發(fā)酵鷹嘴豆乳產(chǎn)γ-氨基丁酸乳酸菌的復(fù)合誘變選育

李 文，董明盛*

γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid，GABA）是一種非蛋白質(zhì)氨基酸，其作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)重要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，具有多種生理功能，如神經(jīng)傳導(dǎo)、降血壓、利尿、抗氧化、抗炎等[1-3]。GABA廣泛存在于自然界中，蔬菜和水果中的GABA含量太低，以鮮質(zhì)量計(jì)，約只有0.03～2.00 μmol/g，而直接將GABA添加到食物中又被認(rèn)為是非天然、不安全的[4-5]。因此，有必要通過(guò)一種自然的發(fā)酵過(guò)程，通過(guò)轉(zhuǎn)化GABA前體物的方式，來(lái)增加食物中的GABA含量，乳酸菌是國(guó)際公認(rèn)的食品安全級(jí)微生物[6]，具有多種益生功效[7-8]，乳酸菌已被廣泛用于泡菜、奶酪、面包和酸奶等食品的生產(chǎn)中。研究表明乳酸菌具有胞內(nèi)谷氨酸脫羧酶活性[9-11]，其可催化L-谷氨酸或谷氨酸鈉（monosodium glutamate，MSG）脫羧生成GABA。

鷹嘴豆是世界第二大消費(fèi)豆類(lèi)，產(chǎn)量居世界豆類(lèi)第三[12]。鷹嘴豆富含蛋白質(zhì)、氨基酸、維生素、粗纖維、谷胱甘肽及鈣、鐵、鎂等成分，而淀粉和脂肪含量較低[13]，且其具有降膽固醇及降血糖等功效。此外，其含有5%～10%的低聚半乳糖，有助于乳酸菌的生長(zhǎng)，為GABA的產(chǎn)生提供了必要條件。目前，尚鮮見(jiàn)富含GABA鷹嘴豆乳生產(chǎn)的相關(guān)報(bào)道。

從自然界直接篩選得到的野生型菌株積累產(chǎn)物能力往往較低，無(wú)法滿足實(shí)際生產(chǎn)的需要，因此，通過(guò)誘變育種手段改造菌株，為發(fā)酵工藝提供所需的突變型菌株是提高GABA產(chǎn)量最有效的途徑。紫外誘變作為一種使用最早的物理誘變技術(shù)，沿用至今，效果顯著[14]。紫外誘變是一種非電離福射，可以使DNA形成嘧啶二聚體，此二聚體可以在單鏈和雙鏈相鄰的兩個(gè)胸腺嘧啶間形成[15]，阻礙了DNA復(fù)制的正常進(jìn)行，從而引起突變。紫外誘變操作方便，節(jié)約成本，已在細(xì)菌、真菌等菌種的選育中取得了較好的效果[16-18]。氯化鋰作為一種高效、低毒的化學(xué)誘變劑，經(jīng)常被用作誘變育種，已被成功應(yīng)用于多種菌種選育[19-22]。復(fù)合誘變具有協(xié)同效應(yīng)，如果兩種或兩種以上誘變劑合理搭配使用，誘變效果較單一誘變好[23]。其中，紫外與化學(xué)誘變劑的復(fù)合誘變被廣泛應(yīng)用[24-26]。

本研究在篩選獲得具有發(fā)酵鷹嘴豆乳產(chǎn)GABA能力的野生型菌株的基礎(chǔ)上，采用紫外誘變及紫外-氯化鋰復(fù)合誘變的方式來(lái)提高菌株產(chǎn)GABA的能力，采用紙層析、篩選平板法、比色法、液相色譜法等篩選方式來(lái)獲得產(chǎn)量提高的菌株，并檢測(cè)其遺傳穩(wěn)定性，以期獲得1株GABA產(chǎn)量提高且遺傳穩(wěn)定的菌株，更好地將其應(yīng)用于富含GABA發(fā)酵鷹嘴豆乳的生產(chǎn)。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與培養(yǎng)基

植物乳桿菌M-6為本實(shí)驗(yàn)室分離自新疆波孜中，并保藏于本實(shí)驗(yàn)室。

GABA標(biāo)準(zhǔn)品 美國(guó)Sigma公司；牛肉膏、酵母膏、蛋白胨（均為生化試劑） 天津市福晨化學(xué)試劑廠；氯化鋰、谷氨酸鈉、茚三酮、鄰苯二甲醛（o-phthalaldehyde，OPA）、β-巰基乙醇、正丁醇、冰醋酸等均為國(guó)產(chǎn)分析純。

MRS（de Man Rogosa Sharpe）培養(yǎng)基：葡萄糖20.0 g、牛肉膏15.0 g、酵母膏5.0 g、蛋白胨10.0 g、無(wú)水乙酸鈉5.0 g、檸檬酸銨2.0 g、K2HPO4·3H2O 2.62 g、MnSO4·H2O 0.198 g、MgSO4·7H2O 0.58 g、吐溫-80 1.0 mL、蒸餾水1 000 mL，pH 6.0～6.5，121 ℃高壓蒸汽滅菌20 min。

MRSG培養(yǎng)基：葡萄糖20.0 g、牛肉膏15.0 g、酵母膏5.0 g、蛋白胨10.0 g、無(wú)水乙酸鈉5.0 g、檸檬酸銨2.0 g、K2HPO4·3H2O 2.62 g、MnSO4·H2O 0.198 g、MgSO4·7H2O 0.58 g、MSG 10 g、吐溫-80 1.0 mL、蒸餾水1 000 mL，pH 6.0～6.5，121 ℃高壓蒸汽滅菌20 min。

篩選平板：MRS平板，MRS培養(yǎng)基中添加1.5%的瓊脂；高濃度MSG平板，MRS平板里添加MSG，使其終質(zhì)量濃度分別為130、132、134、136、138、140 g/L，以出發(fā)菌株恰好無(wú)法生長(zhǎng)的臨界質(zhì)量濃度作為篩選平板。

1.2 儀器與設(shè)備

ECLIPSE 80i科研級(jí)生物顯微鏡 日本Nikon Corporation公司；LRH-150型生化培養(yǎng)箱 上海益恒實(shí)驗(yàn)儀器有限公司；PB-20型pH計(jì) 德國(guó)Sartarius公司；64RL高速冷凍離心機(jī) 美國(guó)Beckman公司；1100型高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）儀 美國(guó)Agilent公司；ZORBAX Eclipse Plus C18反相分析柱（4.60 mm×250 mm，5μm） 美國(guó)Agilent公司；722型分光光度計(jì) 上海菁華科技儀器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 菌株生長(zhǎng)曲線的繪制

將植物乳桿菌M-6接種于MRS培養(yǎng)基，于37 ℃活化培養(yǎng)14～16 h，再以3%的接種量接種到MRS培養(yǎng)基中，于37 ℃培養(yǎng)。從0 h開(kāi)始，每隔2 h，取適量菌懸液用分光光度計(jì)測(cè)其600 nm波長(zhǎng)處的OD值，以培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，OD600nm值為縱坐標(biāo)，繪制菌株的生長(zhǎng)曲線。

1.3.2 紫外誘變

將M-6活化兩次，培養(yǎng)至對(duì)數(shù)中后期，取10 mL菌懸液于平皿中，平皿置磁力攪拌器上，垂直擺放在功率為18 W的紫外燈下，在30 cm距離處進(jìn)行紫外誘變，照射時(shí)間分別為0、30、60、90、120、180、240、300 s。照射完畢后，分別移取0.1 mL稀釋至10-4、10-5、10-6的菌懸液涂布于MRS固體培養(yǎng)基或高濃度MSG平板上，于37 ℃避光培養(yǎng)48 h，統(tǒng)計(jì)紫外照射不同時(shí)間的突變株在MRS平板上的菌落數(shù)，按照如下公式計(jì)算致死率：

1.3.3 紫外-氯化鋰復(fù)合誘變

將紫外誘變后的菌懸液涂布于含0%、0.5%、0.75%、1.00%、1.25%、1.5%、1.75%、2.00%氯化鋰的誘變培養(yǎng)基平板上，37 ℃避光培養(yǎng)48 h，計(jì)數(shù)，統(tǒng)計(jì)致死率。

1.3.4 誘變菌株的篩選

1.3.4.1 高濃度MSG平板法

將活化兩次的出發(fā)菌株涂布于含MSG質(zhì)量濃度分別為130、132、134、136、138、140 g/L的MRS平板上，找出臨界質(zhì)量濃度，以此質(zhì)量濃度作為篩選平板，將紫外誘變后的菌懸液涂布于此臨界質(zhì)量濃度的平板上，挑出能在此質(zhì)量濃度平板上生長(zhǎng)的突變株，留待下一步篩選。

1.3.4.2 MRSG發(fā)酵上清液的制備

將紫外-氯化鋰誘變菌株活化兩次后，以3%（體積分?jǐn)?shù)）接種量接種于MRSG液體培養(yǎng)基中，置于37 ℃，靜置培養(yǎng)48 h。發(fā)酵液經(jīng)低溫冷凍離心（10 000×g，4 ℃，10 min）后，收集上清液并置于4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.4.3 紙層析法

采用預(yù)染紙層析法篩選GABA產(chǎn)量提高的乳酸菌[27]。吸取MRSG發(fā)酵上清液1 μL，點(diǎn)樣于層析紙上。采用正丁醇-冰醋酸-水體積比為2∶1∶1的體系為展開(kāi)劑，添加0.8 g/100 mL茚三酮為顯色劑，做密閉上行展開(kāi)，展開(kāi)后于80 ℃下顯色30 min。以質(zhì)量濃度為2 g/L的GABA和MSG標(biāo)準(zhǔn)品作對(duì)照。

1.3.4.4 Berthelot比色法[28-29]

取MRSG發(fā)酵上清液0.5 mL，依次加入0.5 mL濃度為0.2 mol/L的硼酸緩沖液（pH 9.0）、1 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為6%的苯酚和1 mL次氯酸鈉溶液，充分混勻后置于沸水浴中反應(yīng)10 min，立刻放在冰浴中20 min，待樣品出現(xiàn)藍(lán)綠色后加入體積分?jǐn)?shù)為60%的乙醇溶液，混勻，645 nm波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度。

1.3.4.5 鷹嘴豆乳的制備及發(fā)酵

選取優(yōu)質(zhì)鷹嘴豆，清水沖洗后，室溫浸泡12 h，以豆水比1∶10（g/mL）加入水，煮沸15 min，磨漿，過(guò)濾，濾液中加入0.2%的MSG，108 ℃滅菌15 min。

將活化后的乳酸菌用0.85 g/100 mL的生理鹽水清洗兩次，獲得菌懸制備液。具體方法為[30]：發(fā)酵液于4 ℃、8 000 r/min離心15 min，去上清液，加等體積的生理鹽水吹打菌體，重復(fù)操作兩次。

待豆乳冷卻后，按5%的接種量接入菌懸液，于37 ℃培養(yǎng)箱發(fā)酵48 h。發(fā)酵液經(jīng)低溫冷凍離心 （10 000×g，4 ℃，10 min）后，收集上清液并置于4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.4.6 HPLC法分析

采用HPLC進(jìn)行GABA的定量分析[31]。洗脫條件見(jiàn)表1，流動(dòng)相A為20 mmol/L的醋酸鈉（pH 7.3），流動(dòng)相B為乙腈。衍生試劑為OPA 40 mg，乙腈10 mL，β-巰基乙醇40 μL，混勻。硼酸緩沖液：硼酸2.47 g，用雙蒸水溶解，調(diào)節(jié)pH 10.4，定容至100 mL。依次吸取500 μL硼酸緩沖液、100 μL OPA衍生試劑、100 μL發(fā)酵上清液混勻，室溫反應(yīng)5 min。取20 μL進(jìn)樣，流速0.8 mL/min，波長(zhǎng)334 nm，柱溫25 ℃。以GABA濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，即可繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線和測(cè)定發(fā)酵上清液中GABA含量。

表1 梯度洗脫條件Table 1 Gradient program of mobile phase

1.3.5 遺傳穩(wěn)定性檢測(cè)

將篩選得到的高產(chǎn)菌株進(jìn)行傳代培養(yǎng)，連續(xù)傳10 代，分別檢測(cè)每代菌株在鷹嘴豆乳中的GABA產(chǎn)量，以考察突變菌株的遺傳穩(wěn)定性。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均為3次重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的平均值，數(shù)據(jù)表示成 ±s的形式，采用SPSS 16.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用Duncan’s ANOVA進(jìn)行多重比較，不同處理組之間P＜0.05表明差異性顯著，P＜0.01表明差異性極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 出發(fā)菌株的生長(zhǎng)曲線

出發(fā)菌株M-6的生長(zhǎng)曲線見(jiàn)圖1，菌株在MRS培養(yǎng)基中生長(zhǎng)迅速，延滯期很短，2 h后即進(jìn)入對(duì)數(shù)期，14 h后進(jìn)入穩(wěn)定期，當(dāng)菌體處于對(duì)數(shù)中后期時(shí)，細(xì)胞生長(zhǎng)迅速，代謝旺盛，對(duì)外界條件的變化較為敏感，因此，選定10～12 h的菌體進(jìn)行之后的誘變實(shí)驗(yàn)。

圖1 出發(fā)菌株的生長(zhǎng)曲線Fig. 1 Growth curve of the parental strain

2.2 紫外誘變最佳時(shí)間的確定

紫外線作為一種常用的物理誘變劑，可以使DNA形成胸腺嘧啶二聚體，胞嘧啶水合物及DNA鏈或氫鍵斷裂等，從而導(dǎo)致DNA結(jié)構(gòu)變化[32]。紫外照射時(shí)間對(duì)菌株致死率的影響見(jiàn)圖2，隨著誘變時(shí)間的不斷延長(zhǎng)，M-6的致死率呈上升趨勢(shì)，而當(dāng)致死率在70%～80%左右時(shí)，有利于正突變的產(chǎn)生[32]，故誘變的最佳時(shí)間為240 s。

圖2 紫外誘變時(shí)間對(duì)致死率的影響Fig. 2 Effect of UV irradiation time on morality

2.3 紫外-氯化鋰復(fù)合誘變劑量的確定

氯化鋰作為一種化學(xué)誘變劑，其單獨(dú)使用時(shí)，誘變效果不是很明顯，因此，常作為一種助誘變劑與其他誘變劑復(fù)合使用，往往可以起到較好的誘變效果[32]。采用紫外-氯化鋰復(fù)合誘變對(duì)出發(fā)菌株進(jìn)行處理，將紫外照射240 s的菌株涂布于不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)梯度的氯化鋰平板上，由圖3可見(jiàn)，隨著氯化鋰質(zhì)量分?jǐn)?shù)的升高，菌株的致死率呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，低質(zhì)量分?jǐn)?shù)范圍內(nèi)致死率上升很快，質(zhì)量分?jǐn)?shù)大于1.5%后，上升速率變緩，當(dāng)氯化鋰質(zhì)量分?jǐn)?shù)繼續(xù)增大至2%，平板上無(wú)菌落長(zhǎng)出，當(dāng)氯化鋰質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.25%時(shí)，菌株的致死率為78.05%，選用此劑量作為氯化鋰誘變的最佳劑量。

圖3 氯化鋰質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)致死率的影響Fig. 3 Effect of LiCl concentration on morality

2.4 菌株初篩

2.4.1 高濃度MSG平板初篩

由于誘變的目的是獲得GABA產(chǎn)量提高的菌株，因此，其對(duì)轉(zhuǎn)化底物的轉(zhuǎn)化能力應(yīng)有所提高，耐受性也應(yīng)更好[23]。配制一系列含高質(zhì)量濃度底物MSG的篩選平板，考察出發(fā)菌株在平板上的生長(zhǎng)能力，結(jié)果見(jiàn)圖4?？梢钥闯觯霭l(fā)菌株在含138 g/L MSG的平板上，不再有菌落長(zhǎng)出，因此，選用此質(zhì)量濃度的MSG平板作為篩選平板，若突變株能在此平板上生長(zhǎng)，則其GABA產(chǎn)量應(yīng)有所提高。采用此法從紫外誘變的突變株中篩選出18 株能在高M(jìn)SG平板上生長(zhǎng)的突變株，留待復(fù)篩。

圖4 菌株在含136 g/L（A）和138 g/L (B) MSG的MRS上的生長(zhǎng)情況Fig. 4 Growth of strains on MRS with 136 g/L (A) and 138 g/L (B) of MSG

2.4.2 紙層析初篩

采用紙層析的方式對(duì)紫外-氯化鋰誘變菌株進(jìn)行初步篩選，通過(guò)GABA斑點(diǎn)的深淺初步判斷GABA產(chǎn)量的高低，初步排除低產(chǎn)或不產(chǎn)GABA的菌株。

圖5 誘變菌株的紙層析結(jié)果Fig. 5 Paper chromatography profiles of mutant strains

代表性紙層析的結(jié)果如圖5所示，與出發(fā)菌株相比，2、3、5號(hào)GABA斑點(diǎn)加深，6號(hào)GABA斑點(diǎn)變淺，其他變化不大，因此，挑出2、3、5號(hào)進(jìn)行后續(xù)的篩選。采用此法從紫外-氯化鋰復(fù)合誘變的200多株突變株中挑選出20株突變株留待復(fù)篩。

2.5 Berthelot比色法及HPLC法復(fù)篩

圖6 誘變菌株在MRSG里產(chǎn)GABA的篩選結(jié)果Fig. 6 GABA production in MRSG by mutant strains obtained by UV and UV-LiCl

利用高M(jìn)SG平板法和紙層析法，共篩選出紙層析GABA斑點(diǎn)顏色深于出發(fā)菌株的、138 g/L的MSG平板上能夠生長(zhǎng)的38 株菌株進(jìn)行Berthelot比色法測(cè)定，通過(guò)比較OD值的大小，得到21 株誘變后GABA含量顯著高于出發(fā)菌株的突變株，其中，紫外誘變的7 株，紫外-氯化鋰復(fù)合誘變的14 株，利用HPLC法進(jìn)行準(zhǔn)確定量，結(jié)果見(jiàn)圖6，紫外誘變所得的7 株菌GABA產(chǎn)量都極顯著高于出發(fā)菌株（P＜0.01），其中U-15產(chǎn)量最高，為795.75 mg/L，比出發(fā)菌株的產(chǎn)量提高了45.34%；復(fù)合誘變的菌株，除UL-1、UL-66、UL-148、UL-155四株菌與出發(fā)菌株無(wú)顯著差異外，UL-56的GABA產(chǎn)量顯著高于M-6（P＜0.05），其他9 株菌的GABA產(chǎn)量極顯著高于M-6（P＜0.01）。其中UL-4的產(chǎn)量最高，為899.27 mg/L，比出發(fā)菌株M-6產(chǎn)量提高了64.25%。

圖7 誘變菌株在鷹嘴豆乳里產(chǎn)GABA的篩選結(jié)果Fig. 7 GABA production in chickpea milk by mutant strains obtained by UV and UV-LiCl

圖8 M-6（A）及UL-4（B）發(fā)酵上清衍生物的HPLC圖譜Fig. 8 HPLC chromatograms for cultural supernatants of M-6 and UL-4

從以上突變株中挑選出產(chǎn)量在700 mg/L以上的突變株，采用HPLC法檢測(cè)其在鷹嘴豆乳中產(chǎn)GABA的能力，結(jié)果見(jiàn)圖7。復(fù)合誘變突變株中的UL-4在鷹嘴豆乳中的GABA產(chǎn)量最高，為369.53 mg/L，比出發(fā)菌株提高了30.46%，在鷹嘴豆乳里GABA產(chǎn)量提高的幅度不如在MRSG培養(yǎng)基中大，可能是由于發(fā)酵基質(zhì)的改變和底物濃度的降低，引起菌株轉(zhuǎn)化能力的相應(yīng)改變。出發(fā)菌株M-6及突變株UL-4在鷹嘴豆乳中發(fā)酵上清液的OPA衍生物HPLC見(jiàn)圖8?？梢?jiàn)，M-6和UL-4中出現(xiàn)了同樣的GABA的OPA衍生物峰（箭頭所指），且UL-4的GABA產(chǎn)量有所提高，體現(xiàn)在對(duì)應(yīng)的峰面積大于M-6。

2.6 突變株性狀

除檢測(cè)GABA產(chǎn)量外，比較誘變對(duì)于突變株性狀的影響。從圖9菌株的單菌落形態(tài)來(lái)看，突變菌株和出發(fā)菌株的菌落形態(tài)均呈圓形，較小而厚，表面光滑，邊緣整齊，形態(tài)基本一致。但紫外誘變后的菌落出現(xiàn)的時(shí)間稍晚于出發(fā)菌株，而紫外-氯化鋰復(fù)合誘變后的菌株的出現(xiàn)時(shí)間更晚，這可能是因?yàn)樽贤庹丈涫辜?xì)胞受到一定程度的損傷，需要一定時(shí)間的恢復(fù)，才能正常生長(zhǎng)；復(fù)合誘變時(shí)，已經(jīng)接受過(guò)紫外照射的菌株對(duì)氯化鋰更為敏感，且在整個(gè)生長(zhǎng)階段都接觸到誘變劑氯化鋰，生長(zhǎng)受到了較大且持久的影響。

圖9 出發(fā)菌株（A）、紫外誘變菌株（240 s）（B）、紫外-氯化鋰復(fù)合誘變菌株（C）的單菌落形態(tài)Fig. 9 Colonies of original strain (A), and mutant strains after UV irritation (240 s) (B) and after UV-LiCl mutagenesis (C) on MRS plates

2.7 遺傳穩(wěn)定性結(jié)果

將復(fù)合誘變所得產(chǎn)量最高的突變株UL-4傳代10 次，測(cè)定每一代在鷹嘴豆乳中的GABA產(chǎn)量，結(jié)果見(jiàn)圖10，可以看出，每代菌株的GABA產(chǎn)量間無(wú)顯著性差異（P＞0.05），即傳代次數(shù)對(duì)GABA的產(chǎn)量無(wú)顯著影響，說(shuō)明該菌株具有較好的遺傳穩(wěn)定性。

圖10 突變株UL-4不同傳代次數(shù)發(fā)酵鷹嘴豆乳的GABA產(chǎn)量Fig. 10 GABA content in chickpea milk inoculated with different generations of mutant UL-4

3 討 論

紫外誘變方法是一種廣泛采用的對(duì)微生物菌種進(jìn)行改良的方法，其簡(jiǎn)便快捷，效果較為顯著。在GABA的菌種選育方面，也得以廣泛應(yīng)用。蔣冬花等[33]以米曲霉（Aspergillus oryzae）的孢子為對(duì)象進(jìn)行紫外誘變，經(jīng)初篩、復(fù)篩后獲得1 株GABA產(chǎn)量較高且穩(wěn)定遺傳的突變株As-8，其在合適的培養(yǎng)條件下，GABA產(chǎn)量最高可達(dá)4.2 g/L。姜宏瑛[34]采用紫外誘變唾液鏈球菌嗜熱亞種，得到的突變株在含100 mmol/L L-谷氨酸鈉的底物緩沖液中，GABA的轉(zhuǎn)化率最高可達(dá)19.974 mg/（g·h），較出發(fā)菌株提高44.52%。相比單獨(dú)一種誘變方法，復(fù)合誘變能有效改變菌株對(duì)誘變因素的敏感性，提高正向突變率，能夠大規(guī)模提高生產(chǎn)菌株的產(chǎn)量[35]。黃翠萍等[36]采用紫外及亞硝基胍誘變嗜酸乳桿菌，得到高產(chǎn)突變株SW-135-13，其GABA產(chǎn)量為1.31 g/L。本實(shí)驗(yàn)嘗試紫外-氯化鋰復(fù)合誘變的方法對(duì)植物乳桿菌進(jìn)行選育，得到的突變菌株UL-4，其在MRSG培養(yǎng)基和鷹嘴豆乳中的GABA產(chǎn)量分別為899.27 mg/L和369.53 mg/L，比出發(fā)菌株M-6產(chǎn)量分別提高了64.25%和30.46%，比單獨(dú)紫外照射誘變獲得的GABA產(chǎn)量增加幅度最大的突變株提高了13.01%和11.41%，可見(jiàn)紫外-氯化鋰復(fù)合誘變可以發(fā)揮紫外線和氯化鋰兩種誘變劑的協(xié)同作用，好于單一紫外線誘變的效果。

隨著天然食品與有機(jī)食品概念的提出，人們?cè)絹?lái)越傾向于采用益生菌發(fā)酵食品中的谷氨酸及其鈉鹽的方式來(lái)生產(chǎn)富含GABA的功能性食品，或是通過(guò)其他天然的方式來(lái)增加食品中的GABA含量，而不是額外地加入化學(xué)合成的GABA。GABA含量較高的發(fā)酵產(chǎn)品有發(fā)酵乳制品，醬油和奶酪等。Pouliot-Mathieu等[37]使用Lactococcus lactis ssp. lactis發(fā)酵奶酪后，GABA含量為320 mg/kg。Nejati等[38]采用植物乳桿菌和其他乳酸菌混合發(fā)酵牛奶，GABA含量為144.5 mg/kg。但鮮有乳酸菌發(fā)酵鷹嘴豆乳產(chǎn)GABA的相關(guān)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)誘變所得菌株可以較好地用于鷹嘴豆乳的發(fā)酵以富集GABA，為新型富含GABA功能性食品的開(kāi)發(fā)提供了可能性。