血壓晨峰對(duì)老年高血壓合并冠心病病人外周血核因子 -κB、金屬蛋白酶 -9的影響及其相關(guān)性研究

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The Influence of Morning Blood Pressure Surge on Peripheral Blood NF -κB and MMP -9 Levels in Elderly Patients with Hypertension and Coronary Heart Disease and Its Correlation

Li Yu,Li Rong,Qiu Qingyan

Mianyang Center Hospital,Mianyang 621000,Sichuan,China

Abstract:Objective To investigate the influence of morning blood pressure surge(MBPS) on peripheral blood mononuclear cell nuclear factor -κB (NF -κB) and serum matrix metalloproteinase 9 (MMP -9) levels in elderly patients with hypertension and coronary heart disease (CHD).Methods One hundred elderly patients with hypertension and CHD were enrolled,including 58 cases in MBPS group and 42 cases in non MBPS group.The activation rate of NF -κB was detected by immunohistochemistry.Serum MMP -9 level was determined by enzyme -linked immunosorbent assay.The carotid vascular atherosclerosis was detected by vascular ultrasound.The coronary angiography was used to assess the degree of coronary artery stenosis.Results The serum MMP -9 level and activation rate of mononuclear cell NF -κB in MBPS group was significantly higher than that in non - MBPS group.The intima -media thickness of the common carotid artery in MBPS group was significantly thicker than that in the non -MBPS group,and the degree of coronary artery stenosis was aggravated.Serum MMP -9 levels were positively correlated with the activation rate of mononuclear cells NF -κB in elderly patients with hypertension and CHD.The serum MMP -9 level and activation rate of NF -κB in peripheral blood mononuclear cells were positively correlated with the intima -media thickness of carotid artery,carotid atheromatous plaque scores and and degree of coronary artery stenosis.Conclusion The MBPS may up -regulate the levels of serum MMP -9 and activation rate of mononuclear cells NF -κB,and aggravate the degree of atherosclerosis in patients with hypertension and CHD.Adjusting the antihypertensive drugs and controlling the degree of MBPS can reduce the target -organ damage in patients with hypertension and CHD.

Keywords: hypertension;coronary heart disease;MBPS;atherosclerosis;nuclear factor -κB;matrix metalloproteinase

血壓晨峰(morning blood pressure surge，MBPS)是指清晨人體由睡眠狀態(tài)轉(zhuǎn)為清醒并開(kāi)始活動(dòng)，血壓從夜間睡眠時(shí)相對(duì)較低的水平迅速上升至較高水平，甚至達(dá)到一天中最高水平的現(xiàn)象。近年來(lái)在高血壓研究領(lǐng)域中血壓晨峰受到越來(lái)越多的關(guān)注，血壓的晝夜變異性和波動(dòng)幅度對(duì)靶器官損害及其相關(guān)分子機(jī)制方面的研究是目前高血壓研究的熱點(diǎn)。國(guó)內(nèi)外大量實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)血壓晨峰作為心腦血管病的發(fā)病及預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，是使高血壓疾病進(jìn)展進(jìn)而引起靶器官損害的機(jī)制之一[1]。近年來(lái)，高血壓與炎癥反應(yīng)之間的關(guān)系已非常明確，潛在的慢性低度炎癥反應(yīng)是高血壓血管損傷的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，加速了血管硬化的進(jìn)程[2]。核因子 -κB (nuclear factor -κB，NF -κB)是非常重要的免疫、炎癥和應(yīng)激反應(yīng)的主要調(diào)控因子，參與血管炎癥反應(yīng)及重構(gòu)?；|(zhì)金屬蛋白酶 -9(MMP -9)引起動(dòng)脈粥樣硬化斑塊細(xì)胞外基質(zhì)重構(gòu)，特別是誘導(dǎo)斑塊破裂，血栓形成，在急性冠脈綜合征的發(fā)生發(fā)展中有重要作用。本研究通過(guò)觀察血壓晨峰對(duì)老年高血壓合并冠心病病人外周血單個(gè)核細(xì)胞NF -κB、血清MMP -9水平的影響，及血壓晨峰與病人頸動(dòng)脈粥樣硬化、冠狀動(dòng)脈病變嚴(yán)重程度的相關(guān)性，探討血壓晨峰現(xiàn)象在高血壓合并冠心病病人中的作用機(jī)制及其防治措施。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象 選取2014年1月—2015年12月在綿陽(yáng)市中心醫(yī)院住院并接受冠狀動(dòng)脈造影確診的老年(年齡≥60歲)高血壓合并冠心病病人100例。高血壓的診斷標(biāo)準(zhǔn)參照中國(guó)高血壓防治指南修訂委員會(huì)制定的《中國(guó)高血壓防治指南2010》[3]，收縮壓(SBP)≥140 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)和(或)舒張壓(DBP)≥90 mmHg。冠心病的診斷依據(jù)冠狀動(dòng)脈造影(coronary angiography，CAG)結(jié)果：至少有一支冠脈主支或其主要分支狹窄程度≥50%。將所有病人按24 h動(dòng)態(tài)血壓監(jiān)測(cè)(ambulatory blood pressure monitoring，ABPM)的結(jié)果有無(wú)血壓晨峰現(xiàn)象分為晨峰組58例，年齡60歲～78歲(68.4歲±5.5歲)；非晨峰組42例，年齡60歲～81歲(66.4歲±6.1歲)。排除標(biāo)準(zhǔn)：嚴(yán)重肝腎功能異常、惡性腫瘤、糖尿病、繼發(fā)性高血壓病、甲狀腺功能亢進(jìn)、風(fēng)濕性心臟病以及由先天畸形、結(jié)締組織病等所致冠狀動(dòng)脈狹窄。所有入選病人簽署知情同意書。

1.2 研究方法

1.2.1 一般資料收集 ①記錄年齡、性別、心率、血壓、病程，詢問(wèn)飲酒史及吸煙史；檢測(cè)身高、體重，體重指數(shù)(BMI)=體重/身高2，BMI≥25者為肥胖。禁食12 h后采集清晨靜脈血，分別測(cè)定空腹血糖、肝腎功能、血脂水平。②24 h動(dòng)態(tài)血壓監(jiān)測(cè)：采用無(wú)創(chuàng)性攜帶式動(dòng)態(tài)血壓監(jiān)測(cè)儀，自動(dòng)充氣監(jiān)測(cè)收縮壓、舒張壓，根據(jù)結(jié)果自動(dòng)計(jì)算24 h、白天、夜間平均收縮壓和平均舒張壓等指標(biāo)。白天(08:00～24:00)間隔20 min測(cè)量1次，夜間(0:01～07:59)間隔30 min測(cè)量1次。要求24 h有效數(shù)據(jù)>80%，且每小時(shí)區(qū)間內(nèi)讀數(shù)無(wú)缺漏，否則隔日重測(cè)。有效血壓讀數(shù)標(biāo)準(zhǔn)：收縮壓70 mmHg～220 mmHg，舒張壓40 mmHg～130 mmHg。③血壓晨峰的認(rèn)定：根據(jù)《中國(guó)高血壓防治指南》2010，病人起床后2 h內(nèi)收縮壓平均值與夜間睡眠時(shí)最低平均收縮壓的差值≥35 mmHg，認(rèn)為存在血壓晨峰，其中夜間睡眠時(shí)最低平均收縮壓等于夜間收縮壓最低值及其前后共3次收縮壓的平均值。舒張壓晨峰的計(jì)算與收縮壓類似。

1.2.2 血清MMP -9測(cè)定 病人入院次日清晨空腹抽取靜脈血制備血清保存待批次檢測(cè)。MMP -9測(cè)定采用夾心酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定MMP -9試劑盒(購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司)，測(cè)定過(guò)程嚴(yán)格按照產(chǎn)品說(shuō)明書進(jìn)行操作。

1.2.3 外周血單個(gè)核細(xì)胞NF -κB P65蛋白表達(dá)檢測(cè) 采用FicoⅡ密度梯度離心法分離單個(gè)核細(xì)胞后，瑞氏染色進(jìn)行單個(gè)核細(xì)胞鑒定并檢測(cè)細(xì)胞活力。制作單個(gè)核細(xì)胞涂片，自然干燥，4 ℃冷丙酮固定。用免疫組化法檢測(cè)NF -κB P65蛋白表達(dá)：顯微鏡下細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核均出現(xiàn)棕黃色顆粒為NF -κB P65亞單位表達(dá)的陽(yáng)性細(xì)胞。用相差顯微鏡觀察同一張蓋玻片不同視野，計(jì)數(shù)500個(gè)細(xì)胞中黃染陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，計(jì)算百分?jǐn)?shù)即單個(gè)核細(xì)胞活化率。

1.2.4 頸動(dòng)脈粥樣硬化指標(biāo)的檢測(cè) 采用PHILIP彩色多普勒超聲診斷儀，使用血管高頻探頭。檢查前休息5 min～10 min，病人取仰頭平臥位，頭部偏向?qū)?cè)，充分暴露頸部。在檢查時(shí)，自頸動(dòng)脈起始處作縱向掃查，分別檢查頸總動(dòng)脈、頸總動(dòng)脈分叉處、頸內(nèi)動(dòng)脈和頸外動(dòng)脈。然后沿血管走行做橫切掃查，觀察動(dòng)脈內(nèi)徑、內(nèi)膜有無(wú)增厚、斑塊部位、斑塊大小和回聲特點(diǎn)及性質(zhì)。測(cè)量頸總動(dòng)脈內(nèi)膜 -中層厚度(CCAIMT)及頸總動(dòng)脈舒張末期內(nèi)徑(CCADd)。采用Crouse積分法計(jì)算頸動(dòng)脈粥樣斑塊積分(CPS)。所有指標(biāo)均測(cè)量左右兩側(cè)，取平均值。

1.2.5 冠狀動(dòng)脈造影(CAG)檢查 所有病人在入院后2 d～5 d內(nèi)進(jìn)行選擇性冠狀動(dòng)脈造影評(píng)估冠狀動(dòng)脈情況。冠狀動(dòng)脈病變?cè)u(píng)估采用直徑法與血管積分法。病變部位主要分為左冠狀動(dòng)脈主干、左前降支、左回旋支、右冠狀動(dòng)脈(累及左主干時(shí)，按同時(shí)累及左前降支和左回旋支來(lái)計(jì)算)；累及的主要冠狀動(dòng)脈支數(shù)為病變支數(shù)，分單支、雙支及三支病變。將Gensini積分法作為冠狀動(dòng)脈狹窄程度的判斷指標(biāo)。

2 結(jié) 果

2.1 一般資料情況 兩組病人年齡、吸煙史、飲酒史、病程、體重指數(shù)(BMI)、三酰甘油(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL -C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL -C)、血肌酐(Cr)、空腹血糖(FPG)水平比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。詳見(jiàn)表1。

組別n年齡(歲)吸煙(年)飲酒(年)病程(個(gè)月)BMI (kg/m2)晨峰組5868.4±5.521.3±2.35.2±0.921.2±3.924.5±3.1非晨峰組4266.4±6.123.5±2.14.6±1.219.9±4.223.9±2.5組別TC(mmol/L)TG(mmol/L)LDL-C(mmol/L)HDL-C(mmol/L)Cr(μmol/L)FPG(mmol/L)晨峰組1.6±1.34.7±1.82.5±0.92.0±0.476.4±17.35.2±0.9非晨峰組1.5±1.74.5±2.12.6±0.72.1±0.375.3±16.95.3±0.7

2.2 兩組動(dòng)態(tài)血壓參數(shù)比較 晨峰組的24 h平均收縮壓、白天平均收縮壓、夜間平均收縮壓、收縮壓晨峰與非晨峰組比較均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。兩組各時(shí)段平均舒張壓和舒張壓晨峰比較均差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。詳見(jiàn)表2。

mmHg

2.3 兩組頸動(dòng)脈檢查指標(biāo)比較(見(jiàn)表3)

2.4 兩組血清MMP -9、單個(gè)核細(xì)胞NF -κB水平及冠狀動(dòng)脈狹窄程度比較 晨峰組反映炎癥水平的血清MMP -9、單個(gè)核細(xì)胞NF -κB活化水平較非晨峰組明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。晨峰組病人冠狀動(dòng)脈狹窄程度積分Gensini評(píng)分明顯高于非晨峰組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。詳見(jiàn)表4。

組別nMMP-9(ng/L)NF-κB(%)Gensini評(píng)分(分)晨峰組 58243.72±89.231)28.23±9.201)113.40±17.321)非晨峰組42193.23±69.2121.12±7.9093.26±15.70 與非晨峰組比較,1)P<0.05。

2.5 高血壓合并冠心病病人冠狀動(dòng)脈病變狹窄程度的Pearson相關(guān)分析 高血壓合并冠心病病人中，冠狀動(dòng)脈病變狹窄程度分別與年齡、FPG、各項(xiàng)血脂水平、BMI、24 h平均收縮壓、24 h平均舒張壓、血壓晨峰的程度進(jìn)行Pearson相關(guān)分析，冠狀動(dòng)脈病變程度(Gensini總積分)與血壓晨峰程度呈明顯正相關(guān)(r=0.876，P<0.01)，與24 h平均收縮壓明顯呈正相關(guān)(r=0.867，P<0.01)，與年齡(r=0.738，P<0.05)、FPG(r=0.721，P<0.05)、LDL -C(r=0.684，P<0.05)呈正相關(guān)。

2.6 高血壓合并冠心病病人冠狀動(dòng)脈病變程度多元線性回歸分析 以冠狀動(dòng)脈病變程度(Gensini總積分)為因變量，年齡、FPG、各項(xiàng)血脂水平、BMI、24 h平均收縮壓、24 h平均舒張壓、晨峰程度為自變量進(jìn)行多元線性回歸分析，結(jié)果顯示：24 h平均收縮壓及血壓晨峰程度、年齡均為冠狀動(dòng)脈病變的獨(dú)立影響因素。見(jiàn)表5。

表5 高血壓合并冠心病病人冠狀 動(dòng)脈病變程度多元線性回歸分析

2.7 MMP -9水平、NF -κB活化率與動(dòng)脈粥樣硬化的相關(guān)性分析 老年高血壓合并冠心病病人血清MMP -9、外周血單個(gè)核細(xì)胞NF -κB活化率與CCAIMT、CPS、Gensini評(píng)分相關(guān)(P<0.05或 P<0.01)，見(jiàn)表6。血清MMP -9水平與單個(gè)核細(xì)胞NF -κB活化率呈顯著正相關(guān)(r=0.678，P<0.01)，直線回歸方程為y=184.8+0.908x。

表6 MMP -9水平、NF -κB活化率與 動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)性分析

3 討 論

清晨是急性冠脈綜合征、心臟性猝死、腦卒中等心腦血管事件的高發(fā)時(shí)段，而高血壓晨峰則是導(dǎo)致這一現(xiàn)象的重要影響因素。清晨時(shí)段，人體由清醒開(kāi)始活動(dòng)，交感神經(jīng)系統(tǒng)激活，血漿中兒茶酚胺等縮血管物質(zhì)水平升高，心排血量增加，但老年高血壓病人動(dòng)脈壓力感受器的敏感性下降，加之交感神經(jīng)功能失調(diào)，干擾了機(jī)體對(duì)血壓的調(diào)節(jié)能力，導(dǎo)致清晨時(shí)血壓變異較大[4]。作為血壓變異性的主要衡量指標(biāo)，血壓晨峰與靶器官損害的嚴(yán)重程度顯著相關(guān)[5]。MMP -9是影響粥樣斑塊穩(wěn)定性的一種基質(zhì)蛋白酶，是炎癥因子之一。研究顯示：粥樣斑塊內(nèi)高濃度浸潤(rùn)的巨噬細(xì)胞釋放大量的MMP -9，其可以通過(guò)降解細(xì)胞外基質(zhì)，破壞易損斑塊的纖維帽結(jié)構(gòu)，降低其強(qiáng)度，使斑塊不穩(wěn)定、破裂，參與急性冠脈事件的發(fā)生，MMP -9可以在一定程度上反映冠心病病人疾病的嚴(yán)重程度[6]。NF -κB存在于血管平滑肌細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞中，也是參與血管炎癥反應(yīng)和重構(gòu)的重要炎癥因子，也同樣是重要的調(diào)節(jié)細(xì)胞存活和增殖的轉(zhuǎn)錄因子[7]，通過(guò)對(duì)MMP基因結(jié)構(gòu)分析發(fā)現(xiàn)，在MMP基因啟動(dòng)子近端調(diào)控區(qū)有特異性的NF -κB結(jié)合位點(diǎn)，敲除NF -κB結(jié)合位點(diǎn)，可抑制各種刺激誘發(fā)的MMP升高[8]。

本研究表明，老年高血壓合并冠心病病人，晨峰組血壓波動(dòng)更明顯。晨峰組病人炎癥因子MMP -9、單個(gè)核細(xì)胞NF -κB活化水平明顯高于非晨峰組，說(shuō)明血壓晨峰可能誘發(fā)并加速各種炎性介質(zhì)的釋放，從而激活體內(nèi)慢性炎癥反應(yīng)的過(guò)程。本研究還發(fā)現(xiàn)晨峰組病人冠狀動(dòng)脈狹窄程度，頸動(dòng)脈內(nèi)膜增厚及斑塊形成程度均高于非晨峰組。在高血壓合并冠心病病人中，反映炎癥程度的指標(biāo)MMP -9水平、NF -κB活化率與動(dòng)脈粥樣硬化的程度呈正相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示MBPS不但激活了炎性反應(yīng)，而且加重了動(dòng)脈粥樣硬化。MBPS誘發(fā)的慢性炎性反應(yīng)是其加重冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的重要機(jī)制之一。炎癥和高血壓是相互影響的，炎癥通過(guò)改變NO的活性，促進(jìn)高血壓的發(fā)生。而在高血壓的作用下，炎癥因子誘發(fā)血管炎性反應(yīng)，血管內(nèi)皮細(xì)胞功能失調(diào)，血小板黏附聚積、血栓形成，加速動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成。血壓變異增大還可通過(guò)影響血液黏滯度，使得內(nèi)皮細(xì)胞分泌NO減少，損害血管內(nèi)皮舒張功能，并引起冠狀動(dòng)脈微小動(dòng)脈重構(gòu)，降低冠狀動(dòng)脈血流儲(chǔ)備力，造成冠狀動(dòng)脈狹窄更加嚴(yán)重。MBPS病人具有較高的血壓水平和血壓變異幅度，通過(guò)影響炎癥因子的釋放及損害內(nèi)皮功能，加重靶器官的損害。

MBPS可能激活炎癥反應(yīng)，加重動(dòng)脈粥樣硬化。通過(guò)對(duì)MBPS病人MMP -9、單個(gè)核細(xì)胞NF -κB的活性進(jìn)行調(diào)控，可能是一個(gè)防治高血壓病合并冠心病病人動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)展的靶點(diǎn)，從而更好地保護(hù)靶器官，減少心血管并發(fā)癥的發(fā)生。老年高血壓合并冠心病病人血壓晨峰程度可能與內(nèi)皮功能損傷程度、慢性炎癥反應(yīng)、心臟重構(gòu)密切相關(guān)。對(duì)老年高血壓病人提倡進(jìn)行24 h動(dòng)態(tài)血壓監(jiān)測(cè)，可便于MBPS的檢出，并且根據(jù)血壓異常分布情況針對(duì)性地選擇及調(diào)整降壓藥物，控制晨峰血壓，減少靶器官的損害，改善老年高血壓病人的生存質(zhì)量。