健脾軟肝方對四氯化碳致肝纖維化大鼠α—SMA及其mRNA表達(dá)的影響

陳文玲 王憲東 陳文慧 朱曉松 姚政 石安華

摘要 目的：明確健脾軟肝方對肝纖維化大鼠α-SMA及其mRNA表達(dá)的影響，初步探討健脾軟肝方防治肝纖維化的作用機(jī)制，為肝纖維化的中醫(yī)臨床治療提供實(shí)驗依據(jù)。方法：選取Wistar雄性大鼠72只，隨機(jī)分為正常組、模型組、扶正化瘀膠囊組、健脾軟肝方高、中、低劑量組。模型組利用CCl4對大鼠進(jìn)行腹腔注射，按0.2 mL/100 g腹腔注射30% CCl4與70%橄欖油混合溶液，正常組注射等量生理鹽水，2次/周，4周后復(fù)制大鼠肝纖維化動物模型，該實(shí)驗采用免疫組化ABC法檢測肝纖維化大鼠α-SMA蛋白的表達(dá)水平，采用Real-time PCR法檢測肝纖維化大鼠α-SMA mRNA的表達(dá)水平，采用H-E染色和Mallory染色觀察大鼠肝纖維化的病變程度。結(jié)果：模型組α-SMA蛋白表達(dá)顯著上升（P<0.05）；健脾軟肝方高、中、低劑量組組與模型組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），其中高、中、低劑量組之間α-SMA蛋白陽性表達(dá)逐漸升高，可以呈一定的藥物依賴關(guān)系。模型組α-SMA mRNA表達(dá)顯著上升（P<0.05）；健脾軟肝方高、中、低劑量組組與模型組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），且高、中、低劑量組之間α-SMA mRNA表達(dá)水平逐漸升高，呈一定的藥物依賴關(guān)系。結(jié)論：健脾軟肝方抗肝纖維化的作用機(jī)制可能與抑制大鼠肝臟內(nèi)α-SMA及其mRNA的表達(dá)有關(guān)。

關(guān)鍵詞 健脾軟肝方；肝纖維化；α-平滑肌肌動蛋白；大鼠；四氯化碳

Abstract Objective：To study the effects of Jianpi Ruangan Formula on the expression of α-smooth muscle actin （α-SMA） and m-RNA in rats with hepatic fibrosis induced by carbon tetrachloride （CCl4），to preliminarily discuss the mechanism of Jianpi Ruangan Formula in preventing and treating liver fibrosis，and to provide experimental basis for clinic treatment of hepatic fibrosis in traditional Chinese medicine.Methods：A total of 72 Wistar male rats were selected and randomly divided into normal group，model group，F(xiàn)uzheng Huayu Capsule group，Jianpi Ruangan Formula high，middle，low dose group.Rats in model group was intraperitoneally injected with the mixed solution of 30% CCl4 and 70% olive oil at 0.2 mL/100 g while the normal group was intraperitoneally injected with the same dose of saline.Each group injected twice a week for 4 weeks，and the animal models of rat liver fibrosis was replicated after 4 weeks.The expression of α-SMA in rats with hepatic fibrosis was detected by ABC immunohistochemical method and expression of the m-RNA was determined by Real-time PCR method.The HE staining and Mallory staining were applied to observe the pathological changes of hepatic fibrosis in rats.Results：The expression of α-SMA protein in model group increased （P<0.05）.Compared with the Jianpi Ruangan formula high，middle，low doze groups，the difference was statistically significant （P<0.05）.Among them，the positive expression of α-SMA protein in the high，middle and low dose groups gradually increased，showing some signs of drug dependence.Compared with the Jianpi Ruanfang formula high，middle，low doze groups，the expression of α-SMA mRNA in model group significantly increased （P<0.05），and there was significant difference （P<0.05）.The expression of α-SMA mRNA in the high，middle and low dose groups gradually increased，showing some signs of drug dependence.Conclusion：The mechanism of the Jianpi Ruangan Formula against hepatic fibrosis may be related to the inhibition of the expression of α-SMA and m-RNA in rat liver.

Key Words Jianpi Ruangan Formula； Hepatic fibrosis； α-smooth muscle actin

中圖分類號：R285.5文獻(xiàn)標(biāo)識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2018.09.041

肝纖維化（Hepatic Fibrosis）是指肝臟內(nèi)彌漫性細(xì)胞外基質(zhì)過度增生堆積的病理階段，是肝臟在多種病因的作用下，肝細(xì)胞損傷后自我修復(fù)的病理反應(yīng)。誘發(fā)肝纖維化的病因多種多樣，其中病毒性肝炎為主要病因[1]。肝纖維化早期癥狀不明顯，患者常無明顯表象，如不及時治療，發(fā)展到后期極容易發(fā)展成為肝硬化[2]。慢性肝病現(xiàn)已成為威脅全球的人類身體健康的主要誘因，且在肝硬化失代償期難以治療，病死率極高，所以早期治療及預(yù)防肝纖維化的發(fā)生極為關(guān)鍵。α-平滑肌肌動蛋白（α-smooth Muscle Actin，α-SMA）是肝星狀細(xì)胞（HSC）活化的標(biāo)志，活化的HCS胞體展開，突出延長，增殖活躍，胞質(zhì)內(nèi)脂滴消失，表達(dá)α-SMA，產(chǎn)生ECM的能力增強(qiáng)，表明已轉(zhuǎn)變?yōu)榧〕衫w維細(xì)胞（Myofibroblast，MFB），除了增加基質(zhì)成分的合成之外，還能調(diào)節(jié)ECM的降解，在肝纖維化的進(jìn)程中起核胞。我們在前期研究中發(fā)現(xiàn)，健脾軟肝方可以有效的治療二甲基亞硝胺誘導(dǎo)的肝纖維化大鼠，健脾軟肝方抑制ColⅠ、ColⅢ膠原的合成，促使其降解，并在抑制HSC活化等方心作用。肝臟中僅有大血管壁平滑肌細(xì)胞存在α-SMA表達(dá)，其余肝臟細(xì)胞內(nèi)都無α-SMA表達(dá)；若肝臟細(xì)胞中出現(xiàn)大量α-SMA細(xì)胞表達(dá)，說明肝星狀細(xì)胞已經(jīng)轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)面較優(yōu)[3]，但是否與α-SMA蛋白及其mRNA的表達(dá)有關(guān)還不清除，本實(shí)驗以肝纖維化為研究對象，通過檢測肝纖維化大鼠α-SMA蛋白及其mRNA表達(dá)的影響，探討健脾軟肝方抗肝纖維化的機(jī)制是否與肝纖維化形成和發(fā)展有關(guān)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 本實(shí)驗選用健康雄性大鼠60只，體重（150±10） g，由四川達(dá)碩生物科技有限公司提供，動物質(zhì)量合格證書編號：0017752。所有大鼠自由飲水、攝食，云南中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗動物房中分籠飼養(yǎng)，環(huán)境溫度20～22 ℃，相對濕度50%～55%，通風(fēng)良好。

1.1.2 藥物 健脾軟肝方由蘭花參、白芍、莪術(shù)、香附、三七等中藥組成，生藥購自云南中醫(yī)學(xué)院校醫(yī)院門診部藥方，扶正化瘀膠囊購自于云南省中醫(yī)醫(yī)院門診部藥方，生產(chǎn)廠家為上海黃海制藥有限責(zé)任公司，生產(chǎn)批號：140309。

1.1.3 試劑與儀器 1）主要試劑：鼠抗α-SMA單克隆抗體，由博士德生物有限公司提供，大鼠α-平滑肌肌動蛋白（α-SMA）ELISA檢測試劑盒及DAB免疫組化顯色試劑盒由生工生物工程（上海）有限公司提供。2）主要儀器：DGX-9140電熱恒溫干燥箱（太倉市華利達(dá)實(shí)驗設(shè)備有限公司），熒光顯微鏡、Image-pro Plus5.0圖像分析系統(tǒng)（日本Olympus株式會社），SW-CJ-1D潔凈工作臺（江蘇蘇潔凈化設(shè)備廠），HC-2518R高速冷凍離心機(jī)（安徽中科中佳儀器有限公司），TU-1901紫外分光光度計（北京普析通用儀器有限公司），PCR反應(yīng)擴(kuò)增儀、移液器（加拿大BIO公司），StepOne型熒光定量PCR儀（美國應(yīng)用生物系統(tǒng)中國公司）。

1.2 實(shí)驗方法

1.2.1 動物的分組與模型制備 實(shí)驗所用動物隨機(jī)分為6組，即正常組，模型組，扶正化瘀膠囊組，健脾軟肝方低劑量組，健脾軟肝方中劑量組，健脾軟肝方高劑量組，10只/組。肝纖維化動物模型的建立成功與否，是研究肝纖維化發(fā)生發(fā)展的前提。本實(shí)驗從第1周起，2次/周對大鼠進(jìn)行腹腔注射，共注射四周，劑量為0.2 mL/100 g。其中模型組、扶正化瘀膠囊組、健脾軟肝方低劑量組、健脾軟肝方中劑量組、健脾軟肝方高劑量組分別腹腔注射70%橄欖油與30% CCl4混合溶液，正常組腹腔注射等量的生理鹽水。各組大鼠均給予普通飼料飼養(yǎng)，自由飲水。

1.2.2 動物給藥劑量及方法 健脾軟肝方按等效劑量換算法，成人每日用量為60 g，每200 g大鼠1 d所需生藥量（g）=60 g×0.018=1.08，為0.54 g/100 g·d。扶正化瘀膠囊組規(guī)格為0.3 g/粒，成人每日每次用量為：3次/d，5粒/次。據(jù)人和大鼠間體表面及折算的等效劑量比值表計算臨床等效劑量，從第一周開始給予空白組和模型組等量的生理鹽水灌胃，健脾軟肝方高、中、低劑量組每天給予相應(yīng)劑量灌胃（分別是1.08 g/100 g·d、0.54 g/100 g·d、0.27 g/100 g·d），扶正化瘀膠囊組給予灌胃0.0405 g/100 g·d。

1.2.3 檢測指標(biāo)與方法

1.2.3.1 病理組織學(xué)檢查 病理組織學(xué)采用H-E及Mallory染色2種染色方法，染色后通過光學(xué)顯微鏡觀察并記錄切片中大鼠肝組織的病變程度。在第4周末，各組大鼠禁食12 h，飲水正常。第2天以10%的水合氯醛配90%生理鹽水，按照每0.25 mL/100 g的劑量計算，對大鼠腹腔注射麻醉，迅速取出大鼠肝臟，分切成1 cm×1 cm×3 cm，置于福爾馬林溶液保存?zhèn)溆?，并分別進(jìn)行脫水、包埋、脫蠟、染色、封片，進(jìn)行H-E及Mallory染色觀察。

1.2.3.2 肝纖維化分級 肝纖維化的分級標(biāo)準(zhǔn)是根據(jù)觀察匯管區(qū)周圍肝細(xì)胞炎性反應(yīng)程度、小葉內(nèi)情況及纖維增生程度，將肝纖維化分為4級，具體分級標(biāo)準(zhǔn)參考中華醫(yī)學(xué)會2002年肝病學(xué)肝纖維化診斷及療效評估共識[4]。見表1。

1.2.3.3 免疫組化ABC法檢測大鼠肝組織中α-SMA的蛋白表達(dá) 將標(biāo)本放置于4%多聚甲醛常規(guī)灌注固定，取材后放置于20%蔗糖溶液12 h，制作蠟塊，制作切片，并貼片，PBS清洗。之后將切片分別放置于0.3%的過氧化氫甲醇溶液30 min、0.3% Triton X100 30 min、血清稀釋液稀釋的一抗在4 ℃冰箱中放置24～48 h、于PBS稀釋的的二抗中室溫孵育2 h、ABC復(fù)合物之類的抗體室溫孵育2 h，最后將切片放置于顯色液中，進(jìn)行染色，時間控制在30 min左右，在這期間需要經(jīng)常在顯微鏡下進(jìn)行觀察，若細(xì)胞著色且背底顏色較淡時，應(yīng)迅速清除顯色液，α-SMA蛋白陽性表達(dá)在切片上呈棕黃色，利用Image-pro Plus 6.0軟件分對切片進(jìn)行定量分析，每張切片在光學(xué)顯微鏡下去5個視野（×40），測定α-SMA蛋白陽性表達(dá)的灰度值與總視野面積比值。

1.2.3.4 采用Real-time PCR法檢測cDNA樣本中α-SMA基因相對含量 大鼠肝組織α-SMA的表達(dá)采用Real-time PCR法。將大鼠肝臟組織均質(zhì)化、勻漿并離心，提取上清液，之后相分離上清液，抽取肝組織水相中的總RNA，按試劑盒說明操作，然后以cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增。引物序列：α-SMA上游引物5′-CGGGAGAAAATGACCCAGAT-3′，下游引物5′-CCAGAGTCCAGCACAATACCA-3′；內(nèi)參β-actin上游引物5′-CGTAAAGACCTCTATGCCAACA-3′，下游引物5′-AGCCACCAATCCACACAGAG-3′；在PCR管中加入total RNA，Random Primer p（dN）6，之后冰浴，離心加入下列試劑，37 ℃溫浴5 min、42 ℃溫浴60 min、70 ℃溫浴10 min。終止反應(yīng)，最后將上述溶液-20 ℃保存。完成上述步驟后，把加好樣品的96孔板放在ABI Stepone plus型熒光定量PCR儀中進(jìn)行反應(yīng)。收集數(shù)據(jù)，采用2-△△Ct法，通過Ct值對樣本基因表達(dá)量的進(jìn)行計算。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析，計數(shù)資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，各組實(shí)驗結(jié)果的統(tǒng)計數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布，使用單因素方差分析，不符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)使用秩和檢驗。2個數(shù)據(jù)之間比較時，若方差齊則使用LSD方法檢驗，若方差不齊時使用Dunnett T3檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大鼠大體形態(tài)和大鼠肝臟觀察 實(shí)驗從第一周便開始造模，正常組大鼠飲食飲水正常，毛色光澤，大小便正常，身體狀態(tài)良好。模型組大鼠進(jìn)食及進(jìn)水量均減少，毛色暗黃無光澤，大便時而稀溏不成形，小便色黃，精神萎靡，注射部位無紅腫感染，肛門區(qū)紅腫。健脾軟肝方高、中、低劑量組大鼠與模型組比較活動度較好，進(jìn)食進(jìn)水量較模型組比較有所增加，毛色較光澤，大便時而有稀溏但總體狀況較好，腹腔注射部位無感染。正常組大鼠肝臟呈褐色，體積適中，表面光滑，質(zhì)地柔軟，邊緣呈銳圓狀，無結(jié)締組織粘連，無包塊。模型組大鼠肝臟較正常組顏色淺，呈暗紅色，肝臟體積大于正常組，表面有結(jié)節(jié)，質(zhì)地較硬，邊緣呈鈍圓莊且有結(jié)締組織粘連。扶正化瘀膠囊組及健脾軟肝方高、中、低劑量組大鼠肝臟顏色較模型組色澤變深，表面較光滑，肝臟大小與正常組比較稍微增大，表面有輕微結(jié)節(jié)，質(zhì)地硬，但總體狀況好于模型組。

2.2 大鼠肝臟病理組織學(xué)觀察 H-E染色，光學(xué)顯微鏡下提示，正常組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)正常，肝細(xì)胞呈現(xiàn)卵圓狀，并以中央靜脈為圓心，肝細(xì)胞呈放射狀排列，細(xì)胞核呈圓形，肝索排列規(guī)則。模型組大鼠肝細(xì)胞腫脹變形，假小葉形成，肝索排列紊亂，局部肝細(xì)胞發(fā)生脂肪變性，膠原纖維組織擴(kuò)大。此種現(xiàn)象說明CCl4誘導(dǎo)的肝纖維化大鼠造模已經(jīng)成功。健脾軟肝方高、中、低劑量組及扶正化瘀膠囊組病變程度與模型組比較，病變程度較輕，肝索排列紊亂，有假小葉形成，脂肪病變程度較輕，有少許脂肪樣空泡形成，且膠原纖維減少，但光鏡下并不能明顯判斷各組間差別。

Mallory染色時，切片上膠原纖維會表現(xiàn)為藍(lán)色絲帶狀組織。光學(xué)顯微鏡下，正常組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)正常，肝細(xì)胞呈卵圓狀，肝細(xì)胞呈放射狀排列，細(xì)胞核圓形，肝索排列規(guī)則。模型組大鼠肝細(xì)胞變性，假小葉形成，大量脂肪空泡出現(xiàn)，纖維結(jié)締組織大量沉積，肝小葉和匯管區(qū)機(jī)構(gòu)被破壞。健脾軟肝方高、中、低劑量組及扶正化瘀膠囊組有假小葉形成，各組匯管區(qū)有少量纖維結(jié)締組織沉積，并少量脂肪空泡聚集，肝小葉的結(jié)構(gòu)有一定程度的破壞，但總體破壞程度較與模型組比較好。

2.3 肝纖維化的分級程度 Mallory染色完成后，觀察切片后發(fā)現(xiàn)，模型組大鼠肝組織中，假小葉形成較多，大部分處于S3型這一階段這也從側(cè)面提示動物模型復(fù)制成功。健脾軟肝方高、中、低劑量組及扶正化瘀膠囊組大鼠肝組織中有少量膠原纖維形成，但大部分處于S2階段，說明治療后有一定效果，各組大鼠肝纖維化程度有所減輕。

2.4 各組大鼠肝組織α-SMA蛋白的表達(dá)的觀察

肝組織α-SMA蛋白的表達(dá)，正常組大鼠肝組織中僅在血管壁周圍見少量α-SMA表達(dá)，模型組大鼠肝組織中見大量α-SMA表達(dá)，主要集中在匯管區(qū)、中央靜脈、假小葉纖維膈及臨近的肝竇區(qū)周圍。正常組與模型組比較，模型組顯著上升（P<0.05）；扶正化瘀膠囊組與模型組比較有顯著性差異（P<0.05）；健脾軟肝方高、中、低劑量組組與模型組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），健脾軟肝方高、中、低劑量組之間α-SMA蛋白在肝組織中陽性表達(dá)逐漸升高，可以呈一定的藥物依賴關(guān)系。

2.5 各組大鼠肝組織α-SMA mRNA的表達(dá) 肝組織α-SMA mRNA的表達(dá)：正常組與模型組比較，模型組顯著上升（P<0.05）；扶正化瘀膠囊組為與模型組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；健脾軟肝方高、中、低劑量組組與模型組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），高、中、低劑量組之間α-SMA mRNA表達(dá)水平逐漸升高，呈一定的藥物依賴關(guān)系。

3 討論

肝纖維化是一種慢性肝損傷導(dǎo)致的肝臟病理改變，HSC的活化是肝纖維化發(fā)生的中心環(huán)節(jié)[5]。HSC在肝臟中稱之為儲脂細(xì)胞，屬于肝臟間質(zhì)細(xì)胞，正常情況下HSC呈卵圓狀，位于肝索與肝竇壁之間，可以貯藏脂肪與維生素A，合成少量金屬蛋白酶抑制劑等，當(dāng)各種致病因素持續(xù)作用于肝臟時，通過復(fù)雜的機(jī)制激活HSC。HSC被激活后，轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞，然后其在肝臟內(nèi)合成膠原纖維、蛋白多糖及糖蛋白等，從而形成了ECM并大量堆積于肝臟中，最終導(dǎo)致肝纖維化的發(fā)生[6]。平滑肌肌動蛋白共分為γ亞型、α、β 3型，其中α-SMA所占比例最高，α-SMA存在于脊椎類動物細(xì)胞中，其在細(xì)胞內(nèi)有豐富的能聚合成微絲，微絲可以撐起細(xì)胞的骨架，加強(qiáng)細(xì)胞的能動性，并可以促進(jìn)細(xì)胞的收縮及形成[7]。在生理條件下，α-SMA主要由平滑肌細(xì)胞和肌成纖維細(xì)胞表達(dá)，其表達(dá)很少，僅存在于血管壁上。當(dāng)HSC被激活后，α-SMA表達(dá)大量增加，并附著于假小葉增生的纖維膈內(nèi)。在各種急慢性肝病及相應(yīng)的動物模型中，大鼠HSC在活化過程中喪失Desmin，轉(zhuǎn)而表達(dá)α-SMA[8]。α-SMA是HSC活化的特有標(biāo)志物，α-SMA的表達(dá)與HSC的活化、增殖、復(fù)制呈正相關(guān)[9]。劉成[10]教授觀察肝纖維化形成過程中α-SMA與門脈壓力變化之間的關(guān)系，研究發(fā)現(xiàn)隨著肝纖維化程度的加重，α-SMA的表達(dá)也逐漸增加，二者呈正相關(guān)，且隨著α-SMA病變面積的擴(kuò)大，門脈壓力也隨之增加，二者也呈正相關(guān)。

α-SMA作為肝細(xì)胞內(nèi)肌動蛋白之一，對肝纖維化的發(fā)生發(fā)展起重要作用，是肝星狀細(xì)胞活化的重要標(biāo)志。謝君等[11]觀察肝蘇顆粒對CCl4致肝纖維化大鼠肝功能和病理損傷的影響，免疫組化結(jié)果發(fā)現(xiàn)肝蘇顆粒可以降低α-SMA蛋白的表達(dá)，改善肝功能，減輕肝纖維化的病變程度。邵佳亮等[12]觀察羥基喜樹堿對CCl4誘導(dǎo)的肝纖維化大鼠模型具有防治作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)羥基喜樹堿可以抑制肝星狀細(xì)胞的增殖，減少α-SMA蛋白的表達(dá)。本次實(shí)驗，我們采用免疫組化ABC法檢測大鼠肝組織中α-SMA蛋白的表達(dá)，通過結(jié)果，我們觀察發(fā)現(xiàn)，正常組大鼠肝組織中僅在血管壁周圍見少量α-SMA蛋白表達(dá)，模型組大鼠肝組織中見大量α-SMA蛋白表達(dá)，主要集中在匯管區(qū)、中央靜脈及臨近的肝竇區(qū)周圍。扶正化瘀膠囊組，健脾軟肝方高、中、低劑量組在匯管區(qū)也可見α-SMA蛋白的表達(dá)，但其病變程度比較模型組有所減輕，說明健脾軟肝方可以減少α-SMA蛋白的表達(dá)。馬力等[13]觀察瘧母丸對進(jìn)展期大鼠肝纖維化的干預(yù)作用，研究發(fā)現(xiàn)瘧母丸可以顯著的降低α-SMA mRNA的表達(dá)，抑制肝纖維化的進(jìn)展，且這一機(jī)制與抑制HSC的活化有關(guān)。吳芙蓉等[14]觀察橙皮苷對化學(xué)性肝纖維化大鼠α-SMA表達(dá)的影響，實(shí)驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)橙皮苷可以顯著的降低大鼠肝組織中α-SMA及其mRNA的表達(dá)，提示橙皮苷對化學(xué)性肝纖維化大鼠具有很好的保護(hù)作用，其機(jī)制與抑制肝星狀細(xì)胞的增殖、活化有關(guān)。本次實(shí)驗，我們采用Real-time PCR法檢測大鼠肝組織中α-SMA mRNA的表達(dá)，通過結(jié)果，我們觀察發(fā)現(xiàn)，正常組大鼠肝組織中僅少量表達(dá)α-SMA mRNA，正常組與模型組比較，模型組大鼠肝組織中α-SMA mRNA表達(dá)顯著上升（P<0.05）；扶正化瘀膠囊組與模型組比較，肝組織中α-SMA mRNA表達(dá)顯著下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；健脾軟肝方高、中、低劑量組肝組織中α-SMA mRNA表達(dá)也顯著下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），高、中、低劑量組之間α-SMA mRNA表達(dá)水平逐漸升高，呈一定的藥物依賴關(guān)系。由此可見，我們的結(jié)果與眾多專家的研究結(jié)論相一致，說明健脾軟肝方可以減少α-SMA mRNA的表達(dá)，其機(jī)制可能與抑制HSC的活化有關(guān)，從而起到治療肝纖維化的作用。此外，大鼠肝臟病理組織學(xué)Mallory染色結(jié)果也顯示，健脾軟肝方高、中、低劑量組及扶正化瘀膠囊組大鼠肝組織匯管區(qū)有少量纖維結(jié)締組織沉積，并少量脂肪空泡聚集，肝小葉的結(jié)構(gòu)有一定程度的破壞，但總體破壞程度較模型組比較好，這進(jìn)一步說明了健脾軟肝方可以改善大鼠肝纖維化的病變程度。

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（2017-12-12收稿 責(zé)任編輯：王明）