中VacA和CagA起重要作用[10-11]。

本研究顯示免疫印跡法的敏感度和特異性均略高于膠體金抗體檢測法，兩者敏感度及特異性分別為（96.2%，84.5%）和（94.3%，83.1%），但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），快速膠體金檢測法不但能檢測出Hp IgG抗體，而且能檢出CIM，與現(xiàn)癥感染高度相關(guān)。操作簡便，結(jié)果快速，適用于Hp感染的初篩。

Hp感染后能否致病，主要取決于產(chǎn)毒的菌株[12-13]。另外還與宿主對細(xì)菌的免疫狀況、宿主自身基因、飲食等狀況以及環(huán)境因素有關(guān)[14]。臨床上一般將菌株分為兩類[15-17]，即Ⅰ型和Ⅱ型。Ⅰ型為產(chǎn)細(xì)胞毒素的Hp菌株，即CagA和（或）VacA陽性，Ⅱ型為不產(chǎn)生細(xì)胞毒素的Hp菌株。即CagA和（或）VacA陰性。目前可通過免疫印跡法檢測出CagA和（或）VacA為Ⅰ型菌株，否則為Ⅱ型。Ⅰ型菌株毒力較強(qiáng)，Ⅱ型毒力較弱。它們的致病性有較大差異[18]。Hp免疫印跡法分型檢測有助于了解患者所感染Hp菌株的毒力，對于患者可以采取有效的針對性治療。Ⅰ型菌株能讓感染者患潰瘍或者胃癌等嚴(yán)重胃病的風(fēng)險(xiǎn)大大增加[19-20]，而Ⅱ型菌株幾乎沒有什么毒力，感染后一般只引起慢性淺表性胃炎[21]，或者無臨床癥狀。本研究中，147例不同消化道疾病患者抗體分型檢測Ⅰ型菌株占44.9%、Ⅱ型菌株占13.61%，二者差異具有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P = 0.000）。所以Ⅰ型菌株毒力較強(qiáng)是消化道疾病的主要致病因子。本研究還顯示40例反流性食管炎只有16例Hp感染陽性。與Grande等[22]研究表明Hp感染與反流性食管炎的發(fā)生無明顯關(guān)系的觀點(diǎn)一致。近年來有國內(nèi)外更多研究表明Hp感染，特別是Hp CagA陽性，對反流性食管炎的發(fā)生起保護(hù)作用[23-27]。因此，對于感染了Hp患者，進(jìn)行毒力分型檢測，能幫助醫(yī)生進(jìn)行精準(zhǔn)診斷，判斷感染者是否需要治療，對于臨床藥物治療的選擇提供重要的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。對于攜帶Ⅱ型菌株且無任何臨床癥狀的人群，可不必盲目選擇根除治療，可減少抗生素的使用，降低耐藥率。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Marshall BJ，Warren JR. Unidentifed curved bacilliin the stomach of patients with gastritis and peptic ulceration [J]. Lancet，1984，1（8390）：1311-1315.

[2] Buti M，Esteban R. Drugs indevelopment for hepatitis B [J]. Drugs，2017，77：1263-1280.

[3] 金珠，林三仁，沈祖堯，等.根除幽門螺旋桿菌對胃黏膜腸化的影響[J].中華消化雜志，2003，23（3）：161-164.

[4] 孫艷艷，王雅杰，康熙雄.幽門螺旋桿菌實(shí)驗(yàn)室診斷研究進(jìn)展[J].首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，28（2）：185-188.

[5] 蘇振華，王亮，魏思忱.血清胃功能、Hp檢測聯(lián)合窄帶成像放大內(nèi)鏡對胃潰瘍診斷的臨床價(jià)值[J].中國現(xiàn)代醫(yī)生，2018，56（13）：37-39，43.

[6] Braden B，Duan LP，Caspary WF，et al. More convenient 13C-urea breath test modifications still meet the criteria for valid diagnosis of Helicobacter pylori infection [J]. Z Gastroenterol，1944，32（4）：198-202.

[7] Mccoll K，Elnujumi A，Elomar E，et al. Evidence supporting a H-pylori test and treat strategy for simple dyspepsia [J]. Gastroenterology，1996，110（4）：A28.

[8] Mumtaz K，Abid K，Yakoob J，et al. An office-based serological test for detection of current Helicobacter pylori infection：is it useful？ [J]. Eur J Gastroenterol Hepatol，2006， 18（1）：85-88.

[9] Hung CT，Leung WK，Chan F，et al. Comparison of two rapid serology tests for the diagnosis of Helicobacter pylori in Chinese patients [J]. Dig Liver Dis，2002，34（2）：111-115.

[10] 王韶英，陳錫美，王迎昕.幽門螺旋桿菌血清分型與上消化道疾病的關(guān)系[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2008，24（22）：3869- 3871.

[11] Ahn HJ，Lee DS. Helicobacter pylori in gastric carcinogenesis [J]. World J Gastrointest Oncol，2015，7（12）：455-465.

[12] 潘秀珍.幽門螺旋桿菌的毒力研究[J].華人消化雜志，1998（S2）：20-21.

[13] 湯紹輝，羅和生.幽門螺旋桿菌CagA及VacA基因的研究進(jìn)展[J].世界華人消化雜志，1999，7（10）：885-886.

[14] Parkin DM，Bray F，F(xiàn)erlay J，et al. Global cancer statistice，2002 [J]. CA Cancer J Clin，2005，55（2）：74-108.

[15] Veedu RN，Wengel J. Locked nucleic acids promising nucleic acid analogs for therapeutic applications [J]. Chem Biodivers，2010，7（3）：536-542.

[16] 曾濤，翁永彬，楊宗梅.幽門螺桿菌感染與胃癌患者臨床特征和生存狀況的關(guān)系研究[J].癌癥進(jìn)展，2016，14（7）：690-692.

[17] 楊松濤.老年十二指腸潰瘍根除Hp治療對胃排空及炎癥因子水平的影響[J].河北醫(yī)學(xué)，2016，22（5）：711-714.

[18] Argent RH，Thomas RJ，Aviles-Jimenez F，et al. Toxigenic Helicobacter pylori infection preeedes gastric hypochlorhydria in cancer relatives，and H. pylori virulence evolves in these families [J]. Clin Cancer Res，2008， 14（7）：2227-2235.

[19] Maeda S，Kanai F，Ogura K，et al. High seropositivity of anti-CagA antibody in Helicobacter pylori-infected patients irrelevant to peptic ulcers and mormal mucosa in Japan [J]. Dig Dis Sci，1997，42（9）：1841-1847.

[20] Cover TL，Glupczynski Y，Lage AP，et al. Serologic detection of infection with CagA + Helicobacter pylori strains [J]. J Clin Microbiol，1995，33（6）：1496-1500.

[21] Basso D，Navaglia F，Brigato L，et al. Analysis of Helicobacter pylori VacA and CagA genotypes and serum antibody profile in benign and malignant gastroduodenal diseases [J]. Gut，1998，43（2）：182-186.

[22] Grand M，Cadeddu F，Villa M，et al. Helicobacter pylori and gastroesophageal reflux disease [J]. Lancet，1999，13（8）：74.

[23] 游海梅，胡團(tuán)敏.幽門螺旋桿菌CagA基因與消化系疾病關(guān)系的研究進(jìn)展[J].世界華人消化雜志，2013，21（16）：1505-1510.

[24] 高利民，武彥芳.胃癌及癌前疾病與血清胃泌素17的測定及其他影響因素研究[J].癌癥進(jìn)展，2016，14（8）：817-819.

[25] 陳彬，詹學(xué).幽門螺桿菌體外培養(yǎng)技術(shù)的研究進(jìn)展[J].中國醫(yī)藥科學(xué)，2018，8（8）：21-23，33.

[26] 王偉峰，呂建楠.幽門螺桿菌感染與不同人群胃腸外疾病的關(guān)系[J].醫(yī)學(xué)綜述，2018，24（6）：1126-1131.

[27] 范洪起.10天序貫療法根除幽門螺旋桿菌感染臨床療效分析[J].中國醫(yī)藥科學(xué)，2016，6（9）：187-190.