電針不同刺激量對急性期面神經損傷兔細胞因子信號轉導抑制因子1、3蛋白表達的影響

李小娟　嚴興科　曹朝霞

摘要：目的 觀察電針對急性期面神經損傷兔細胞因子信號轉導抑制因子（SOCS）1、SOCS3蛋白表達的影響，確定其較佳刺激量。方法 將新西蘭兔面神經用特制止血鉗壓榨5 min，損傷長度約2.5 cm，制作面神經損傷模型。實驗分為空白組、假手術組、模型組和電針弱、中、強刺激組。電針各組術后1 d予不同刺激量治療，連續(xù)7 d，模型組術后不予任何干預。治療結束后截取各組受損面神經，采用ABC-ELISA檢測介導JAK-STAT負反饋調節(jié)SOCS1、SOCS3的蛋白表達。結果 與空白組比較，模型組兔SOCS1、SOCS3蛋白表達增加（P<0.01）；與模型組比較，電針弱刺激組SOCS1、SOCS3蛋白表達降低（P<0.01）。結論 面神經損傷急性期電針弱刺激可使SOCS1、SOCS3蛋白表達趨于正常，電針治療效應不隨刺激量的增強而增加。

關鍵詞：電針；電刺激量；面神經損傷；細胞因子信號轉導抑制因子1；細胞因子信號轉導抑制因子3；兔

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2018.06.016

中圖分類號：R245 文獻標識碼：A 文章編號：1005-5304（2018）06-0066-03

Effects of Different Stimulation of Electroacupuncture on Protein Expressions of

SOCS1 and SOCS3 in Rabbits with Acute Facial Nerve Injury

LI Xiao-juan， YAN Xing-ke， CAO Zhao-xia， WEI Yu-ting， ZHAO Zhong-ting

Gansu University of Chinese Medicine， Lanzhou 730000， China

Abstract： Objective To investigate the effects of different stimulation of electroacupuncture on the protein expressions of SOCS1 and SOCS3 in rabbits with acute facial nerve injury； To determine the better stimulation. Methods New Zealand rabbits were treated with special hemostatic forceps for 5 min， and the length of the lesion was about 2.5 cm. The model of facial nerve injury was induced. The experiment was divided into blank group， sham-operation group， model group， and electoracupuncture weak-， medium-， and strong-stimulation group. The model group received no intervention after surgery. After treatment， the damaged facial nerve of each group was intercepted. The protein expressions of SOCS1 and SOCS3 mediated by negative feedback regulation of JAK-STAT were detected by ABC-ELISA. Results Compared with the blank group， the protein expressions of SOCS1 and SOCS3 in the model group increased （P<0.01）. Compared with the model group， the protein expressions of SOCS1 and SOCS3 protein in electroacupuncture weak- stimulation group decreased （P<0.01）. Conclusion Electroacupuncture can make SOCS1， SOCS3 protein expressions normal for acute facial nerve injury， and acupuncture treatment effect does not increase with the increase of stimulation.

Keywords： electroacupuncture； electrical stimulation； facial nerve injury； SOCS1； SOCS3； rabbits

面神經損傷影響患者的表情運動等生理功能，且影響患者身心健康及生活質量。臨床上電針治療本病療效較好[1-3]。相關機制研究已深入開展，其中細胞因子信號轉導抑制因子（SOCS）家族是JAK-STAT通路最重要的抑制信號因子[4]。有研究發(fā)現，SOCS1、SOCS3蛋白與面神經修復密切相關[5-7]。本實驗以壓榨性損傷模型兔為研究對象，采用ABC-ELISA檢測兔面神經組織SOCS1、SOCS3的含量，觀察電針不同刺激量對急性期面神經損傷兔SOCS1、SOCS3蛋白表達的影響，為臨床應用提供依據。

1 材料與方法

1.1 動物及分組

健康成年SPF級新西蘭兔60只，雌雄各半，85～90日齡，體質量2～2.5 kg，動物許可證號SCXK（川）2013-14，四川省實驗動物專委會養(yǎng)殖場提供，飼養(yǎng)環(huán)境溫度（20±2）℃，相對濕度（50±10）%，每日光照時間12 h，自由攝食飲水。本實驗嚴格遵循科技部《關于善待實驗動物的指導性意見》的相關規(guī)定。實驗動物采用隨機數字表法分為空白組、假手術組、模型組和電針弱、中、強刺激組，每組10只。

1.2 主要試劑與儀器

華佗牌針灸針、SDZ-V型電針治療儀（蘇州醫(yī)療用品廠有限公司），注射用青霉素鈉（華北制藥股份有限公司，F4082121）。轉輪式切片機（德國徠卡），TSJ-Ⅱ型全自動封閉式組織脫水機（常州市中威電子儀器有限公司），BMJ-Ⅲ型包埋機（常州郊區(qū)中威電子儀器廠），PHY-Ⅲ型病理組織漂烘儀（常州市中威電子儀器有限公司），數碼三目攝像顯微鏡（BA400Digital，麥克奧迪實業(yè)集團有限公司）。

1.3 造模

造模兔耳緣靜脈注射1%戊巴比妥鈉（5 mL/kg）麻醉，嚴格消毒鋪巾，于耳根與嘴角連線的中點，瞳孔下方2 cm處、正對神經干處，面頰部弧形切口，剪開皮膚、肌肉層，暴露頭部筋膜，鈍性分離面神經，再用特制止血鉗滿扣夾閉面神經5 min，損傷長度約2.5 cm[8-9]；假手術組操作步驟同上，但不做夾閉處理；空白組不做任何處理。

1.4 干預

兔盒式夾固定后，參照《實驗針灸學》[10]腧穴定位，選取術側“地倉”“頰車”“顴髎”“翳風”“合谷”進行電針治療。用25 mm×0.32 mm華佗牌一次性毫針，“翳風”直刺10 mm，“地倉”向“頰車”透刺10 mm，“顴髎”向“地倉”透刺10 mm，“合谷”直刺5 mm。電針弱、中、強刺激組電刺激量參數見表1，每日1次，連續(xù)治療7 d。

1.5 觀察指標

耳緣靜脈注射空氣處死兔，取兔面神經樣本，固定、洗滌、梯度脫水、透明、包埋處理，石蠟切片，常規(guī)HE染色，染色成功后蓋玻片封蓋，備檢。免疫熒光鏡下觀察、測量積分吸光度，ABC-ELISA檢測組織SOCS1、SOCS3蛋白表達，嚴格按試劑盒說明書操作。

1.6 統計學方法

采用SPSS21.0統計軟件進行分析。實驗數據以—x±s表示，多組間比較采用方差分析，方差齊用LSD檢驗，方差不齊用Tamhane's T2檢驗；若數據不符合正態(tài)分布，則采用W-H秩和檢驗。P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 病理觀察變化

假手術組細胞漿染色與空白組接近，模型組細胞漿染色加深，弱刺激組細胞漿染色較淺，中刺激組和強刺激組染色較深。見圖1、圖2。

2.2 電針對模型兔面神經細胞因子信號轉導抑制因子1、3蛋白表達的影響

與空白組比較，模型組兔SOCS1、SOCS3蛋白表達顯著增加，差異有統計學意義（P<0.01）；與模型組比較，電針弱刺激組SOCS1、SOCS3蛋白表達顯著降低，差異有統計學意義（P<0.01），電針中、強刺激組SOCS1、SOCS3蛋白表達無明顯變化。見圖3。

3 討論

中醫(yī)認為，面神經損傷主要為機體過度勞累致氣血不暢，身體脈絡無力，機體免疫力下降，風、寒之邪侵襲而發(fā)病。相關研究顯示，電針可用于面神經損傷急性期的治療，電針通過低頻脈沖電流刺激穴位，可調整人體組織功能，促進氣血的循環(huán)，調整肌張力[11]，但電刺激量大小與效應不成正比[12]，控制不當易加重炎癥水腫[13]，引起血管痙攣，影響面神經傳導而發(fā)生面部肌肉抽動，預后不佳。目前雖有關于電針刺激量的臨床研究，但對其差異產生的生物學機制研究相對較少。

JAK-STAT通路是電針促進面神經損傷修復的重要通路，其受多種因素的調節(jié)，在信息下調途徑中，SOCS是抑制JAK-STAT通路的重要蛋白[4]，參與多種細胞因子、生長因子和激素的信號調節(jié)，而SOCS1、SOCS3在神經再生中有重要作用。SOCS1通過泛素化和降解JAK2和STAT1來抑制JAK-STAT信號轉導[5-6]，SOCS3與特異性細胞因子結合后，通過JAK-STAT信號轉導而誘導表達，其表達產物又反過來特異性地抑制細胞因子介導的JAK-STAT信號通路[7]。本實驗結果顯示，電針治療面神經損傷兔時，電針弱刺激可抑制細胞因子SOCS1、SOCS3的異常活化，即針刺弱刺激可使面神經損傷表達亢進的SOCS1、SOCS3下調，與正常水平接近，以達到促進面神經損傷修復的治療作用。電針中刺激組和電針強刺激組對細胞因子SOCS1、SOCS3的異?；罨緹o調節(jié)作用，甚則SOCS1、SOCS3因為電針中刺激和電針強刺激而進一步活化，該結果表明，針刺中刺激和強刺激在面神經損傷急性期應用時，會進一步加重損傷，不利于面神經損傷的修復。

綜上，面神經損傷急性期電針弱刺激可使SOCS1、SOCS3蛋白表達水平趨于正常，進而促進面神經損傷的修復，而電針療效不隨刺激量的增長而增加，而以弱刺激量為佳，故電針治療需要把握“中病即止”的原則。

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（收稿日期：2017-05-12）

（修回日期：2017-07-15；編輯：華強）