動物病理標本制作及其在教學(xué)中的應(yīng)用

張煜

摘要：主要介紹了動物病理大體標本和病理組織切片的制作過程，包括取材、處理、固定、保存、透明、浸蠟、包埋及切片染色等，同時介紹了動物病理組織標本在獸醫(yī)病理學(xué)理論教學(xué)及實踐或?qū)嶒灲虒W(xué)過程中的重要作用，在提高學(xué)生的學(xué)習興趣、培養(yǎng)學(xué)生的綜合應(yīng)用能力方面具有重要意義。

關(guān)鍵詞：動物病理標本；實踐教學(xué)；考試改革；應(yīng)用

中圖分類號：G712 文獻標識碼：B 文章編號：1007-273X（2018）05-0045-02

動物病理學(xué)是獸醫(yī)基礎(chǔ)學(xué)科與臨床學(xué)科之間的橋梁，其中家禽的疾病變化比較多見，所以家禽病理標本制作及應(yīng)用至關(guān)重要。學(xué)生通過觀察患病器官、組織的病理切片，認識疾病發(fā)生發(fā)展的規(guī)律，理論聯(lián)系實際，加深理解和鞏固課堂知識，培養(yǎng)學(xué)生掌握家禽常見疾病的病理診斷技術(shù)，能夠準確分析疾病，為疾病的診治提供基礎(chǔ)依據(jù)[1]。同時病理標本的制作可以滿足多門課程的教學(xué)需要，提高學(xué)生的學(xué)習興趣，節(jié)約教學(xué)成本，促進教學(xué)及考試改革，加快畜牧獸醫(yī)專業(yè)學(xué)科的應(yīng)用型轉(zhuǎn)變。

1 病理大體標本及組織切片制作

1.1 取材

采取病料越新鮮越好，一般不超過死后24 h。應(yīng)選擇病變部與可疑病變部切取，切取時要由表及里，有淺入深并包括周圍正常組織一部分。特殊病料應(yīng)根據(jù)器官的結(jié)構(gòu)特點切取。管狀、囊狀和皮膚組織應(yīng)注意垂直切取（橫切）。帶有薄膜的組織，要防止切時薄膜分離和脫落。

切取組織塊大小以1.5 cm×1.5 cm×0.3 cm為宜，最厚不宜超過0.5 cm。組織塊病變一面應(yīng)平整光滑，另一面可不平整，以便包埋時辨認。切取后，放入事先準備好的裝有固定液的磨口玻璃廣口瓶中，并做好標記。

1.2 固定和保存

固定的目的是迅速將組織細胞殺死，使細胞中的蛋白質(zhì)、糖、脂肪等凝固，從而保持與活組織相似的結(jié)構(gòu)狀態(tài)。材料取下后應(yīng)迅速固定。固定液數(shù)量應(yīng)為病理組織塊的5～20倍。由于一般把組織塊浸入固定液后數(shù)小時固定液滲入組織液的深度只達2～3 cm，因此可以放置冰箱內(nèi)固定，使組織內(nèi)酶失去作用，細菌也能停止滋生。最常用的固定液是10%的福爾馬林溶液，使用時，用40%的甲醛飽和水溶液10 mL加水90 mL配成[2]。

對具有典型病理變化的組織和器官固定和保存后貼標簽，同時制作相應(yīng)的彩色卡片，并對其做詳細的病理變化描述，便于教學(xué)及考試中應(yīng)用。

1.3 沖洗

固定后的組織塊應(yīng)將固定液洗去。一般均用流水（自來水）沖洗12～24 h，及時沖洗尚有停止固定的作用，防止固定過度，有利于制片染色。

沖洗時如不方便用流水沖洗，也可用較大容器盛裝水浸洗，每隔一定時間換水一次。整個浸洗時間比流水沖洗應(yīng)稍長一些。乙醇固定的組織材料不需沖洗。

1.4 脫水

經(jīng)過固定的組織，沖洗后要進行脫水。脫水的目的在于將組織內(nèi)的水分用乙醇或其他溶劑置換出來，為石蠟等其他包埋劑浸入組織創(chuàng)造條件。

常用的脫水劑為乙醇。由于乙醇可以任何比例與水結(jié)合，對組織穿透力強，又能使組織硬化，因而不能將組織從水中直接移入濃度高的乙醇中，應(yīng)從低濃度逐漸到高濃度。脫水必須充分，否則給浸蠟造成困難。

除用乙醇作脫水劑外，還可以用正丁醇。正丁醇微溶于水，能與各種濃度乙醇混合，也能直接溶解石蠟。故組織經(jīng)正丁醇脫水后，不須經(jīng)二甲苯透明。用正丁醇作脫水劑，組織塊收縮降低，也不會過硬，故比乙醇優(yōu)越。

1.5 透明

透明的目的是將組織內(nèi)的乙醇用礦物油或植物油置換出來，并溶解石蠟，幫助石蠟浸透組織。由于經(jīng)過透明劑處理的組織塊用肉眼觀察呈透明狀，故稱這一過程為透明。

常用的透明劑為二甲苯，因其穿透力較強，因而組織在二甲苯中停留時間不宜過長，一般透明時間在30 min左右即可。

1.6 浸蠟

浸蠟是指組織經(jīng)過透明作用以后，放入溶化的石蠟中浸滲，使石蠟浸入組織塊中，冷卻后才能進行切片。

通常選擇熔點在52～56 ℃的石蠟，并視切片時環(huán)境的溫度而選擇。室溫高則選用熔點稍高的石蠟，反之則選用熔點較低的石蠟，這樣可防止切片時石蠟太軟或易碎裂。

浸蠟的過程是：二甲苯石蠟混合液（1∶1），1 h；二甲苯石蠟混合液（1∶2），1 h；石蠟（1），1.5 h；石蠟（2），1.5 h。上述過程可在56～58 ℃恒溫箱中進行，含二甲苯的混合液可用磨口小瓶盛裝。

1.7 包埋

包埋就是將已浸滲好的組織包埋于浸滲劑中。根據(jù)需要，包埋的方法常有石蠟包埋法和火棉膠包埋法。

石蠟包埋法：①先將熔化的石蠟倒入包埋框，用加熱的鑷子將欲包埋的組織塊在蠟液內(nèi)放置好。注意各組織塊之間的距離和每個組織塊的位置和方向。②迅速第二次往平皿內(nèi)傾倒蠟液，淹沒組織塊。待蠟液出現(xiàn)凝固層后，即輕輕放入冷水盆中或冰箱中使其凝固。石蠟完全凝固后，倒出冷縮的蠟塊片，用加熱的外科刀按組織塊位置修整蠟片待用。

1.8 組織切片

不同的切片制備方法其切片方法也有較大差別，組織切片法包括石蠟切片法、冰凍切片法、火棉膠切片法、石蠟包埋半薄切片法、樹脂包埋薄切片法和大組織石蠟切片法等。常用的切片工具包括組織切片機、切片刀和自動磨刀機等。以下主要介紹石蠟切片法。

組織經(jīng)石蠟包埋后制成的蠟塊用切片機制成切片的過程稱為石蠟切片，為目前病理診斷常用的切片制作方法。在切片前應(yīng)先切去標本周圍過多的石蠟（此過程稱為修塊），但也不能留得太少，否則易造成組織破壞及連續(xù)切片時分片困難。一般切4～6 μm的切片，特殊情況可切1～2 μm。要觀察病變的連續(xù)性，可制作連續(xù)切片。除此之外，石蠟包埋的組織便于長期保存，因此石蠟切片仍是目前各種切片制作方法中最常用、最普遍的一種方法。

1.9 蘇木精—伊紅染色法

蘇木精—伊紅染色方法，簡稱HE染色方法，是生物學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域細胞與組織學(xué)研究最廣泛應(yīng)用的染色方法。在病理學(xué)實驗中稱為常規(guī)染色方法。病理細胞和組織學(xué)的診斷、教學(xué)和研究都是用HE染色方法觀察正常和病變組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)。因此病理學(xué)工作者必須學(xué)習和掌握這種染色方法。

2 病理標本在專業(yè)教學(xué)中的應(yīng)用

2.1 激發(fā)學(xué)生學(xué)習興趣、提高學(xué)生綜合能力

在動物病理實驗過程中，專業(yè)術(shù)語枯燥抽象，面對復(fù)雜的病理變化和發(fā)病機理，學(xué)生在學(xué)習過程中容易混淆病理學(xué)的某些基本概念，更不能準確運用到相關(guān)病理變化的組織學(xué)觀察中。為了更好解決這些問題，在觀察大體標本時，運用病例教學(xué)法，創(chuàng)設(shè)情境，舉出真實生動的臨床事例，吸引學(xué)生的注意力。因為每一個大體標本都擁有一個故事，這個故事生動、真實，看得見，摸得著，易于形成深刻的記憶，并起到激發(fā)學(xué)習興趣的作用，使學(xué)生在分析病例、觀察病變過程中帶著問題積極主動地查找資料，尋找答案，通過對病例標本的觀察與討論，可以培養(yǎng)學(xué)生分析問題、解決問題和創(chuàng)新的能力[3]。例如可以將實驗室收集的雞新城疫、雞馬立克、傳染性法氏囊、壞死性腸炎及沙門氏菌病等家禽常見疾病的標本分組，每類疾病標本貼上相同的代號，由學(xué)生對病理標本進行描述討論，并且根據(jù)病變組合判斷病因，寫出實驗報告[4]。最后，在進行歸納總結(jié)時，教師轉(zhuǎn)換為主講人，科學(xué)嚴謹?shù)胤治霾±?/p>

2.2 推進高校專業(yè)課程的考試及評價方式改革

目前高校的考試評價主要以期末考試的方式來評定，方式較單一，往往以書面的形式展開，考試內(nèi)容則更注重基礎(chǔ)的理論知識，對學(xué)生知識的實際應(yīng)用能力的重視不足，這樣的考試評價嚴重影響了學(xué)生的學(xué)習效果，使學(xué)生缺乏學(xué)習動力，使學(xué)生的所學(xué)知識和實際應(yīng)用嚴重脫軌，嚴重阻礙了學(xué)生創(chuàng)造性思維的發(fā)展[5]。而動物標本的制作及應(yīng)用過程可以以學(xué)生為主體，在整個過程可以對動物生理學(xué)、解剖學(xué)、病理學(xué)、臨床診斷學(xué)等多門課程進行考核，內(nèi)容更加全面化，同時可以在標本制作過程中鍛煉學(xué)生的動手能力、案例分析能力、解決問題的能力，發(fā)掘?qū)W生的創(chuàng)新能力。并且可以考核學(xué)生的學(xué)習態(tài)度、素質(zhì)等綜合能力，使考核評價方式多元化，由教師和學(xué)生共同參與，為學(xué)生建立起多元化的考試方式。同時，可以根據(jù)專業(yè)課的實際情況，對每名學(xué)生進行多門專業(yè)課程的綜合能力考核，讓學(xué)生更深刻理解一些專業(yè)知識的內(nèi)在聯(lián)系，對課程橋梁的作用有更深刻的認識。

2.3 促進高校教學(xué)模式改革，加快應(yīng)用技術(shù)型大學(xué)建立

目前，大部分高校仍保留著原有的教育思想，教育模式仍以教師為中心，對學(xué)生的教學(xué)仍然停留在教師傳授知識而學(xué)生學(xué)習知識的軌道上。機械的課堂理論知識教學(xué)脫離實踐，使理論知識和實踐應(yīng)用常常出現(xiàn)脫節(jié)問題，使學(xué)生的實際分析問題能力和操作能力嚴重不足[6]。對于動物醫(yī)學(xué)專業(yè)教學(xué)中的理論和實踐脫節(jié)問題，動物病理標本制作及在教學(xué)中的應(yīng)用，可以豐富專業(yè)教師的案例教學(xué)內(nèi)容；在注重理論知識的前提下，還可以加強相關(guān)實踐課程的開展，培養(yǎng)學(xué)生的綜合能力，豐富自身的教學(xué)資源；促進了教育理論與實踐的良性互動；強化實踐育人觀念和實踐教學(xué)環(huán)節(jié)，提升了學(xué)生動手能力、應(yīng)用專業(yè)知識解決實際問題的能力和創(chuàng)業(yè)創(chuàng)新能力，加快了高校應(yīng)用技術(shù)型能力的提升。

參考文獻：

[1] 趙德明.獸醫(yī)病理學(xué)[M].第三版.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2012.

[2] 郭虹彩，李青山，張 浩.動物病理標本的制作[J].中國畜牧獸醫(yī)文摘，2017，33（2）：48.

[3] 王健琳，尹燕博.動物病理標本在獸醫(yī)病理教學(xué)過程中的應(yīng)用[J].考試周刊，2011（4）：209-210.

[4] 賴為明，耿 毅.發(fā)揮病理標本在動物病理學(xué)實驗教學(xué)中的作用[J].實驗科學(xué)與技術(shù)，2015，26（1）：50-52.

[5] 賴曉華.高校教學(xué)模式與考試評價體系改革研究[J].課程教育研究，2017（12）：2-3.

[6] 馮 妥.論高校實踐教學(xué)課程考試與評價的改革構(gòu)想[J].中國科教創(chuàng)新導(dǎo)刊，2011（2）：19.