麝香保心丸對(duì)高同型半胱氨酸血癥大鼠內(nèi)皮功能的影響

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高同型半胱氨酸血癥(HHcy)在臨床中很常見，伴發(fā)于高血壓、代謝綜合征等疾病，大量的流行病學(xué)調(diào)查和臨床研究證實(shí)，HHcy是導(dǎo)致血管內(nèi)皮功能障礙和動(dòng)脈粥樣硬化等血管損傷性疾病的一個(gè)獨(dú)立危險(xiǎn)因子[1]。麝香保心丸具有保護(hù)內(nèi)皮功能、抗炎及抑制血管鈣化等作用，在動(dòng)脈粥樣硬化及血管鈣化等血管重塑性疾病的治療中發(fā)揮了很大的作用[2 -3]，其能否保護(hù)同型半胱氨酸(Hcy)導(dǎo)致的內(nèi)皮功能障礙尚不清楚。本研究在HHcy大鼠模型上，用麝香保心丸干預(yù)，觀察內(nèi)皮功能指標(biāo)的變化，探討麝香保心丸的作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及藥品 雄性SD大鼠由汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，8周齡。L -蛋氨酸購(gòu)自北京寶希迪科技有限公司，純度>99%；一氧化氮(NO)試劑盒購(gòu)自北京華英生物研究所，Hcy酶聯(lián)免疫試劑盒購(gòu)自上海史瑞可生物科技有限公司，一氧化氮合酶(eNOS)一抗、二抗及二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色試劑盒購(gòu)自武漢博士德；麝香保心丸購(gòu)自上海和黃藥業(yè)有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：12050401。其余為進(jìn)口或國(guó)產(chǎn)分析純?cè)噭?/p>

1.2 HHcy動(dòng)物模型制備 雄性SD大鼠隨機(jī)分為3組，每組8只。正常對(duì)照組：用飲用水灌胃；HHcy組：L -蛋氨酸灌胃[1 g/(kg·d)，溶于飲用水中]；HHcy+麝香保心丸組：模型制作同HHcy組，加麝香保心丸灌胃[14 mg/(kg·d)]，每日1次。3組大鼠常規(guī)飼養(yǎng)，4周后稱重，3%水合氯醛麻醉，心臟取血，置入含有乙二胺四乙酸(EDTA)的試管中，4 ℃離心分離血漿，-80 ℃保存。摘取主動(dòng)脈，用冰生理鹽水沖洗后，石蠟包埋用于染色。

1.3 Hcy和NO含量的測(cè)定 分別采用硝酸還原酶法和酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定血漿NO和Hcy含量，具體步驟按試劑盒說明書操作。

1.4 免疫組織化學(xué)法檢測(cè)主動(dòng)脈組織eNOS的表達(dá) 采用4%多聚甲醛固定胸主動(dòng)脈，石蠟包埋，制作4 μm厚切片，常規(guī)脫蠟入水，抗原修復(fù)，封閉非特異性抗原，滴加一抗過夜，滴加二抗，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，鹽酸酒精分化、脫水、透明、中性樹膠封片，具體步驟按說明書進(jìn)行。

2 結(jié) 果

2.1 大鼠血漿Hcy和NO含量的變化 HHcy組血漿Hcy水平明顯高于正常對(duì)照組，提示HHcy模型建立成功，同時(shí)血漿NO含量下降；采用麝香保心丸干預(yù)后，血漿NO含量上升。詳見表1。

表1 各組大鼠血漿Hcy和NO水平比較(±s) μmol/L

2.2 大鼠主動(dòng)脈組織內(nèi)皮eNOS表達(dá)的變化 與正常對(duì)照組相比，HHcy組主動(dòng)脈組織內(nèi)皮eNOS表達(dá)明顯減少，用麝香保心丸干預(yù)后，主動(dòng)脈組織內(nèi)皮eNOS表達(dá)有所上調(diào)。詳見圖1。

A為正常對(duì)照組；B為HHcy組；C為HHcy+麝香保心丸組。

3 討 論

現(xiàn)已證實(shí)，Hcy是導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化等心血管疾病的一個(gè)重要的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，是體內(nèi)蛋氨酸代謝的中間產(chǎn)物，血漿Hcy大于16 μmol/L即為HHcy。本實(shí)驗(yàn)采用L -蛋氨酸灌胃4周后，血漿Hcy水平明顯升高，大鼠HHcy模型建立成功。同時(shí)發(fā)現(xiàn)HHcy組大鼠血漿NO水平明顯低于正常組，血管內(nèi)皮細(xì)胞eNOS的表達(dá)亦同步下調(diào)。NO是在eNOs作用下，催化左旋精氨酸轉(zhuǎn)變成L -瓜氨酸而生成，血漿NO主要由血管內(nèi)皮細(xì)胞合成分泌，是反映血管內(nèi)皮功能的主要指標(biāo)之一。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示Hcy可明顯損傷大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞功能，導(dǎo)致NO分泌明顯減少。

麝香保心丸是芳香溫通類的代表藥物，源于宋代經(jīng)典名方《太平惠民和劑局方》中的蘇合香丸。研究發(fā)現(xiàn)，麝香保心丸具有保護(hù)血管內(nèi)皮、穩(wěn)定逆轉(zhuǎn)斑塊[4]、抗炎[5]、促進(jìn)治療性血管新生及預(yù)防經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療(PCI)術(shù)后再狹窄等作用[6 -7]。長(zhǎng)期以來，麝香保心丸在臨床上作為一種治療冠心病的常用有效藥物，對(duì)緩解心絞痛癥狀等有較顯著的作用，在Hcy導(dǎo)致的內(nèi)皮細(xì)胞功能損傷中是否亦有保護(hù)作用尚不清楚。采用麝香保心丸干預(yù)后，大鼠血漿Hcy水平無明顯下降，但血漿NO水平明顯上升，血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)eNOS同步上調(diào)，提示麝香保心丸具有保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞功能的作用，并且該作用獨(dú)立于降低血漿Hcy水平之外。

本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)麝香保心丸雖無降低血漿Hcy水平的作用，但可保護(hù)Hcy誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮功能損傷，這將為血管損傷的機(jī)制研究及防治提供新的思路和作用靶點(diǎn)，具體的分子作用機(jī)制和細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路尚需進(jìn)一步研究證實(shí)。由于植物提取物成分和有效成分作用靶點(diǎn)的復(fù)雜性，中藥成分對(duì)保護(hù)血管內(nèi)皮功能的藥理學(xué)作用尚需進(jìn)一步研究。