HPV癌基因E6/E7 mRNA在宮頸癌篩查中的臨床意義

羅佩宜

宮頸癌是繼乳腺癌的全球第二大癌癥, 其發(fā)病率位居發(fā)展中國家女性婦科腫瘤的首位, 嚴(yán)重威脅著我國女性的生命健康［1］。研究顯示, 宮頸癌的發(fā)生與 HPV感染密切相關(guān)［2］。事實(shí)上, HPV感染宮頸上皮細(xì)胞后將產(chǎn)生E6和E7兩種癌蛋白, 癌蛋白通過鈍化宿主細(xì)胞的抑癌蛋白如 p53、PRb等而導(dǎo)致細(xì)胞周期控制失常, 最終引發(fā)癌變［3］。因此, 在宮頸癌初步篩查中檢測(cè)HPV癌基因 E6/E7 mRNA是否更具有診斷價(jià)值是目前臨床研究的熱點(diǎn)。在本項(xiàng)研究中, 作者就HPV癌基因E6/E7 mRNA在宮頸癌篩查中的檢測(cè)價(jià)值進(jìn)行了探討,現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年1～12月于廣東省東莞市清溪醫(yī)院進(jìn)行宮頸病變篩查的400例受試者作為研究對(duì)象, 納入標(biāo)準(zhǔn)：①就診癥狀主要表現(xiàn)為陰道分泌物增、異味、異常出血,宮頸炎；②均已婚或有性生活史；③對(duì)研究知情同意且經(jīng)過醫(yī)院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)；④排除存在子宮切除手術(shù)史或?qū)m頸手術(shù)史和盆腔放射治療史的受試者；⑤在檢查前未接受治療。本研究受試者年齡23～65歲, 平均年齡(46.8±6.6)歲。

1.2 檢測(cè)方法 均接受宮頸TCT檢查及高危型HPV-DNA檢測(cè), 并對(duì)結(jié)果為陽性者進(jìn)一步進(jìn)行陰道鏡下宮頸活檢和HPV癌基因E6/E7 mRNA檢測(cè)。采集標(biāo)本前24 h內(nèi)禁止性生活、陰道檢查、陰道灌洗及用藥。HPV癌基因E6/E7mRNA檢測(cè)流程：①填寫送檢單必要信息。②專用采樣器采集送檢：樣本類型分為：a.宮頸脫落細(xì)胞：將采樣器的中央刷毛部分輕輕插入子宮頸管, 以便較短的刷毛能夠完全接觸到子宮頸口, 之后柔和的向前抵住采樣器, 并按同一個(gè)時(shí)針方向轉(zhuǎn)動(dòng)采樣器5整周, 切勿來回轉(zhuǎn)動(dòng), 將采樣器按入保存液小瓶底, 迫使刷毛全部散開, 共10次, 然后在溶液中快速擺動(dòng)采樣器以進(jìn)一步的將細(xì)胞樣本漂洗下來, 取下采樣器,擰緊瓶蓋送檢。標(biāo)本液需＞5 ml, 專用細(xì)胞保存液保存2周。拒檢說明：在HPV-DNA保存液中保存的樣本；與TCT標(biāo)本共用時(shí), 檢測(cè)量＜3 ml。b.蠟塊組織, 3個(gè)以上玻片。結(jié)果用光子數(shù)表示, 經(jīng)Diaearta計(jì)算機(jī)軟件轉(zhuǎn)換為拷貝數(shù)。

1.3 分型標(biāo)準(zhǔn) 活檢結(jié)果根據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)分類和診斷標(biāo)準(zhǔn)分為：正常/炎癥、CINⅠ級(jí)、CINⅡ級(jí)、CINⅢ級(jí)以及SCC。所有宮頸活檢結(jié)果均采用雙盲法由2名有多年臨床工作經(jīng)驗(yàn)的病理科醫(yī)生共同確定, 若診斷不一致, 則由2名病理醫(yī)師在雙頭鏡下達(dá)成共識(shí)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示, 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗(yàn)。p＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 TCT、HPV與宮頸活檢結(jié)果 TCT檢測(cè)顯示陽性139例、陰性261例, HPV-DNA檢測(cè)顯示陽性175例、陰性225例。兩種檢測(cè)結(jié)果陽性者為264例。見表1。宮頸活檢結(jié)果顯示正常/炎癥、CINⅠ級(jí)、CINⅡ級(jí)、CINⅢ級(jí)以及SCC例數(shù)分別為178例、48例、21例、11例以及6例。見表2。

表1 400例受試者TCT及HPV-DNA檢測(cè)結(jié)果［n(%)］

表2 264例受試者宮頸活檢結(jié)果［n(%)］

2.2 不同宮頸活檢分級(jí)的HPV癌基因E6/E7 mRNA表達(dá)陽性率和拷貝數(shù)比較 HPV癌基因E6/E7 mRNA表達(dá)陽性率及拷貝數(shù)隨著病變級(jí)別的遞增而增加, 且各CIN分級(jí)以及SCC患者HPV癌基因E6/E7 mRNA表達(dá)陽性率均明顯高于正常/炎癥者, 同時(shí)各級(jí)宮頸活檢分級(jí)者HPV癌基因E6/E7 mRNA拷貝數(shù)兩兩比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。見表3。

表3 不同宮頸活檢分級(jí)的HPV癌基因E6/E7 mRNA表達(dá)陽性率和拷貝數(shù)比較［n(%),］

表3 不同宮頸活檢分級(jí)的HPV癌基因E6/E7 mRNA表達(dá)陽性率和拷貝數(shù)比較［n(%),］

注：與正常/炎癥比較, ap＜0.05；與CINⅠ級(jí)比較, bp＜0.05；與CINⅡ級(jí)比較, cp＜0.05；與CINⅢ級(jí)比較, dp＜0.05

宮頸活檢分級(jí) 例數(shù) HPV癌基因E6/E7 mRNA表達(dá)陽性 HPV癌基因E6/E7 mRNA拷貝數(shù)(copies/ml)正常/炎癥 178 86(48.31) 176.26±43.05 CIN Ⅰ級(jí) 48 41(85.42)a 1168.58±248.05a CIN Ⅱ級(jí) 21 21(100.00)a 2975.30±479.44ab CIN Ⅲ級(jí) 11 11(100.00)a 4238.35±836.20abc SCC 6 6(100.00)a 7493.16±1654.82abcd

3 討論

研究顯示, 99.7%的宮頸癌患者存在HPV 感染, 而高危型HPV的持續(xù)感染可逐步引起CIN 與宮頸癌［4］。TCT檢測(cè)和HPV-DNA是目前常用于宮頸癌的篩查手段［5-9］, 前者子宮頸檢測(cè)結(jié)果與組織病理 CINⅠ～Ⅲ級(jí)的診斷符合率較低, 且存在較高的漏診率；后者則存在檢測(cè)特異性和陽性預(yù)測(cè)值低等不足。近年來, HPV癌基因E6/E7 mRNA檢測(cè)成為宮頸癌篩查的研究熱點(diǎn), HPV的 E6、E7為HPV的兩條癌基因片段,其中E6 蛋白與抑癌蛋白p53 結(jié)合, 通過阻斷異?；蚣?xì)胞的凋亡, 導(dǎo)致細(xì)胞永生化和宮頸病變的發(fā)生；E7 蛋白通過特異性結(jié)合pRb蛋白而抑制細(xì)胞周期的進(jìn)展, HPV E6/E7 mRNA過度表達(dá)可使細(xì)胞生長(zhǎng)抑制劑失活, 加速異常細(xì)胞的過度增殖, 導(dǎo)致宮頸癌的發(fā)生發(fā)展［10］。本項(xiàng)研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)TCT檢測(cè)顯示陽性139例、陰性261例, HPV-DNA檢測(cè)顯示陽性175例、陰性225例。宮頸活檢結(jié)果顯示正常/炎癥、CINⅠ級(jí)、CINⅡ級(jí)、CINⅢ級(jí)以及SCC例數(shù)分別為178例、48例、21例、11例以及6例。HPV癌基因E6/E7 mRNA表達(dá)陽性率及拷貝數(shù)隨著病變級(jí)別的遞增而增加, 且各CIN分級(jí)以及SCC患者HPV癌基因E6/E7 mRNA表達(dá)陽性率均明顯高于正常/炎癥者, 同時(shí)各級(jí)宮頸活檢分級(jí)者HPV癌基因E6/E7 mRNA拷貝數(shù)兩兩比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。提示HPV癌基因E6/E7 mRNA 表達(dá)量與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)聯(lián)。

綜上所述, HPV癌基因E6 /E7 mRNA拷貝數(shù)與宮頸病變程度相關(guān), HPV癌基因E6/E7 mRNA可作為本地區(qū)宮頸癌的篩查手段之一, 對(duì)于預(yù)測(cè)宮頸病變的發(fā)生發(fā)展具有重要意義。