基于流通池裝置的新溶出方法用于尼莫地平片的一致性評(píng)價(jià)

李 輝，趙悅清，蔣妮諺含，程澤能*

(1中南大學(xué)湘雅藥學(xué)院，長(zhǎng)沙 410013；2湖南中醫(yī)藥高等專(zhuān)科學(xué)校，株洲 412012)

作為藥物特性的一種檢查方法，溶出檢查在藥物制劑研發(fā)及終產(chǎn)品的質(zhì)量控制中發(fā)揮著重要的作用[1]。常規(guī)的溶出方法有籃法、槳法、小杯法等。然而，這些常規(guī)的方法均采用了“不同藥物相同制劑使用不同條件達(dá)到相同的通用標(biāo)準(zhǔn)”這一基本模式，這種封閉的溶出系統(tǒng)存在若干內(nèi)在缺陷：如不能模擬胃腸道內(nèi)序貫性生理pH的胃腸液，不能模擬體內(nèi)胃腸液的流體動(dòng)力學(xué)特征，不能模擬藥物在胃腸道內(nèi)的動(dòng)態(tài)轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程等[2-3]，導(dǎo)致藥物制劑的體內(nèi)外溶出行為不一致，即體內(nèi)外相關(guān)性(invitroandinvivocorrelation,IVIVC)差[4]，體外溶出檢查往往不能夠全面客觀反映藥物進(jìn)入體內(nèi)后的實(shí)際溶出行為。在生物藥劑學(xué)領(lǐng)域，建立藥物制劑體內(nèi)和體外溶出/釋放的相關(guān)性是一項(xiàng)長(zhǎng)期的挑戰(zhàn)。

流通池法是美國(guó)藥典(USP40)收載的第Ⅳ種溶出方法。相比于其他方法，流通池溶出裝置由于其特殊的結(jié)構(gòu)和工作模式，可以更好地模擬藥物在胃腸道內(nèi)的實(shí)際溶出環(huán)境和轉(zhuǎn)運(yùn)條件，其在體內(nèi)外相關(guān)的藥物溶出研究方面有獨(dú)到的優(yōu)勢(shì)[5]。本研究選用流通池溶出儀的開(kāi)放式工作模式，通過(guò)在不同時(shí)間段序貫地使用不同的溶出條件，模擬胃腸道內(nèi)的溶出環(huán)境，依據(jù)體內(nèi)外相關(guān)性原理，建立了一種新溶出方法，并將其用于藥物制劑體外溶出行為的一致性評(píng)價(jià)。同時(shí)，以傳統(tǒng)的四條溶出曲線(xiàn)法作為對(duì)照，采用槳法溶出儀考察了實(shí)驗(yàn)藥品在4種不同溶出介質(zhì)中的溶出行為，旨在評(píng)價(jià)國(guó)內(nèi)生產(chǎn)的試驗(yàn)制劑(仿制藥)和國(guó)外的參比制劑(原研藥)溶出行為的一致性，并考察新溶出方法與四條溶出曲線(xiàn)法在區(qū)分藥物制劑質(zhì)量差異方面的異同。

本實(shí)驗(yàn)選擇尼莫地平片(nimodipine tablet)為研究對(duì)象，其劑型為胃溶型普通速釋片，活性成分為尼莫地平。尼莫地平屬于生物藥劑學(xué)分類(lèi)(biopharmaceutics classification system，BCS)的Ⅱ類(lèi)(BCSⅡ)[6]，具有低溶解度和高滲透性，藥物的體內(nèi)吸收符合溶出限速，可以認(rèn)為體內(nèi)吸收曲線(xiàn)等價(jià)于體內(nèi)溶出曲線(xiàn)，理論上能夠建立IVIVC[7-8]。通過(guò)建立IVIVC，并結(jié)合藥物的BCS分類(lèi)和劑型特征，可以使體外溶出/釋放試驗(yàn)更好地反映藥物在體內(nèi)的溶出規(guī)律和吸收情況[9-10]?；贗VIVC原理，改進(jìn)現(xiàn)有的溶出度評(píng)價(jià)方法或開(kāi)發(fā)新溶出方法，深入分析和控制國(guó)產(chǎn)藥品與國(guó)外原研藥溶出特性的差異，對(duì)于提高我國(guó)口服藥物的制劑水平和質(zhì)量，促進(jìn)制劑工藝水平提升具有一定意義[11]。

1 材 料

1.1 藥品與試劑

尼莫地平片試驗(yàn)制劑(規(guī)格：30 mg，批號(hào)：20170501，國(guó)內(nèi)某藥企)；尼莫地平片參比制劑(規(guī)格：30 mg，批號(hào)：BXN152G、BXN14AH，拜耳醫(yī)藥保健有限公司)；尼莫地平對(duì)照品(純度：99.7%，批號(hào)：100270-201403，中國(guó)藥品生物制品檢定所)；十二烷基硫酸鈉(SDS，中國(guó)食品藥品檢驗(yàn)研究院，分析純)；其他試劑均為市售分析純，水為超純水。

1.2 儀 器

RC8MD型藥物溶出度儀(天津天大天發(fā)科技有限公司)；HS_R650型流通池微分溶出儀(長(zhǎng)沙宏盛電子科技有限公司)；UV-1800型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)(日本Shimadzu公司)；AB135-S型十萬(wàn)分之一天平(瑞士Mettler-Toledo公司)；BS224S型萬(wàn)分之一天平(北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司)等。

2 方 法

2.1 溶出樣品的檢測(cè)

采用紫外-可見(jiàn)分光光度(UV)法測(cè)定尼莫地平片的溶出度，檢測(cè)波長(zhǎng)為238 nm。收集溶出樣品后立即用0.22 μm的微孔濾頭(尼龍膜)過(guò)濾，通過(guò)隨行標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算樣品中尼莫地平的質(zhì)量濃度。方法學(xué)研究表明：尼莫地平在238 nm波長(zhǎng)處有較大吸收，空白輔料和溶出介質(zhì)在該波長(zhǎng)處對(duì)主藥測(cè)定無(wú)明顯干擾；以各溶出介質(zhì)配制的尼莫地平對(duì)照品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。尼莫地平在純化水(0.3%SDS)、pH 1.2氯化鈉鹽酸溶液(0.3%SDS)、pH 4.5醋酸鹽緩沖液(0.3%SDS)和pH6.8磷酸鹽緩沖液(0.3%SDS)等溶出介質(zhì)中，其質(zhì)量濃度在4.0～40.0 μg/mL范圍內(nèi)線(xiàn)性良好(r≥0.999)。精密度和回收率試驗(yàn)結(jié)果均符合定量分析的要求。由于尼莫地平具有光敏性，本實(shí)驗(yàn)的所有操作均在避光條件下進(jìn)行。

2.2 新溶出方法

通過(guò)解析和聯(lián)立尼莫地平片參比制劑的體內(nèi)吸收過(guò)程和體外溶出行為，建立IVIVC并確立新溶出方法。依據(jù)參比制劑口服給藥后的血藥濃度數(shù)據(jù)計(jì)算其體內(nèi)累積吸收百分率(cumulative absorption，F(xiàn)abs，%)，以體內(nèi)不同時(shí)間的Fabs作為體外溶出標(biāo)準(zhǔn)，基于流通池法溶出儀的開(kāi)放式工作模式，通過(guò)試驗(yàn)和對(duì)比不同溶出條件(不同溶出介質(zhì)、不同介質(zhì)流速、不同表面活性劑濃度、不同pH等)下的累積溶出百分率(cumulative dissolution，F(xiàn)dis，%)，對(duì)藥物的體外累積溶出百分率-時(shí)間曲線(xiàn)與體內(nèi)累積吸收百分率-時(shí)間曲線(xiàn)進(jìn)行比較研究，最終使兩條曲線(xiàn)實(shí)現(xiàn)重合，從而創(chuàng)建一種點(diǎn)對(duì)點(diǎn)的IVIVC，相應(yīng)地確立出一種與體內(nèi)條件相關(guān)的體外溶出方法(圖1)，并用該新方法考察尼莫地平片試驗(yàn)制劑和參比制劑體外溶出行為的一致性。

Figure1 Development of the IVIVC and establishment of the corresponding dissolution condition related toinvivophysiological conditions

2.2.1 新溶出方法的建立

參比制劑人體藥代動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)的獲?。和ㄟ^(guò)文獻(xiàn)檢索獲取參比制劑口服給藥(R1和R2)和尼莫地平靜脈注射給藥(iv)數(shù)據(jù)[12-13]，采用GetData Graph Digitizer v2.22軟件分別對(duì)文獻(xiàn)中口服和靜脈注射給藥的平均血藥濃度-時(shí)間曲線(xiàn)進(jìn)行圖形數(shù)字化[14]，獲取不同時(shí)間點(diǎn)的血藥濃度數(shù)據(jù)。其中R1和R2分別表示不同實(shí)驗(yàn)周期時(shí)的給藥情況。本研究中，R1的血藥濃度數(shù)據(jù)被用于建立新溶出方法；R2的則被用于檢驗(yàn)新溶出方法的體內(nèi)外相關(guān)性。

體外溶出標(biāo)準(zhǔn)的制定：使用PhoenixTMWinNonlin?6.1軟件對(duì)參比制劑口服給藥的血藥濃度數(shù)據(jù)進(jìn)行房室模型擬合，選用Loo-Riegelman法解析參比制劑口服給藥后的Fabs[15](公式1)，以不同時(shí)間點(diǎn)的Fabs作為新溶出方法的體外溶出標(biāo)準(zhǔn)。

(1)

溶出條件的摸索和確立：選用相似因子(f2)法[16-17]判斷藥物體外溶出曲線(xiàn)和體內(nèi)吸收曲線(xiàn)的一致性，以建立體內(nèi)外相關(guān)性。依據(jù)體外溶出標(biāo)準(zhǔn)，通過(guò)摸索和對(duì)比不同的溶出條件，使參比制劑的體外累積溶出百分率-時(shí)間曲線(xiàn)與體內(nèi)累積吸收百分率-時(shí)間曲線(xiàn)間的相似因子(f2)大于或等于50(公式2)，即兩條曲線(xiàn)達(dá)到一致，從而實(shí)現(xiàn)體外溶出行為與體內(nèi)吸收過(guò)程的相關(guān)。

(2)

式中：f2為兩條曲線(xiàn)間的相似因子，n為采樣點(diǎn)個(gè)數(shù)，Rt/abs為參比制劑在t時(shí)間的體內(nèi)Fabs，Rt/dis為參比制劑在t時(shí)間的體外Fdis。

分別選用人工胃液和醋酸鹽緩沖液(含不同濃度的SDS)為溶出介質(zhì)，依次采用表1所示的C1～C6 6種溶出條件，探索不同的溶出介質(zhì)、流速、pH、表面活性劑濃度等變量對(duì)藥物溶出過(guò)程的影響，依次在5，10，20，30，45，60，90，240 min時(shí)收集溶出樣品進(jìn)行檢測(cè)，研究參比制劑的體外溶出行為。由于本研究選用了流通池法的開(kāi)放式工作模式，只能得到藥物的微分溶出數(shù)據(jù)，為便于溶出曲線(xiàn)的統(tǒng)計(jì)學(xué)比較，采用數(shù)值積分法將微分溶出數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化為累積溶出數(shù)據(jù)(公式3)。

(3)

式中：Dissolution(%)為ti時(shí)間藥物的體外累積溶出百分率；n為取樣點(diǎn)個(gè)數(shù)；dosage為藥物制劑的規(guī)格；Ci為ti時(shí)間點(diǎn)溶出池中藥物的濃度，F(xiàn)low rate為溶出介質(zhì)流速。

Table1 Six dissolution conditions#(C1- C6) under exploration

ConditionDissolution mediumFlow velocity/(mL/min) Time periodC1Simulated gastric fluid(Without surfactant)2.00-20 min4.020 min-3 h2.03-4 hC2Simulated gastric fluid(Without surfactant)5.00-15 minAcetate buffer (0.2%SDS)4.015 min-2 hAcetate buffer (0.4%SDS)4.02-4 hC3Simulated gastric fluid(Without surfactant)5.00-15 minAcetate buffer (0.8%SDS)4.015 min-3 h2.03-4 hC4Simulated gastric fluid(Without surfactant)5.00-15 minAcetate buffer (0.4%SDS)2.015 min-3 h4.03-4 hC5Simulated gastric fluid(Without surfactant)5.00-15 minAcetate buffer (0.4%SDS)4.015 min-1.5 hAcetate buffer (0.6%SDS)4.01.5-4 hC6Simulated gastric fluid(Without surfactant)5.00-15 minAcetate buffer (0.6%SDS)2.015 min-1 h3.01-2 h1.52-4 h

#The test unit is just one under each condition,and all experiments are conducted at temperature of 37 °C

2.2.2 體內(nèi)外相關(guān)性檢驗(yàn) 重復(fù)溶出6片參比制劑，并計(jì)算平均Fdis。利用線(xiàn)性最小二乘法回歸原理，以不同時(shí)間點(diǎn)的體外平均溶出百分率作為自變量，以文獻(xiàn)中參比制劑(R2)相應(yīng)時(shí)間的體內(nèi)Fabs作為因變量，進(jìn)行線(xiàn)性回歸。依據(jù)回歸系數(shù)r評(píng)價(jià)“2.2.1”項(xiàng)建立的新溶出方法，檢驗(yàn)體內(nèi)外相關(guān)性。

2.2.3 基于新溶出方法的溶出研究和溶出一致性評(píng)價(jià) 在新溶出方法下，分別對(duì)參比制劑和試驗(yàn)制劑進(jìn)行溶出研究。選用非模型依賴(lài)的多變量置信區(qū)間法評(píng)價(jià)兩制劑溶出曲線(xiàn)的相似性[18]。通過(guò)DDSolver1.0軟件[19]計(jì)算參比制劑溶出數(shù)據(jù)的多變量統(tǒng)計(jì)矩(multivariate statistical distance，MSD)和試驗(yàn)制劑溶出數(shù)據(jù)MSD的90%置信區(qū)間。以參比制劑溶出量的批間差異情況為依據(jù)，確立MSD的相似性限度，并確定試驗(yàn)制劑和參比制劑平均溶出量的MSD及實(shí)測(cè)溶出量MSD的90%置信區(qū)間。如果此置信區(qū)間上限小于或等于參比制劑的相似性限度，則認(rèn)為兩制劑的溶出曲線(xiàn)具有相似性。

2.3 四條溶出曲線(xiàn)法

2.3.1 溶出曲線(xiàn)測(cè)定 參照《中華人民共和國(guó)藥典》(2015年版)關(guān)于尼莫地平片的溶出度檢查條件[20]：取尼莫地平片12片，按照槳法，依次以純化水(0.3%SDS)、pH 1.2氯化鈉鹽酸溶液(0.3%SDS)、pH 4.5醋酸鹽緩沖液(0.3%SDS)和pH 6.8磷酸鹽緩沖液(0.3%SDS)900 mL為溶出介質(zhì)進(jìn)行溶出研究，轉(zhuǎn)速為75 r/min，分別于5，10，15，20，30，45，60 min取溶出樣品5 mL(同時(shí)補(bǔ)液5 mL)，采用UV法檢測(cè)，并計(jì)算不同時(shí)間點(diǎn)的累積溶出百分率。

2.3.2 溶出行為一致性評(píng)價(jià) 選用相似因子(f2)法評(píng)價(jià)尼莫地平片參比制劑和試驗(yàn)制劑在各介質(zhì)中溶出行為的相似性。

3 結(jié) 果

3.1 新溶出模式

3.1.1 尼莫地平的體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù) 從文獻(xiàn)獲取的參比制劑口服給藥和尼莫地平靜脈注射給藥的平均血藥濃度-時(shí)間曲線(xiàn)如圖2所示，其中R1和R2分別表示同一臨床實(shí)驗(yàn)中不同實(shí)驗(yàn)周期時(shí)參比制劑的給藥情況。R1的人體血藥濃度數(shù)據(jù)被用于建立新溶出方法和體內(nèi)外相關(guān)性；R2的則被用于檢驗(yàn)IVIVC。

Figure2 Plasma drug concentration-time curves of nimodipine after administration orally (R1 and R2) and intravenously (iv)

R1 and R2 represent the human plasma drug concentration data during different pharmacokinetic experiments in the literatures respectively.R1 was used to establish the new dissolution method and IVIVC，and R2 was used to test IVIVC in this study

3.1.2 體外溶出標(biāo)準(zhǔn) 選用Loo-Riegelman法解析參比制劑的體內(nèi)Fabs(表2)。以R1的Fabs作為體外溶出標(biāo)準(zhǔn)用于建立新溶出方法。

Table2Fabsversus time after orally administration of reference preparation

t/hFabs/%R1R20000.252.532.030.524.9221.560.7546.3242.21159.3754.121.572.4767.35281.0975.67390.7486.32493.1390.95

C1～C6各溶出條件下的累積溶出曲線(xiàn)見(jiàn)圖3。從圖3可以直觀地看出，C6溶出條件下的溶出曲線(xiàn)與藥物的體內(nèi)吸收曲線(xiàn)最為接近。在C1～C5溶出條件下，尼莫地平片的體外累積溶出曲線(xiàn)與體內(nèi)吸收曲線(xiàn)間的f2依次為11.17、25.37、38.19、47.77和47.75，均小于50；而在C6條件下，藥物的體外累積溶出曲線(xiàn)與體內(nèi)吸收曲線(xiàn)間f2為75.42，明顯大于50，提示體外溶出條件C6與藥物的體內(nèi)生理溶出環(huán)境比較接近，藥物的體外溶出行為與體內(nèi)溶出/吸收過(guò)程具有相關(guān)性，體內(nèi)外過(guò)程較為一致。

Figure3Invitrocumulative dissolution curves under the six dissolution conditions respectively (C1- C6) andinvivocumulative absorption curve of the reference preparation

3.1.3 體內(nèi)外相關(guān)性檢驗(yàn) 在C6溶出條件下，尼莫地平片參比制劑的平均Fdis與相應(yīng)時(shí)間的平均Fabs間線(xiàn)性回歸的相關(guān)系數(shù)r=0.981 8，線(xiàn)性較好(圖4)，表明C6溶出條件的體內(nèi)外相關(guān)性較好，基于流通池裝置的C6溶出條件可以作為尼莫地平片的新溶出方法。

Figure4 Plot of mean cumulative dissolutioninvitroversus mean cumulative absorptioninvivofor nimodipine

3.1.4 溶出曲線(xiàn)測(cè)定及結(jié)果 在新溶出方法下，參比制劑和試驗(yàn)制劑的平均微分溶出曲線(xiàn)和平均累積溶出曲線(xiàn)見(jiàn)圖5。溶出曲線(xiàn)的相似性評(píng)價(jià)，優(yōu)先考慮使用f2法，但由于試驗(yàn)制劑第1個(gè)取樣時(shí)間點(diǎn)的溶出量相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差超過(guò)了20%，其余取樣點(diǎn)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差也超過(guò)了10%，不滿(mǎn)足f2法的適用條件[21]，因此選用非模型依賴(lài)的多變量置信區(qū)間法評(píng)價(jià)兩制劑溶出曲線(xiàn)的相似性。計(jì)算得出參比制劑溶出數(shù)據(jù)的MSD為16.849 5，其與試驗(yàn)制劑溶出量MSD的90%置信區(qū)間為：13.877 1～19.821 8。本研究所用的參比制劑僅為2個(gè)批次，因此，僅以這2個(gè)批次溶出數(shù)據(jù)的MSD作為相似性限度。結(jié)果顯示MSD的90%置信區(qū)間上限明顯大于相似性限度，因此，判定試驗(yàn)制劑與參比制劑的溶出曲線(xiàn)不具有相似性。

3.2 四條溶出曲線(xiàn)法

尼莫地平片在槳法下的溶出曲線(xiàn)見(jiàn)圖6。通過(guò)槳法得到的溶出數(shù)據(jù)滿(mǎn)足f2法的適用條件，因此，采用f2法評(píng)價(jià)參比制劑和試驗(yàn)制劑溶出曲線(xiàn)的相似性。兩制劑在純化水(0.3%SDS)、pH 1.2氯化鈉鹽酸溶液(0.3%SDS)、pH 4.5醋酸鹽緩沖液(0.3%SDS)和pH 6.8磷酸鹽緩沖液(0.3%SDS)4種介質(zhì)中，平均溶出曲線(xiàn)間的f2依次為54.29、59.34、51.34和62.05，均大于50，表明兩制劑的溶出行為基本相似。

A：Purified water (0.3%SDS)；B：pH 1.2 hydrochloric acid solution of sodium chloride (0.3%SDS)；C：pH 4.5 acetate buffer solution (0.3%SDS)；D：pH 6.8 phosphate buffer solution (0.3%SDS)

3.3 兩種溶出方法的對(duì)比

3.3.1 溶出過(guò)程比較 在新溶出方法下，試驗(yàn)制劑與參比制劑體外溶出曲線(xiàn)不相似，試驗(yàn)制劑的溶出度顯著低于參比制劑；而槳法溶出結(jié)果表明，兩者在4種溶出介質(zhì)中的溶出行為基本相似，溶出度無(wú)明顯差異。在新方法的溶出研究中，觀察發(fā)現(xiàn)兩制劑的形態(tài)變化存在著明顯的差別：參比制劑有一個(gè)快速的崩解過(guò)程，而試驗(yàn)制劑的崩解過(guò)程較為緩慢，直至4 h時(shí)崩解尚不完全；但是在槳法溶出過(guò)程中，兩制劑形態(tài)變化的區(qū)別并不明顯，均很快發(fā)生了崩解。新溶出方法的溶出過(guò)程較為平緩，沒(méi)有瞬間突釋現(xiàn)象；而槳法的溶出過(guò)程比較迅速，60 min時(shí)藥物的溶出量均已達(dá)85%。在新溶出方法中，參比制劑的批內(nèi)溶出重現(xiàn)性較好，溶出曲線(xiàn)幾乎重合，而試驗(yàn)制劑的溶出重現(xiàn)性非常差，批內(nèi)溶出數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)偏差較大；但是在槳法中，試驗(yàn)制劑和參比制劑的溶出重現(xiàn)性均很好，體現(xiàn)不出上述差別。新溶出模式的研究結(jié)果表明，試驗(yàn)制劑和參比制劑的內(nèi)在質(zhì)量存在差異，試驗(yàn)制劑的制劑工藝可能較差，溶出不完全，并且溶出度重現(xiàn)性不好，而傳統(tǒng)的槳法對(duì)于藥物制劑間的這些細(xì)微差異并無(wú)有效的區(qū)分力。

3.3.2 體內(nèi)外相關(guān)性比較 在新溶出方法下，尼莫地平片參比制劑溶出85%需要4 h左右的時(shí)間，這與體內(nèi)實(shí)際吸收情況比較接近(表2)，其累積溶出曲線(xiàn)與體內(nèi)吸收曲線(xiàn)幾乎重合；而槳法中，藥物在起始階段快速溶出，到45 min時(shí)，4種溶出介質(zhì)中的溶出量均已達(dá)80%，這與體內(nèi)實(shí)際情況不符合。槳法得到的藥物體外溶出速率顯著大于體內(nèi)實(shí)際吸收速率，而新溶出方法下的體外溶出速率與體內(nèi)吸收速率較為接近。

為評(píng)價(jià)新溶出模式下尼莫地平片的體外溶出動(dòng)力學(xué)與其體內(nèi)吸收動(dòng)力學(xué)的相似性，采用一級(jí)速率模型(First-order)、零級(jí)速率模型(Zero-order)和威布爾模型(Weibull)3種常用的數(shù)學(xué)模型分別對(duì)參比制劑的平均體內(nèi)吸收曲線(xiàn)和平均體外溶出曲線(xiàn)進(jìn)行動(dòng)力學(xué)過(guò)程擬合，以擬合優(yōu)度(R2)判斷擬合效果(R2越接近1，說(shuō)明擬合越好)。結(jié)果表明，體外溶出動(dòng)力學(xué)和體內(nèi)吸收動(dòng)力學(xué)均不符合零級(jí)模型，而一級(jí)模型和威布爾模型均能較好地描述體內(nèi)吸收動(dòng)力學(xué)。對(duì)比R2得出，威布爾模型擬合效果最佳，一級(jí)速率模型次之(表3)。

分析參比制劑的體外溶出動(dòng)力學(xué)和體內(nèi)吸收動(dòng)力學(xué)威布爾模型參數(shù)可知：體外模型參數(shù)α與體內(nèi)的比較接近，參數(shù)β均大于1，表明藥物的體外溶出和體內(nèi)吸收過(guò)程較為一致。由參比制劑體外溶出一級(jí)速率模型參數(shù)和體內(nèi)吸收一級(jí)速率模型參數(shù)可知，新溶出方法得到的體外溶出速率常數(shù)k1與其體內(nèi)吸收速率常數(shù)k1基本一致。因此，從體內(nèi)外相關(guān)性的角度比較兩種溶出方法表明：相比于槳法，新溶出方法能更好地預(yù)測(cè)和反映尼莫地平片的體內(nèi)實(shí)際溶出/吸收過(guò)程。

Table3 Fitting results ofinvitrodissolution kinetics under the new dissolution method andinvivoabsorption kinetics

Kinetic modelFunctionvitro/vivoModel parameterGoodness of fit (R2)Zero-orderF=k0×tin vivok0=0.5140.669 2in vitrok0=0.5280.679 2First-orderF=100×[1-Exp(-k1×t)]in vivok1=0.0120.967 5in vitrok1=0.0140.925 7WeibullF=100×{1-Exp[-(t^β)/α]}in vivoα=217.17,β=1.2500.978 3in vitroα=284.37,β=1.3820.949 8

4 討 論

本研究分別通過(guò)兩種溶出方法考察了尼莫地平片試驗(yàn)制劑和參比制劑體外溶出行為的一致性，得出了不一樣的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。新溶出方法表明2種制劑的體外溶出行為不相似；而四條溶出曲線(xiàn)法則顯示相似。因?yàn)樾氯艹龇椒ㄅc體內(nèi)實(shí)際情況更為接近，并且對(duì)于藥物制劑間質(zhì)量的細(xì)微差異有更好的區(qū)分性，理論上可以為藥物制劑體內(nèi)生物等效性評(píng)價(jià)提供更為有力的數(shù)據(jù)支持。因此，為提高尼莫地平片試驗(yàn)制劑生物等效性實(shí)驗(yàn)的成功率，保證其與參比制劑質(zhì)量一致性，有必要對(duì)試驗(yàn)制劑繼續(xù)進(jìn)行制劑學(xué)研究，直至其在新溶出方法下的溶出曲線(xiàn)與參比制劑達(dá)到一致。

4.1 新溶出方法的建立

從生理學(xué)角度考慮，口服藥物進(jìn)入體內(nèi)后的溶出、轉(zhuǎn)運(yùn)和吸收是一個(gè)動(dòng)態(tài)連續(xù)的過(guò)程[22]，不同胃腸道部位的生理環(huán)境對(duì)于該過(guò)程會(huì)產(chǎn)生不同的影響。本研究所涉及的新溶出方法正是通過(guò)在不同時(shí)間段序貫地使用不同的溶出條件來(lái)動(dòng)態(tài)地模擬這一過(guò)程。該方法以流通池為溶出裝置，模擬了體內(nèi)實(shí)際的消化道容積和消化液的含量；以單向泵入的新鮮溶出介質(zhì)對(duì)藥物進(jìn)行溶出，模擬了藥物在體內(nèi)的實(shí)際溶出/轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程和適當(dāng)?shù)穆┎蹢l件；以層流狀態(tài)的介質(zhì)液流作用模擬了體內(nèi)有限的胃腸蠕動(dòng)和流體動(dòng)力學(xué)特征，可以使藥物實(shí)現(xiàn)平穩(wěn)地溶出，因此，新溶出方法更接近體內(nèi)的真實(shí)情況。

4.2 新溶出方法的區(qū)分效能

理論上，“多種pH條件下溶出曲線(xiàn)的測(cè)定和比對(duì)”能很好地揭示口服藥物在不同體質(zhì)、不同生理?xiàng)l件人群體內(nèi)的溶出行為，是藥物質(zhì)量一致性評(píng)價(jià)的重要手段[23]。但是，近年來(lái)，有很多研究者提出了“即使藥物制劑體外的四條溶出曲線(xiàn)一致，體內(nèi)不一定生物等效”的觀點(diǎn)和實(shí)例。分析原因可能為：在基于槳法或籃法溶出模式的四條溶出曲線(xiàn)研究中，“較大體積的溶出介質(zhì)”和“較強(qiáng)的機(jī)械攪拌力”掩蓋了參比制劑和試驗(yàn)制劑某些內(nèi)在質(zhì)量屬性的差別，對(duì)此并無(wú)有效的區(qū)分力。而“較大體積的溶出介質(zhì)”和“較強(qiáng)的機(jī)械攪拌力”也并不符合體內(nèi)的實(shí)際情況?；诹魍ǔ厝艹鰞x的新溶出方法則可以有效地避免槳法或籃法的上述缺陷。

4.3 本研究的不足之處

由于客觀條件的限制，本研究存在以下不足：①未能通過(guò)人體臨床試驗(yàn)獲取參比制劑的體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)，本研究所涉及的人體血藥濃度數(shù)據(jù)均是從已有文獻(xiàn)中獲得，而在通過(guò)Getdata Graph Digitizer軟件從文獻(xiàn)中獲取數(shù)據(jù)的過(guò)程中難免引入誤差；②通常驗(yàn)證一種IVIVC時(shí)要求將同批供試品的體外溶出百分率和相應(yīng)時(shí)間的體內(nèi)吸收百分率進(jìn)行回歸分析，而本研究所用的體外溶出數(shù)據(jù)和體內(nèi)吸收數(shù)據(jù)并不是源于同批供試品，非同批產(chǎn)品間潛在的質(zhì)量差異，可能對(duì)IVIVC的建立和驗(yàn)證帶來(lái)影響；③本研究只采用了一種國(guó)產(chǎn)藥品與其參比制劑做溶出特性的比較研究，結(jié)果難免存在一定的片面性，理論上應(yīng)選擇多家不同企業(yè)生產(chǎn)的試驗(yàn)制劑進(jìn)行研究，以考察新溶出方法的工作效能。這些問(wèn)題將在后期研究中進(jìn)一步完善和解決。

參 考 文 獻(xiàn)

[1] Anand O,Lawrence XY,Conner DP,etal.Dissolution testing for generic drugs:an FDA perspective[J].AAPSJ,2011,13(3):328.

[2] Tsume Y,Matsui K,Searls AL,etal.The impact of supersaturation level for oral absorption of BCS class IIb drugs,dipyridamole and ketoconazole,usinginvivopredictive dissolution system:gastrointestinal simulator (GIS)[J].EurJPharmSci,2017,102(5):126-139.

[3] Li ZQ,He X,Liu CX.Recent advances in drug dissolution/permeation synchronous evaluation technologies based on physiological characteristics of gastrointestinal tract [J].ActaPharmSin(藥學(xué)學(xué)報(bào)),2016,51(10):1540-1550.

[4] U.S.Food and Drug Administration.Guidance for industry,extended release oral dosage forms:development,evaluation,and application ofinvitro/invivocorrelations[EB/OL].(1997-09)[2017-11-13].https://www.fda.gov/downloads/dru-gs/guidAncecomplianceregulatoryinformation/guidances/ucm070239.pdf.

[5] Gite S,Chogale M,Patravale V.Development and validation of a discriminating dissolution method for atorvastatin delayed-release nanoparticles using a flow through cell:a comparative study using USP apparatus 4 and 1[J].DissolutTechnol,2016,23(2):14-20.

[6] Prajapat MD,Patel NJ,Bariya A,etal.Formulation and evaluation of self-emulsifying drug delivery system for nimodipine,a BCS class II drug[J].JDrugDelivSciTec,2017,39(6):59-68.

[7] Margolskee A,Darwich AS,Galetin A,etal.Deconvolution and IVIVC:exploring the role of rate-limiting conditions[J].AAPSJ,2016,18(2):321-332.

[8] Hardikar S,Bhosale AV,Budhawant RN.Establishment ofinvivo-invitrocorrelation:a cogent strategy in product development process[J].IndianJPharmEdu,2014,48(4):66-73.

[9] Tsume Y,Mudie DM,Langguth P,etal.The Biopharmaceutics classification system:subclasses forinvivopredictive dissolution (IPD) methodology and IVIVC[J].EurJPharmSci,2014,57(1):152-163.

[10] Kumar V,Lalit Kumar K,Shavej A,etal.Application of assumed IVIVC in product life cycle management:a case study of trimetazidine dihydrochloride extended release tablet[J].JBioequivAvailab,2013,5(1):006-015.

[11] Suarez-Sharp S,Li M,Duan J,etal.Regulatory experience withinvivoinvitrocorrelations (IVIVC) in new drug applications[J].AAPSJ,2016,18(6):1379-1390.

同時(shí)，服裝在一定程度上可以彌補(bǔ)或完善身材比例上的不足，如深色的可以讓人看起來(lái)更苗條；而亮色可以看起來(lái)活潑一些同時(shí)也會(huì)豐滿(mǎn)一些；長(zhǎng)裙可以讓人看起來(lái)更修長(zhǎng)；短裙可以更好地展示腿部線(xiàn)條。

[12] R?msch KD,Graefe KH,Scherling D,etal.Pharmacokinetics and metabolism of calcium-blocking agents nifedipine,nitrendipine,and nimodipine[J].AmJNephrol,1986,6(Suppl 1):73-80.

[13] Gualano V,Ntsikoussalabongui B,Mignot A,etal.Comparative bioavailability of two oral nimodipine formulations after administration to 24 healthy volunteers[J].ClinDrugInvest,1999,17(6):475-482.

[14] Serban C,Sahebkar A,Ursoniu S,etal.A systematic review and meta-analysis of the effect of statins on plasma asymmetric dimethylarginine concentrations[J].SciRep,2015,5(1):9902.

[15] González-García I,Mangas-Sanjuán V,Merino-Sanjuán M,etal.Invitro-invivocorrelations:general concepts,methodologies and regulatory applications[J].DrugDevIndPharm,2015,41(12):1935-1947.

[16] Liu J,Ma MC,Chow SC.Statistical evaluation of similarity factorf2as a criterion for assessment of similarity between dissolution profiles[J].DrugInfJ,1997,31(4):1255-1271.

[17] Shah VP,Tsong Y,Sathe P,etal.Invitrodissolution profile comparison-statistics and analysis of the similarity factor,f2[J].PharmRes,1998,15(6):889-896.

[18] Tsong Y,Hammerstrom T,Sathe P,etal.Statistical assessment of mean differences between two dissolution data sets[J].TherInnovRegulSci,1996,30(4):1105-1112.

[19] Zhang Y,Huo M,Zhou J,etal.DDSolver:an add-in program for modeling and comparison of drug dissolution profiles[J].AAPSJ,2010,12(3):263-271.

[20] Chinese Pharmacopoeia Commission.Chinese Pharmacopoeia:part 2(中華人民共和國(guó)藥典：二部) [S].Beijing:China Medical Science Press,2015:309-310.

[21] U.S.Food and Drug Administration.Guidance for industry.dissolution testing of immediate release solid oral dosage forms[EB/OL].https://www.fda.gov/downloads/drugs/guidancecomplianceregulatoryinformation/guidances/ucm070237.pdf.

[22] Cascone S,Lamberti G,Marra F,etal.Gastrointestinal behavior and ADME phenomena:I.Invitrosimulation[J].JDrugDelivSciTechnol,2016,35(5):272-283.

[23] Xie MF.An understanding of "the quality consistency evaluation technique for oral solid pharmaceutical preparation"-multiple dissolution curves[J].ChinJDrugEval(中國(guó)藥物評(píng)價(jià)),2013,30(2):65-66.