雙黃花片對(duì)急性上呼吸道感染患者炎癥因子及 免疫功能的影響

王華　孟盼

〔摘要〕 目的 探討雙黃花片對(duì)急性上呼吸道感染患者炎癥因子和免疫功能的影響。方法 將72例受試者按1∶1的比例，隨機(jī)分為雙黃花片治療組和感冒清片對(duì)照組，療程5 d；觀察急性上呼吸道感染疾病的臨床療效，采用雙抗體夾心ABC-ELISA法測定血清炎癥因子IL-2、IL-6、IL-8、TNF-α含量，流式細(xì)胞儀（FACS Calibur）檢測外周血T細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平。結(jié)果 經(jīng)治療后，治療組疾病綜合療效明顯高于對(duì)照組（P<0.01）。治療組患者血清炎癥因子IL-2、IL-6、IL-8、TNF-α水平明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。治療組患者的T細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 雙黃花片治療急性上呼吸道感染有較好的療效，可降低炎癥因子水平，提高機(jī)體免疫能力。

〔關(guān)鍵詞〕 急性上呼吸道感染；風(fēng)熱證；雙黃花片；炎癥因子；免疫功能

〔中圖分類號(hào)〕R289.5；R254.1 〔文獻(xiàn)標(biāo)志碼〕B 〔文章編號(hào)〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2018.05.021

Effect of Shuanghuanghua Tablet on Inflammatory Factors and Immune Function in

Patients with Acute Upper Respiratory Infection

WANG Hua1， MENG Pan2， CHEN Mingfeng3， ZHANG Suying2*

（1. The First Hospital of Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410007， China；

2. Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410208， China； 3. The Eighth Hospital of

Changsha， Changsha， Hunan 410100， China）

〔Abstract〕 Objective To explore the effect of Shuanghuanghua tablet on inflammatory factors and immune function in patients with acute upper respiratory infection. Methods A randomized method was used to divide 72 subjects into the treatment group （Shuanghuanghua tablet） and the control group （Ganmaoqing tablet）， according to the proportion of 1：1， with a course of 5 days. The clinical efficacy of acute upper respiratory tract infection was observed. The serum inflammatory factors interleukin 2 （IL-2）， interleukin 6 （IL-6）， interleukin 8 （IL-8） and tumor necrosis factor alpha （TNF-α） were determined by double-antibody sandwich ABC-ELISA. The level of T cell subsets of peripheral blood CD3+， CD4+， CD8+ and CD4+/CD8+ was detected by Flow cytometry （FACS Calibur）. Results After treatment， the curative effect of the treatment group was significantly higher than the control group （P<0.01）. The levels of serum inflammatory factors IL-2， IL-6， IL-8 and TNF-α in the treatment group were significantly lower than the control group， the difference was statistically significant （P<0.05）. The T-cell subgroup CD3+， CD4+， CD8+ and CD4+/CD8+ in the treatment group were significantly higher than the control group， the difference was statistically significant （P<0.05）. Conclusion Shuanghuanghua tablet has a good therapeutic effect on acute upper respiratory infection， which can reduce the level of inflammatory factors and improve the immune ability of the body.

〔Keywords〕 acute upper respiratory infection； wind-heat syndrome； Shuanghuanghua tablet； inflammatory factors； immune function

急性上呼吸道感染主要是由病毒感染引起 [1]，由于病毒類型較多，其發(fā)病率非常高。感染病毒的種類不同及病人個(gè)體免疫力不同，病情輕重也不一。迄今為止，西醫(yī)多以退熱對(duì)癥治療或抗生素輔助治療方法為主，缺乏特效抗病毒藥物。因病毒侵襲人體后，會(huì)啟動(dòng)一系列免疫病理變化[2]。本課題選取了72例急性上呼吸道感染風(fēng)熱患者，探討雙黃花片對(duì)急性上呼吸道感染（風(fēng)熱證）患者炎癥因子IL-2、IL-6、IL-8、TNF-α的水平和T細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+免疫功能的影響。

1 資料與方法

1.1 病例選擇

1.1.1 西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn) 參照“十一五”國家級(jí)規(guī)劃教材《內(nèi)科學(xué)》第七版內(nèi)容[3]。（1）有感冒反復(fù)發(fā)作史。（2）以局部癥狀為主，全身癥狀可有或不明顯。①局部癥狀：噴嚏、鼻塞、流涕、有時(shí)咳嗽、咽痛、咽喉紅腫、聲嘶、流淚；②全身癥狀：發(fā)熱微惡寒、全身不適、頭痛頭昏、倦怠無力、氣短懶言。（3）血象：白細(xì)胞計(jì)數(shù)多正常或偏低。

1.1.2 中醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn) 參照《中華人民共和國中醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)·中醫(yī)病證診斷療效標(biāo)準(zhǔn)》[4]和專家意見制定。（1）主癥：①發(fā)熱；②咽痛；③鼻塞；④噴嚏；⑤氣短乏力、少氣懶言；（2）次癥：①流涕；②咳嗽；③頭痛；④肢體酸痛；⑤惡寒；⑥口干。凡具備主癥①②③④≥2項(xiàng)，次癥≥2項(xiàng)，結(jié)合體征及舌脈即可辨證為急性上呼吸道感染風(fēng)熱證。

1.1.3 納入標(biāo)準(zhǔn) （1）符合西醫(yī)、中醫(yī)疾病診斷標(biāo)準(zhǔn)；（2）符合風(fēng)熱證的中醫(yī)證候診斷標(biāo)準(zhǔn)；（3）病程≤36小時(shí)；（4）年齡為18歲～65歲；（5）自愿加入本研究，并簽署知情同意書。

1.1.4 排除標(biāo)準(zhǔn) （1）本次就診前36小時(shí)內(nèi)已使用其他治療本病藥物者（包括抗病毒、激素、解熱鎮(zhèn)痛等中西藥物和治療方法）；（2）體溫≥39.0 ℃；（3）根據(jù)體征、癥狀、實(shí)驗(yàn)室檢查或咽拭子細(xì)菌培養(yǎng)有細(xì)菌感染的高度可能性，如白細(xì)胞計(jì)數(shù)>10.0×109/L、嗜中性粒細(xì)胞≥80%或咽拭子細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果為陽性；（4）已經(jīng)發(fā)現(xiàn)肺部出現(xiàn)陰影或感染體征；（5）合并氣管—支氣管炎、咽—結(jié)膜熱、鼻竇炎、過敏性鼻炎、化膿性扁桃體炎、肺炎、肺結(jié)核等；（6）合并心、腦、肺、肝、腎及造血等系統(tǒng)嚴(yán)重原發(fā)性疾病，以及精神病受試者；（7）過敏性體質(zhì)（對(duì)2類以上物質(zhì)過敏者），或?qū)Ρ局苿┙M成成分過敏者；（8）血肌酐（Cr）超過正常值上限，谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、尿素氮（BUN）超過正常值上限1.5倍；（9）妊娠、哺乳期及準(zhǔn)備受孕婦女；（10）在入組前1個(gè)月內(nèi)參加其他臨床研究。

注：因納入標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定病人發(fā)病時(shí)間需在36 h內(nèi)，而咽拭子細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果需3～5 d才能出來，則受試者可先入組，等咽拭子細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果出來后，剔除結(jié)果陽性者。

1.2 一般資料

觀察患者72例為2015年5月至2016年12月湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院呼吸科門診病人。隨機(jī)分為治療組36例，對(duì)照組36例，病程≤36 h。治療組中，男19例，女17例；平均年齡（36.03±6.35）歲。對(duì)照組男16例，女20例；平均年齡（38.42±7.01）歲。兩組病例的基線資料包括身高、生命體征（腋下體溫、呼吸、脈搏）等差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具可比性。

1.3 治療方法

1.3.1 治療組 雙黃花片（由黃芪、黃芩、金銀花組成，由湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥劑室提供，批號(hào)20150201），用法用量為：口服，3片/次，3次/d。

1.3.2 對(duì)照組 感冒清片[國藥準(zhǔn)字Z13021722，圣大（唐山）藥業(yè)有限公司，0.22 g/片]口服，3片/次，3次/d。

2組療程均為5 d。

1.4 觀察指標(biāo)和方法

1.4.1 疾病的臨床療效判定[5] 臨床癥狀積分計(jì)分標(biāo)準(zhǔn)為主癥按無、輕、中、重度分別計(jì)0、2、4、6分，舌象、脈象僅做參考，不計(jì)入總分。痊愈：治療5 d以內(nèi)體溫恢復(fù)正常，癥狀體征消失，且無反復(fù)。顯效：治療5 d以內(nèi)體溫恢復(fù)正常，癥狀積分減少≥70%。有效：治療5 d以內(nèi)體溫較以前降低，癥狀積分減少≥30%，但<70%。無效：治療5 d以內(nèi)體溫未降或升高，癥狀積分減少<30%。

1.4.2 免疫細(xì)胞檢測 患者空腹于治療前和治療后分別取外周血5 mL，采用不同單抗染色測定CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+細(xì)胞水平。每個(gè)采樣管采集50 μL血液，分別加入5 μL PerCP偶聯(lián)CD3單克隆抗體、FITC偶聯(lián)CD4單克隆抗體、PE偶聯(lián)CD8單克隆抗體、FITC偶聯(lián)CD3單克隆抗體和PE偶聯(lián)CD16CD56單克隆抗體。樣品在室溫下放置0.5 h， 再加入FACS細(xì)胞裂解液，靜置6 min。用PBS緩沖液洗過2遍后，進(jìn)流式細(xì)胞儀（FACS Calibur）上檢測。

1.4.3 炎癥因子檢測 患者空腹于治療前和治療后分別取外周血5 mL，分離血清，采用雙抗體夾心ABC-ELISA法測定IL-2、IL-6、IL-8、TNF-α含量?？谷薎L-2、IL-6、IL-8、TNF-α單抗包被于酶標(biāo)板上，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的IL-2、IL-6、IL-8、TNF-α與單抗結(jié)合，分別加入生物素標(biāo)記的抗人IL-2、IL-6、IL-8、TNF-α抗體，形成免疫復(fù)合物連接在板上，過氧化物酶標(biāo)記的親和素與生物素結(jié)合，加入酶底物TMB，出現(xiàn)顏色，加TMB終止液，顏色改變。在不同波長處測定OD值，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中的物質(zhì)濃度。

IL-2、IL-6、IL-8、TNF-α ELISA試劑盒購自北京中杉金橋公司，CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+抗體購自BD公司。MK3型酶標(biāo)儀購自美國Thermo公司，流式細(xì)胞儀購自美國BD公司。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行結(jié)果分析。所有的統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)均采用雙側(cè)檢驗(yàn)，計(jì)量資料用“x±s”表示，t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者臨床療效比較

治療5 d后，治療組患者總有效率為94%顯著高于對(duì)照組72%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），結(jié)果見表1。

2.2 兩組患者血清炎癥因子比較

治療前2組患者的血清炎癥因子 TNF-？琢、IL-2、IL-6、IL-8水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。治療后治療組患者的血清炎癥因子TNF-？琢、IL-2、IL-6、IL-8水平明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），結(jié)果見表2。

2.3 兩組患者免疫功能比較

治療前2組患者的T細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。治療后治療組患者的T細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），結(jié)果見表3。

3 討論

急性上呼吸道感染，是鼻腔、咽或喉部急性炎癥的概稱，絕大多數(shù)是自限性疾病，也是基層醫(yī)院最常見的疾病之一[6-7]。西醫(yī)治療急性上呼吸道感染采用抗生素治療，目前濫用抗生素現(xiàn)象仍然十分嚴(yán)重，已成為世界性難題，我國抗生素的使用率不僅嚴(yán)重呈上升趨勢，而且引起耐抗生素致病菌日漸增多[8-10]。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為上呼吸道感染是由于風(fēng)邪兼挾寒熱暑濕等邪外襲肺衛(wèi)而引起，同時(shí)也與體虛衛(wèi)外不固、肺經(jīng)素有痰熱伏火等稟賦素質(zhì)有關(guān)[11]。中醫(yī)藥治療具有早期起效迅速、療效顯著、費(fèi)用低、副作用較少等特點(diǎn)。

本研究結(jié)果表明，治療5 d后，治療組患者疾病綜合療效總有效率為94%，顯著高于對(duì)照組72%，雙黃花片主要由黃芪、黃芩、金銀花組成，具有清熱解毒、益氣扶正作用，起到扶正祛邪之效。黃芪素有“入肺補(bǔ)氣，入表實(shí)衛(wèi)，為補(bǔ)氣諸藥之最”味甘，性微溫，為補(bǔ)氣升陽之圣藥，又能增強(qiáng)機(jī)體的免疫力[12]。金銀花芳香疏散，善散肺經(jīng)熱邪，透熱達(dá)表，黃芩苦寒，善邪肺火及上焦實(shí)熱，與金銀花配伍，清熱解毒之功大增[13]。三藥搭配攻補(bǔ)兼施，相輔相成，具有清宣肺氣、清熱解毒、平衡陰陽，從而達(dá)到“扶正以祛邪”“邪去而正安”的目的。急性上呼吸道感染存在炎癥反應(yīng)，外周血中腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor alpha，TNF-α）和IL-1、IL-2、IL-6、IL-8等炎性細(xì)胞因子的高表達(dá)已成為病毒感染的標(biāo)志[14]，TNF-α可通過激活T細(xì)胞，促進(jìn)IL-1、IL-2、IL-6、IL-8的產(chǎn)生及分泌，而IL、TNF-α及趨化因子對(duì)介導(dǎo)炎癥反應(yīng)發(fā)生、調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答強(qiáng)度起重要作用[15]。這些炎癥因子在外周血含量上升將會(huì)導(dǎo)致機(jī)體發(fā)熱等一系列炎性反應(yīng)產(chǎn)生和病情的加重。治療后治療組患者的血清炎癥因子IL-2、IL-6、IL-8、和TNF-α明顯低于對(duì)照組（P<0.05）。說明雙黃花片可減輕急性上呼吸道感染的炎癥反應(yīng)。急性上呼吸道感染導(dǎo)致機(jī)體免疫功能的免疫細(xì)胞亞群、免疫細(xì)胞及因子失衡，而機(jī)體抵御病毒感染主要依靠T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫，CD3+、CD4+、CD8+等T細(xì)胞亞群降低，雙向免疫功能紊亂[16]。治療后治療組患者的T細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。說明雙黃花片可提高上呼吸道感染的免疫功能，其作用機(jī)理可能與調(diào)節(jié)T細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+有關(guān)，從而保護(hù)機(jī)體，阻止疾病的發(fā)展，促進(jìn)的疾病的恢復(fù)。雙黃花有較好的鎮(zhèn)咳、祛痰、退熱及調(diào)節(jié)免疫等藥理作用[17]，有研究表明金銀花中黃酮類、有機(jī)酸、三萜皂苷類，黃芩中黃芩素、黃芩苷，黃芪中黃酮類，均具有抗炎、抗菌、調(diào)節(jié)免疫等藥理作用[18-20]?？傊p黃花片通過調(diào)節(jié)機(jī)體免疫網(wǎng)絡(luò)，降低炎癥因子水平，提高免疫功能，起到抗病毒免疫作用，對(duì)治療急性上呼吸道具有較好的臨床療效。

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